取實施例1制備得到的S印temfidoside化合物0. 15 g，加入少許DMSO使之充分溶 解；然后再加入〇. 5 g牛血清白蛋白粉，加水充分攪拌混勻，然后加入15%淀粉和15%果膠 作為賦形劑，充分混勻，制粒并干燥后成為顆粒劑。使用時將顆粒劑溶解于水并稀釋至所需 濃度即可。
[0035] 實施例10 制備 I g Septemfidoside 顆粒劑： 稱取實施例2制備得到的S印temfidoside化合物0. 001 g，加入少許DMSO使之充分溶 解；然后再加入0. 5 g牛血清白蛋白粉，加水充分攪拌混勻，然后加入20%淀粉和20%果膠 作為賦形劑，充分混勻，制粒并干燥后成為顆粒劑。使用時將顆粒劑溶解于水并稀釋至所需 濃度即可。
[0036] 實施例11 制備 I g Septemfidoside 乳劑： 稱取實施例3制備得到的S印temfidoside化合物0. 99 g，加入少許DMSO使之充分溶 解；然后加入10%十二烷基苯磺酸鈉作為乳化劑，充分混勻成為乳劑。使用時將乳劑稀釋至 所需濃度即可。
[0037] 實施例12 制備 I g Septemfidoside 片劑： 稱取實施例2制備得到的S印temfidoside化合物0. 4 g，加入少許DMSO使之充分溶 解；然后再加入〇. I g小麥蛋白（粉)，加水充分攪拌混勻，然后加入40%淀粉作為賦形劑，充 分混勻，干燥后壓制成為片劑。使用時將片劑溶解于水并稀釋至所需濃度即可。
[0038] 實施例13 10 μ g/ml的TMV溶液制備： 吸取已經(jīng)制備的100 μ g/ml的TMV母液Iml，加入余量的磷酸緩沖液至終體積10 ml， 即得10 μ g/ml的TMV溶液。
[0039] 實施例14 Septemfidoside對TMV侵染的預(yù)防保護作用：采用半葉枯斑法。選取健康且生長良好 的心葉煙，在暗室放置一夜。每棵煙苗挑選水平位置相同的3個葉片。將每個葉片的右半 部分均勾噴灑10 μ g/ml的Septemfidoside溶液100 μ 1，左半部分噴灑100 μ 1含相 同DMSO濃度的蒸餾水，噴灑量以葉面全部浸濕而不下滴為準(zhǔn)。4 h后將整個葉片均勻摩擦 接種10 μ g/ml的TMV 200 μ 1。以8%寧南霉素水劑1000倍液為對照。每個處理3株煙 共10片煙葉。7天后分別統(tǒng)計左右葉片的枯斑數(shù)目并根據(jù)葉片上的枯斑數(shù)計算枯斑抑制 率?；衔飳MV侵染的抑制率=[(陽性對照枯斑數(shù)一化合物處理枯斑數(shù)）/陽性對照枯 斑數(shù)Γ 100%。
[0040] 實驗結(jié)果：表1為實施例1制備得到的化合物Septemfidoside在10 μ g/ml濃度 時與對照藥物寧南霉素在心葉煙上對TMV初侵染的抑制比較。由結(jié)果可知，實施例1制備 得到的化合物S印temfidoside對TMV的平均抑制率為42. 5%，而寧南霉素對TMV的抑制率 為45. 0%。實施例1制備得到的S印temfidoside對TMV初侵染的抑制效果接近市售藥物 "寧南霉素"，也有較好的抑制效果。
[0041] 表1 實施例1制備得到的S印temfidoside與寧南霉素在心葉煙上對TMV的抑 制率比較
實施例15 分別以實施例2和實施例3制備得到的化合物S印temfidoside對TMV侵染的預(yù)防保 護作用試驗，方法與實施例14相同，結(jié)果均表明，本發(fā)明制備得到的Septemfidoside對TMV 初侵染的抑制效果接近市售藥物"寧南霉素"，也有較好的抑制效果。
[0042] 實施例16 Septemfidoside對TMV侵染的鈍化作用：采用半葉枯斑法。選取健康且生長良好的心 葉煙，在暗室放置一夜。每棵煙苗挑選水平位置相同的3個葉片。將每個葉片左半邊部分 摩擦接種一定濃度的TMV,右半部分摩擦接種含有20 μ g/ml Septemfidoside和TMV的混 合液，15 min后用無菌水沖洗干凈。7天后統(tǒng)計左右葉片的枯斑數(shù)目并計算抑制率=[(陽 性對照組枯斑數(shù)一化合物處理組枯斑數(shù)）/陽性對照組枯斑數(shù)Γ 100%。
[0043] 實驗結(jié)果：表2為實施例1制備得到的化合物Septemfidoside在20 μ g/ml濃 度時與對照藥物寧南霉素在心葉煙上對TMV的抑制率比較。由結(jié)果可知，實施例1制備得 到的化合物S印temfidoside對TMV的平均抑制率為50. 2%，而寧南霉素對TMV的抑制率為 60. 4%。實施例1制備得到的S印temfidoside通過體外對TMV的鈍化而抑制其初侵染，其 抑制效果略低于市售藥物"寧南霉素"，但是也有較好的抑制效果，平均抑制率超過了 50%。
[0044] 表2 實施例1制備得到的S印temfidoside與寧南霉素在心葉煙上對TMV的抑 制率比較
實施例17 分別以實施例2和實施例3制備得到的化合物S印temfidoside對TMV侵染的鈍化作 用試驗，方法與實施例16相同，結(jié)果均表明，本發(fā)明制備得到的Septemfidoside通過體外 對TMV的鈍化而抑制其初侵染，其抑制效果略低于市售藥物"寧南霉素"，但是也有較好的 抑制效果，平均抑制率超過了 50%。
[0045] 實施例18 Septemfidoside對TMV在煙苗上形成癥狀的影響：選取健康且生長良好的枯斑寄主心 葉煙，在暗室放置一夜。以10 μ g/ml的實施例1制備得到的S印temfidoside溶液均勻噴 灑在葉面右半葉面上，左半葉面噴灑清水作對照，噴灑量以葉面全部浸濕而不下滴為準(zhǔn)。4 h后將整個葉片均勻摩擦接種10 μ g/ml的TMV 200 μ 1。以8%寧南霉素水劑1000倍液 為對照。接種TMV后第7天觀察煙苗的癥狀。
