一種新的杜松烷型倍半萜類(lèi)化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種新的杜松烷型倍半萜類(lèi)化合物及其制備方法和醫(yī)藥用途。該化合物為首次報(bào)道，是一種結(jié)構(gòu)新穎的杜松烷型倍半萜類(lèi)化合物，可以從九里香的干燥葉中提取、分離純化得到。體外試驗(yàn)證明該化合物能夠使H2O2應(yīng)激損傷后心肌細(xì)胞存活率明顯增加，培養(yǎng)液中LDH活性明顯降低，可以用來(lái)開(kāi)發(fā)成心肌保護(hù)的藥物。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種新的杜松燒型倍半瞄類(lèi)化合物及其制備方法和醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從九里香的干燥葉中分離得到的一種具有屯、 肌保護(hù)作用的杜松燒型倍半祗類(lèi)化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 九里香Murraya exotica L.為蕓香科九里香屬植物，主要分布在我國(guó)云南、貴州、 湖南、廣東、廣西、福建、海南、臺(tái)灣等省區(qū)，W及亞洲一些熱帶及亞熱帶地區(qū)，其氣香，味苦、 辛，有麻舌感，具有行氣止痛、活血散疲之功效，用于胃痛、風(fēng)濕搏痛，也用于治療牙痛、跌撲 腫痛、蟲(chóng)蛇咬傷。很早W前，我國(guó)南方就將九里香作為一種民間用藥，用于治療各種病癥，特 別是炎性病變和鎮(zhèn)痛。
[0003] 近年來(lái)，中外學(xué)者對(duì)九里香的化學(xué)成分進(jìn)行了大量研究，從其葉、根皮、果實(shí)等部 位中分離得到了多種化合物，主要包括香豆素類(lèi)、黃酬類(lèi)、生物堿類(lèi)W及揮發(fā)油等。九里香 含有大量的香豆素類(lèi)成分，運(yùn)類(lèi)成分的常見(jiàn)特征為在7-甲氧基或5,7-二甲氧基香豆素骨架 的C8位帶有異戊二締單位，W氧化、醋化或骨架重排等多種形式存在。九里香含有多種黃酬 類(lèi)化合物，還含有黃酬巧類(lèi)成分。九里香的葉中含有大量的黃酬類(lèi)和香豆素類(lèi)化合物，而九 里香的根、皮中主要含有生物堿類(lèi)成分。揮發(fā)油類(lèi)是九里香的主要化學(xué)成分之一。其揮發(fā)油 成分的含量因品種、采收季節(jié)、地區(qū)不同而存在差異，含量的高低影響九里香的藥材質(zhì)量及 臨床療效。
[0004] 現(xiàn)代藥理研究表明九里香具有殺蟲(chóng)、消炎鎮(zhèn)痛、抗菌及抗氧化等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從九里香的干燥葉中分離得到的一種具有屯、肌保護(hù)作 用的杜松燒型倍半祗類(lèi)化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008；
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：（a)九里香的干燥葉粉碎，用75 ~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的 正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟(a)中乙酸 乙醋萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫12個(gè)柱體 積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟(b)中75%乙醇洗脫物 浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、50:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1 和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟(a)中，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹(shù)脂為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。
[0012] -種藥物組合物，該藥物組合物含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物（I)和 藥學(xué)上可接受的載體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備屯、肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備屯、肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對(duì) 人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019 ]圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來(lái)源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023] 制備方法：（a)將九里香的干燥葉(8kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取(2化X3次）， 合并提取液，濃縮至無(wú)醇味(3L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水飽和的 正下醇（化X3次)萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（363g)和正下醇萃取物； (b)步驟(a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用 