一種二萜醇酯類化合物大戟因子l2的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及化合物生產(chǎn)領(lǐng)域，尤其是一種二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 千金子系大戟科植物續(xù)隨子化地orbia lathyris的干燥成熟種子，是我國(guó)傳統(tǒng) 中藥材之一。千金子性溫，味辛，有小毒，主要功效為逐水消腫、破血消瘤，用于治療水 月中、疲飲、積滯脹滿、二便不通、血疲經(jīng)閉，外治頑癖、痛寶?；豲rbia Facto;rL2(大戟因子 蝴是二祗醇醋類化合物，分子式為〔3化2化，，分子量為642. 283,其結(jié)構(gòu)如下：
[0003]
[0004] 目前對(duì)于化地orbia化ctorLS的精制主要采用常規(guī)柱層析即硅膠柱層析和結(jié) 晶相結(jié)合的方法，其生產(chǎn)周期長(zhǎng)，產(chǎn)品收率低，而利用制備色譜法分離純化得到化地orbia 化ctorL2單體尚未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。越來越多的研究表明，多環(huán)二祗在大戟屬植物中是廣 泛存在的。該屬植物不失為一潛在的、蘊(yùn)含豐富二祗化合物的次生代謝產(chǎn)物庫(kù)。無論是在 發(fā)現(xiàn)活性先導(dǎo)化合物方面，還是在進(jìn)一步探討植物生源合成機(jī)制、闡明大戟屬植物的化學(xué) 分類等方面，大戟屬多環(huán)二祗的研究都將體現(xiàn)出重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備 方法。
[0006] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0007] -種二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，具體步驟如下：
[0008] (1)取千金子（市購(gòu)）為原料，進(jìn)行粉碎得到千金子粉；
[0009] (2)取千金子粉進(jìn)行有機(jī)試劑提取，有機(jī)試劑為乙酸乙醋，收集提取后的上清，過 濾，濃縮、干燥；
[0010] 做將步驟似得到的沉淀重復(fù)1~5次提取，收集提取后的上清，進(jìn)行過濾，濃 縮、干燥，得到QJZ初提物；
[00川 （4)取步驟做得到QJZ初提物用流動(dòng)相進(jìn)行全部溶解，所述流動(dòng)相為流動(dòng)相A或 流動(dòng)相B或兩者的組合，經(jīng)制備液相DAC正相色譜柱進(jìn)行分離，采用二元流動(dòng)相體系進(jìn)行洗 脫分離，所述流動(dòng)相A和流動(dòng)相B采用正己燒、乙醇中的一種或幾種的組合，洗脫方式梯度 洗，檢測(cè)波長(zhǎng)為210皿，收集目的峰，干燥后得到組分化合物QJZ-5,60°C鼓風(fēng)干燥箱吹干， 進(jìn)行下一步分離純化；
[001引 妨取步驟（4)得到QJZ-5組分用流動(dòng)相進(jìn)行全部溶解，所述流動(dòng)相為流動(dòng)相A或 流動(dòng)相B或兩者的組合，經(jīng)制備液相色譜柱進(jìn)行分離，采用二元流動(dòng)相體系進(jìn)行洗脫分離， 所述流動(dòng)相A和流動(dòng)相B采用正己燒、乙酸乙醋、乙醇、二氯甲燒、甲醇中的一種或幾種的組 合，洗脫方式等度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，收集目的峰，干燥后得到單體化合物QJZ-5-1， 60°C鼓風(fēng)干燥箱吹干，QJZ-5-1為最終活性目標(biāo)單體二祗醇醋類化合物。
[0013] 優(yōu)選的，上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，所述步驟（2)中有機(jī)溶 劑提取的溫度為40~60°C，提取時(shí)間為4~化，靜置一夜。
[0014] 優(yōu)選的，上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，所述步驟（3)中所述千 金子粉或沉淀與有機(jī)試劑的重量體積比按Kg:L計(jì)為1: (3~8)，將千金子粉或沉淀與有機(jī) 試劑進(jìn)行混合浸提。
