一種具有內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的環(huán)烯醚萜化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從川西獐牙菜的干燥全草中分離得到的一種 具有內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的環(huán)烯醚萜類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 川西猜牙菜Swertiamussotii Franch.為龍膽科猜牙菜屬植物，一年生草本，高15 ~60cm，全草入藥，產(chǎn)于西藏、云南（德欽）、四川西北部、青海西南部，分布在海拔1900~ 3000m的山坡、河谷、林下、灌叢、水邊。川西獐牙菜一直作為"藏茵陳"入藥。但是，藏茵陳是 一類治療肝膽疾病的常用藏藥的總稱，原植物有川西獐牙菜和印度獐牙菜，還包括龍膽科 獐牙菜屬、花錨屬、扁蕾屬、喉毛花屬、肋柱花屬、虎耳草科虎耳草屬數(shù)種植物，植物基源紊 亂。
[0003] 川西獐牙菜作為"藏茵陳"入藥，早在《四部醫(yī)典》、《晶珠本草》等中就有記載，歷史 悠久、用途廣泛、療效顯著，且該藥材在我國(guó)分布較廣、來源豐富，具有良好的開發(fā)利用價(jià) 值。近年來，以川西獐牙菜為主要原料、在傳統(tǒng)方劑的基礎(chǔ)上經(jīng)現(xiàn)代工藝加工而成的新藥制 劑已有晶珠肝泰舒膠囊、急肝寧片、乙肝寧片、止瀉靈、藏茵陳片、八味藏茵陳散、二十六味 藏茵陳丸、十三味藏茵陳散、紅花七味方等。
[0004] 川西獐牙菜中化學(xué)成分主要為咕噸酮類、環(huán)烯醚萜苷類、三萜類等，另外還含多 糖、揮發(fā)油、礦物質(zhì)、留體等。環(huán)烯醚萜苷類、三萜類成分是該屬的主要活性成分。川西獐牙 菜中所含有的環(huán)烯醚萜類化合物，包括環(huán)烯醚萜和裂環(huán)環(huán)烯醚萜兩類，以裂環(huán)環(huán)烯醚萜為 主。三萜類成分以齊墩果烷型五環(huán)三萜為主，主要有齊墩果酸、熊果酸等。從川西獐牙菜中 分得的環(huán)烯醚萜類有川西獐牙菜內(nèi)酯I、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷。獐牙菜苦苷和獐 牙菜苷是存在于獐牙菜屬植物中的主要活性成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從川西獐牙菜的干燥全草中分離得到的一種具有內(nèi)皮 細(xì)胞保護(hù)作用的環(huán)烯醚萜類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將川西獐牙菜的干燥全草 粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫 10個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75%乙 醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85 :1、55:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15: 1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷 鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010]進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為85%。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對(duì) 人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021 ]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023]制備方法：（a)將川西獐牙菜的干燥全草(8kg)粉碎，用85 %乙醇熱回流提取(25L X3次），合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和 水飽和的正丁醇(3L X 3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(345g)和正丁醇 萃取物；（b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體 積，再用75%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏 (133g);(c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1(8個(gè)柱體 積）、55:1 (8個(gè)柱體積）、25:1 (6個(gè)柱體積）、10 :1 (8個(gè)柱體積)和1:1 (5個(gè)柱體積）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4(27g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用 體積比為15:1(8個(gè)柱體積）、10:1(10個(gè)柱體積)和5:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2(13g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純 的化合物（I)(32mg)。
[0024] 結(jié)構(gòu)確證:無色油狀物;冊(cè)43頂3顯示[1+似]+為111/2 337.1306，結(jié)合核磁特征可 得分子式為C15H22〇7，不飽和度為5。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δ Η(ΡΡπι，DMS〇-d6，600MHz): H-1 (6 · 39， d，J = 3.0)，H-3(6.11，s)，H-5(3.32，d，J = 4.2)，H-6(3.85，d，J = 3.0)，H-7(2.27，d，J = 3.0)，H-9(2.18，t，J=4.2)，H-10(3.48，m)，H-10(3.82，m)，H-ll(5.01，s)，H-ll(5.07，s)， H-2'（2.06，m，2H)，H-3'（1.95，m)，H-4'（0.89，d，J = 7.2)，H-5'（0.91，d，J = 6.6);核磁共振 碳譜數(shù)據(jù)Sc(ppm，DMS〇-d6,150MHz) :89.3(CH，1-C)，98.8(CH，3-C)，139.9(C，4-C)，38.7(CH， 5-C)，77.1(CH，6-C)，64.2(CH，7-C)，69.6(C，8-C)，33.9(CH，9-C)，63.4(CH2，10-C)，111.6 (CH2，ll-C)，171.3(C，r-C)，42.8(CH2,2'-C)，25.2(CH，3'-C)，21.7(CH3,4'-C)，21.8(CH 3， 5'_〇;碳原子標(biāo)記參見圖1。11?光譜表明該化合物含有羥基，羰基和烯烴結(jié)構(gòu)（3457(31^ 1， 1745cm-1和 1666cm-1)。hNMR譜顯示一個(gè)異戊?；Y(jié)構(gòu)[δΗΟ · 89 (d，J = 7 · 2Hz，H-4 '），0 · 91 (d， 了 = 6.6抱，!1-5'）丄95(111，!1-3'），2.06(111，2!1，!1-2'）]，一個(gè)烯屬亞甲基質(zhì)子信號(hào)[5!15.01(8， !1-11)和5.07(8，!1-11)]，一個(gè)含氧亞甲基信號(hào)[5!13.48(111，!1-10)和3.82(111，!1-10)]，四個(gè)含 氧次甲基質(zhì)子信號(hào)[SH2.27(d，J = 3.0Hz，H-7)，3.85(d，J = 3.0Hz，H-6)，6.11(s，H-3)，6.39 ((1，1 = 3.0他，!1-1)]。13(：匪R譜顯示了 15個(gè)碳信號(hào)，包括兩個(gè)甲基信號(hào)WC21.7(C-4'）和 21.8(C-5'）]，三個(gè)亞甲基[一個(gè)含氧亞甲基SC63.4(C-