[0046] 由于心葉煙屬于TMV的枯斑寄主，可以通過比較只接種TMV的葉片和經(jīng)化合物處 理葉片的枯斑數(shù)量及枯斑大小來判斷化合物是否抑制了 TMV的初侵染。實驗結(jié)果如圖1所 示，用10 μ g/ml的實施例1制備得到的Septemfidoside通過體外對TMV的鈍化而抑制其 初侵染，其抑制效果略低于市售藥物"寧南霉素"，但是也有較好的抑制效果，平均抑制率超 過了 50%。
[0047] Septemfidoside溶液處理煙苗后接種TMV，7天后發(fā)現(xiàn)用化合物處理的葉片上枯 斑數(shù)目顯著少于陽性對照。實施例1制備得到的化合物Septemfidoside可以顯著抑制TMV 對寄主的初侵染，從而減少病毒進入寄主細胞并進一步復(fù)制和增值的機會，起到對寄主預(yù) 防保護的作用。
[0048] 實施例19 分別以實施例2和實施例3制備得到的化合物S印temfidoside對TMV在煙苗上形成 癥狀的影響試驗，結(jié)果均表明，本發(fā)明制備的化合物Septemfidoside可以顯著抑制TMV對 寄主的初侵染，從而減少病毒進入寄主細胞并進一步復(fù)制和增值的機會，起到對寄主預(yù)防 保護的作用。
【主權(quán)項】
1. 一種環(huán)烯醚萜類化合物，其特征在于所述的環(huán)烯醚萜類化合物是從西南獐牙菜中分 離得到，其分子式為c32h46o21，結(jié)構(gòu)式為：該化合物命名為：Septemfidoside。2. -種權(quán)利要求1所述的環(huán)烯醚萜類化合物的制備方法，其特征在于是以西南獐牙菜 為原料，經(jīng)原料處理、浸膏提取、有機溶劑萃取、洗脫、分離步驟制備得到，具體包括： A、 原料處理：取陰干的西南獐牙菜粉碎過篩備用； B、 浸膏提取：將前處理后的西南獐牙菜中加入固液體積比2~5倍的體積百分濃度 75~85%的甲醇超聲提取5~10次，每次2~5h，合并提取液，過濾，減壓濃縮提取液至相對密度 為1. 2~1. 3得到浸膏； C、 有機溶劑萃?。航嘀屑尤牍桃后w積比1~3倍的水?dāng)嚢?~30min至呈懸浮狀，用與水 等體積的體積濃度95~100%的二氯甲烷溶液萃取2~5次，每次15~40min，將每次水溶萃取 液合并得到萃取液a; D、 洗脫：將萃取液a上MCI柱，用體積濃度70~80%的甲醇溶液洗脫，收集得到洗脫液 b，洗脫液b上大孔樹脂柱，以體積配比0 :1~1:0的甲醇-水溶液進行梯度洗脫，收集各部分 洗脫液并濃縮，合并相同的部分； E、 分離純化：D步驟洗脫液的3:7部分經(jīng)半制備柱分離純化，即得到所述的環(huán)烯醚萜類 化合物--Septemfidoside。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于D步驟中所述的大孔樹脂柱為D900、 D130、D101、D201 或D301 中的一種。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于D步驟中所述的甲醇-水溶液的體積 配比為 0:1，9:1，8:2,6:4,3:7 和 1:0。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于E步驟中所述的半制備柱為艾杰爾半 制備柱、HPLC半制備柱或日本唯美希半制備柱中的一種。6. -種權(quán)利要求1所述的環(huán)烯醚萜類化合物的制劑，其特征在于所述的環(huán)烯醚萜類化 合物中加入藥用輔料和/或賦形劑制成水劑、片劑、顆粒劑或微乳劑。7. -種權(quán)利要求1所述的環(huán)烯醚萜類化合物的應(yīng)用，其特征在于所述的環(huán)烯醚萜類化 合物在制備防治TMV藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種環(huán)烯醚萜類化合物及其制備方法、制劑與應(yīng)用，所述的環(huán)烯醚萜類化合物是從西南獐牙菜中分離得到，其分子式為C32H46O21，結(jié)構(gòu)式為：該化合物命名為：Septemfidoside。制備方法是以西南獐牙菜為原料，經(jīng)原料處理、浸膏提取、有機溶劑萃取、洗脫、分離步驟制備得到。制劑為所述的環(huán)烯醚萜類化合物中加入藥用輔料和/或賦形劑制成水劑、片劑、顆粒劑或微乳劑。應(yīng)用為所述的環(huán)烯醚萜類化合物在制備防治TMV藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明藥物制劑不僅對人畜無毒、無害，使用安全可靠，而且對防治TMV有較好的效果，可用于制備防治TMV的藥物制劑。
【IPC分類】C07H17/04, A01P1/00, A01N43/16, C07H1/08
【公開號】CN104910224
【申請?zhí)枴緾N201510384805
【發(fā)明人】張仲凱, 陳永對, 李干鵬, 董家紅, 張潔, 吳闊, 左馬怡, 曾亮
【申請人】云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所, 云南民族大學(xué)
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年7月4日