[0015] 優(yōu)選的，上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，所述步驟（4)的分離 過程中一維液相色譜采用的色譜柱類型為正相硅膠軸向加壓色譜柱（InnovalSilica 150X250mm，10ym，100A)，流速：6〇〇ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，使用時(shí)柱溫為室溫或 25-40 °C。
[0016] 優(yōu)選的，上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，所述步驟（4)的分離過 程中取QJZ初提物用60-80%正己燒-乙醇溶解至濃度為Iml/ml，混合均勻后，用0. 45ym 有機(jī)膜抽濾后經(jīng)制備液相DAC正相色譜柱進(jìn)行分離。
[0017] 優(yōu)選的，上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，所述步驟（4)的分離 過程中洗脫方式具體為100 %正己燒等度洗脫5min，100 %正己燒一70 %乙醇梯度洗脫 35-50min，100% 乙醇lOmin。
[0018] 優(yōu)選的，上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，所述步驟巧）的分離過 程中二維液相色譜采用的色譜柱類型為ACC0HXAmide色譜柱（l〇X250mm，10ym，100 1)， 流速：2-4ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：210皿，使用時(shí)柱溫為室溫或25-40°C。
[0019] 優(yōu)選的，上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，所述步驟巧）的分離 過程中取則2-5組分用50%正己燒-乙醇40°(：超聲至剛好溶解至濃度為50-75111邑/1111，用 0. 45ym有機(jī)膜過濾。
[0020] 優(yōu)選的，上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，所述步驟巧）的分離過 程中洗脫方式具體為100%正己燒一90%乙醇梯度洗脫30-40min，100%乙醇lOmin。
[0021] 本發(fā)明的有益效果是：
[0022] 上述二祗醇醋類化合物大戟因子L2的制備方法，分離效率高，生產(chǎn)周期短，工藝 穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)便，成本低廉，可實(shí)現(xiàn)大量化地orbiaFactorL2(大戟因子L2)單體的高純度 分離制備，具體來說，采用二維液相色譜技術(shù)進(jìn)行從千金子中提取化地orbiaFactorLS，通 過色譜柱、溶解液、流動(dòng)相等的合理選擇，流速、洗脫方式、收集區(qū)段等工藝條件的優(yōu)化，W 及第一維和第二維的正交性而達(dá)到的互補(bǔ)分離，使得整個(gè)分離純化方法切實(shí)可行，可操作 性高，得到的化地orbia化ctorLS純度最高在98%W上。
【附圖說明】
[0023] 圖1所示的是本發(fā)明實(shí)例3從千金子中提取QJZ-5的一維高效制備液相色譜圖；
[0024] 圖2所示的是本發(fā)明實(shí)例3從千金子中提取千金子QJZ-5的一維高效制備液相色 譜分離所得饋分1號(hào)的二維高效制備液相色譜圖；
[00巧]圖3所示的是本發(fā)明得到的實(shí)例3目的單體的分析型高效液相色譜圖；
[0026] 圖4所示的是本發(fā)明所述QJZ-5-1的核磁共振分析圖，其中（a)為1D1HNMR譜 (CDC13, 400MHz)的數(shù)據(jù)圖譜，化）為1D13CNMR譜（CDC1 3,lOOMHz)的數(shù)據(jù)圖譜，（d)為服QC 數(shù)據(jù)圖譜，（C)為DEPT135數(shù)據(jù)圖譜，（e)為COSY數(shù)據(jù)圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合附圖及具體實(shí) 施方式對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。除非另有說明，本發(fā)明使用的所有科 學(xué)和技術(shù)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域人員通常理解的相同含義。
[002引 實(shí)施例1
[0029] -、QJZ初提物的獲得
[0030] 1、粉碎：
[0031] 取千金子為原料，放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎。