75%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（145g); (C)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個(gè)柱體積）、50:1 (8個(gè)柱體積）、30:1(6個(gè)柱體積）、15:1(8個(gè)柱體積)和1:1(5個(gè)柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯 度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分4(47g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為 20:1(8個(gè)柱體積）、15:1(10個(gè)柱體積)和5:1(6個(gè)柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3 個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2(26g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度 為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物（I)(39mg)。
[0024] 結(jié)構(gòu)確證：無(wú)色立方晶（甲醇），烙點(diǎn)189-19rC ;HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z 257.1510,結(jié)合核磁特征可得分子式為Cl出22〇2,不飽和度為5。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)SH(ppm， DMS0-d6,400MHz)，H-l(2.24，m)，H-2(2.81，m)，H-2(3.07，m)，H-5(5.61，br，d，J=4.2)，H-6 (2.02，m)，H-7(1.71，m)，H-8(1.91，m)，H-8(2.18，m)，H-9(5.36，br，s)，H-ll(1.93，m)，H-12 (3.32，m)，H-12(3.59，m)，H-13(0.84，d，J = 7.0)，H-14(2.35，s)，H-15(1.64，s);核磁共振 碳譜數(shù)據(jù)Sc(ppm，DMS0-d6, lOOMHz) :39.6(CH，1-C)，39.7(C此，2-C)，199.1 (C，3-C) ,135.9 (C，4-C)，128.3(CH，5-C)，37.2(CH，6-C)，35.1(CH，7-C)，25.0(CH2,8-C)，121.8(CH，9-C)， 136.5(C，10-C)，35.6(CH，11-C)，66.4(CH2，12-C)，10.5(CH3，13-C)，17.3(CH3，14-C)，21.5 (畑3，15-C);碳原子標(biāo)記參見(jiàn)圖1。紅外光譜表明該化合物含有徑基和幾基（3300cm-i和 1746畑1-1)。1護(hù)醒財(cái)普顯示了^個(gè)甲基信號(hào)[姐0.84((1，1 = 7.0化，]\16-13)，1.64(3，]\16-15)和 2.35(3，16-14)]，一個(gè)含氧亞甲基信號(hào)[姐3.32(111，護(hù)12)和3.59(111，護(hù)12)]，兩個(gè)締屬次甲 基信號(hào)[化5.36(br，s，H-9)和5.61化'，(1，1 = 4.2化，護(hù)5)]。13(：-醒財(cái)普顯示出15個(gè)共振碳信 號(hào)，包括S個(gè)甲基，S個(gè)亞甲基（一個(gè)含氧亞甲基SC66.4)，六個(gè)次甲基（兩個(gè)締屬次甲基5 (：121.8和128.3)，^及^個(gè)季碳(一個(gè)幾基碳此199.1，兩個(gè)締控季碳此135.9和136.5)。1護(hù) NMR譜中，低場(chǎng)信號(hào)姐1.64和2.35(各3H，s)表明它們?yōu)榕c雙鍵相連的甲基。Ih-Ih COSY譜中 H-Il與此-12和Me-13的相關(guān)性表明C-Il位上連有一個(gè)甲基。麗BC譜中含氧亞甲基信號(hào)[S 冊(cè).32(m，H-12)和3.59(m，H-12)]與C-11(SC35.6)和C-13(SC10.5)的相關(guān)性，W及含氧亞甲 基信號(hào)（SC66.4)表明C-12為徑基亞甲基，與C-11相連。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜， W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類(lèi)型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò) ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致(圖2)。
[0025] 實(shí)施例2:化合物（I)藥理作用試驗(yàn) [002引一、材料和儀器
[0027]新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF級(jí)），雌雄不拘，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、提供 (試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證:SCXK桂2009-0002)?；衔铮↖)(純度>98% )為自制。胎牛血清購(gòu)于 Hy Clone公司，DMEM培養(yǎng)基購(gòu)于GIBCO公司，二甲基亞諷(DMSO)、0.25 %膜酶(含抓TA)購(gòu)于 Solarbio公司，5-漠脫氧尿巧（5-Brdu)、四甲基偶氮挫鹽(MTT)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，LDH測(cè) 試盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所，NOS試劑盒(分型）南京建成生物工程研究所，ATP酶試 劑盒(南京建成生物工程研究所），cTnI酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試試劑盒、CK-MB酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試 試劑盒購(gòu)于武漢優(yōu)爾生。