[0032] 2、有機(jī)試劑提?。?br>[0033] 對(duì)千金子粉末進(jìn)行有機(jī)試劑提取提取，=次連續(xù)提取，每次提取時(shí)間為化（其中 加熱至60度后，再加熱化）。具體的：
[0034] 第一次有機(jī)試劑提?。?. 5kg千金子粉末加入2化有機(jī)試劑，有機(jī)試劑為乙酸乙 醋，充分?jǐn)埌柚亮弦壕唬瑹o明顯塊狀物，開啟水浴鍋，提取化，提取結(jié)束后，收集上清液，用 濾紙過濾，上清于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮后轉(zhuǎn)移至60°C恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥，得到QJZ初提 物，沉淀待用；
[0035] 第二次有機(jī)試劑提?。旱谝淮翁崛〕恋砑尤?化有機(jī)試劑，有機(jī)試劑為乙酸乙醋， 充分?jǐn)埌柚亮弦壕?，無明顯塊狀物，開啟水浴鍋，提取化，提取結(jié)束后，按第一次提取的方 法進(jìn)行處理，得到QJZ初提物，沉淀待用；
[0036] 第=次有機(jī)試劑提?。旱诙翁崛〕恋砑尤?，有機(jī)試劑，有機(jī)試劑為乙酸乙醋，充 分?jǐn)埌柚亮弦壕唬瑹o明顯塊狀物，開啟水浴鍋，提取化，提取結(jié)束后，按第一次提取的方法 進(jìn)行處理，得到QJZ8初提物，沉淀驚干；
[0037] 二、QJZ-5 的獲得
[0038] 將QJZ初提物組分用流動(dòng)相進(jìn)行完全溶解，配制成ImL/血的溶液，經(jīng)制備液相DAC 150正相色譜柱（25(tomX150臟，10ym，100友）進(jìn)行分離，檢測(cè)波長(zhǎng)210皿，采用A、B二元流 動(dòng)相體系進(jìn)行洗脫分離，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B采用正己燒和乙醇的組合，洗脫方式為100% 正己燒5111111，100%正己燒一70%乙醇梯度洗脫40111111，100%乙醇10111111，流速為600血/ min,進(jìn)樣量170血。收集18-22min饋分，經(jīng)干燥后得到組分QJZ-5。
[003引 S、QJZ-5-1 的獲得
[0040]將QJZ-5組分用用50%的乙醇-正己燒溶液進(jìn)行完全溶解，配制成60mg/血的 溶液，經(jīng)制備液相色譜柱（ACC0HDiol，250mmX150mm，10ym，100《）進(jìn)行分離，檢測(cè)波長(zhǎng) 210nm，采用A、B二元流動(dòng)相體系進(jìn)行洗脫分離，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B采用正己燒和乙醇的 組合，洗脫方式為100% -85%正己燒一乙醇等度洗脫21min，100%乙醇9min，流速為3血/ min,進(jìn)樣量80yL收集19-24min饋分，經(jīng)液相色譜分析，純度為92 %。二維制備化地orbia 化ctorL2粗品中化地orbia化ctorL2含量為38 %。
[00川 實(shí)施例2
[004引一、QJZ初提物的獲得
[004引1、粉碎：
[0044] 取千金子為原料，放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎。
[0045] 2、有機(jī)試劑提?。?br>[0046] 對(duì)千金子粉末進(jìn)行有機(jī)試劑提取提取，=次連續(xù)提取，每次提取時(shí)間為化（其中 加熱至60度后，再加熱化）。具體的：
[0047] 第一次有機(jī)試劑提?。?. 5kg千金子粉末加入2化有機(jī)試劑，有機(jī)試劑為乙酸乙 醋，充分?jǐn)埌柚亮弦壕?，無明顯塊狀物，開啟水浴鍋，提取化，提取結(jié)束后，收集上清液，用 濾紙過濾，上清于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮后轉(zhuǎn)移至60°C恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥，得到QJZ初提 物，沉淀待用；
[0048] 第二次有機(jī)試劑提取：第一次提取沉淀加入1化有機(jī)試劑，有機(jī)試劑為乙酸乙醋， 充分?jǐn)埌柚亮弦壕?，無明顯塊狀物，開啟水浴鍋，提取化，提取結(jié)束后，按第一次提取的方 法進(jìn)行處理，得到QJZ初提物，沉淀待用；
[0049] 第=次有機(jī)試劑提?。旱诙翁崛〕恋砑尤?，有機(jī)試劑，有機(jī)試劑為乙酸乙醋，充 分?jǐn)埌柚亮弦壕唬瑹o明顯塊