[002引 C02培養(yǎng)箱（Thermo化rma)，CKX41相差顯微鏡（OLUMPUS) ,Model 450自動(dòng)酶標(biāo)儀 (美國(guó)Bio-Rad公司），96孔板(JET)，722sp可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海棱光技術(shù)有限公司），可調(diào) 式微量移液器(Thermo化rma)，單人單面超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備總廠），XD-IOl型倒置 生物顯微鏡（南京江南光電），DW-40L262(低溫保存箱）、DW-8化628立式超低溫保存箱 化aier特種電器有限公司），手提式壓力蒸汽滅菌器、立式蒸汽滅菌器(廣州華南醫(yī)藥器械 有限公司），JA2003微量天平（上海第二天平儀器廠），5415D型低溫高速離屯、機(jī)（德國(guó) 化pendorf) ,LQP-B-4顆粒制冰機(jī)(上海安亭）。
[0029] 二、試驗(yàn)方法
[0030] 1、屯、肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)
[0031] 具體步驟：（1)超凈工作臺(tái)中，將乳鼠放置于250mL燒杯中，噴W75%酒精進(jìn)行皮膚 消毒。（2)左手捏住鼠背部，右手持無(wú)菌眼科剪在胸骨正中偏左平劍突刺入胸腔，抬起剪刀 頭端，向前挑起剪一縱向切口，再平劍突往左右剪開(kāi)約2cm，左手捏住背部皮膚擠壓胸部，就 可W見(jiàn)跳動(dòng)的屯、臟，換無(wú)菌彎綴將屯、臟取出，置于冷的PBS溶液培養(yǎng)皿中。用無(wú)菌眼科剪和 綴除去屯、房、結(jié)締組織及細(xì)胞膜后將屯、臟放入IOmL西林瓶中，用冷PBS溶液反復(fù)沖洗S遍， 洗凈殘血。（3)用無(wú)菌彎剪剪碎屯、臟(約1~2mm大?。尤肜銹BS溶液，并沖洗無(wú)菌彎綴，用 吸管將小組織塊懸液轉(zhuǎn)移至離屯、管中，冷PBS再清洗兩遍。（4)第一、二次消化:按預(yù)溫好的 膜酶與組織塊W2:l的比例緩慢沿離屯、管壁緩慢加入，室溫下W無(wú)菌吸管反復(fù)輕柔吹打幫 助消化，觀察組織塊出現(xiàn)絲狀物，上清變渾濁，根據(jù)濁度停止消化，吸出第一、二次消化的上 清液，棄去。（5)繼續(xù)消化，步驟同(4)，直至小組織炔基本消化完全為止。收集細(xì)胞懸液。（6) 將所有細(xì)胞懸液過(guò)200目細(xì)胞篩，加入含10 %胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液終止消化，冷PBS洗涂， 1 OOOrpm離屯、2次，每次Smin，棄去上清。（7)臺(tái)吩蘭計(jì)數(shù)：（6)所得沉淀中加入適量DMEM培養(yǎng) 基，制成細(xì)胞懸液，取0.4%臺(tái)吩蘭染液10化與細(xì)胞懸液90化混勻，室溫放置2~3min，將清 潔的細(xì)胞計(jì)數(shù)板放置在倒置顯微鏡臺(tái)上，在蓋玻片邊緣滴1~2滴已染色好的細(xì)胞懸液，鏡 檢可見(jiàn)圓形分散的細(xì)胞分布在各處，活細(xì)胞整體完整，透明而不著色，而不健康細(xì)胞會(huì)著 色，計(jì)數(shù)時(shí)除去，計(jì)數(shù)四大方格的細(xì)胞數(shù)。壓線的細(xì)胞只記左線和上線者，細(xì)胞團(tuán)按一個(gè)細(xì) 胞計(jì)數(shù)，按W下公式計(jì)算懸液的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/mL=四大方格細(xì)胞數(shù)總數(shù)/4 X 10000 X稀 釋倍數(shù)(8)按3 X IO5~5 X 105細(xì)胞密度接種到培養(yǎng)瓶中，放入95 %〇2，5 % C〇2培養(yǎng)箱中差速 貼壁約化。差速貼壁后的細(xì)胞懸液接種至培養(yǎng)板中，前4加加入終濃度為lOOwnol/L的5- Brdu, W抑制非屯、肌細(xì)胞的生長(zhǎng)，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。每2地進(jìn)行換液。
[0032] 2、過(guò)氧化氨誘導(dǎo)屯、肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型的建立
[0033] 選取培養(yǎng)3~4天、生長(zhǎng)良好、搏動(dòng)規(guī)律的屯、肌細(xì)胞，吸棄孔內(nèi)舊培養(yǎng)基，換新培養(yǎng) 基，同時(shí)加入終濃度為eOOwiiol/L的出化，重置于C〇2培養(yǎng)箱中，常規(guī)培養(yǎng)2地，建立出化誘發(fā)屯、 肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型。
[0034] 3、實(shí)驗(yàn)分組及給藥
[0035] 化合物（I)給藥設(shè)低、中、高S個(gè)劑量組，濃度分別為0.6、6和60皿〇1凡；陽(yáng)性藥物 維拉帕米(Verapamil)組的終濃度為25皿ol/L。選擇生長(zhǎng)良好、搏動(dòng)規(guī)律的細(xì)胞，隨機(jī)分為： 正常（con化01);模型(Mode 1);陽(yáng)性藥物組;溶媒對(duì)照組(DMSO);化合物（I)低、中、高劑量， 共7組，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。各組均于造模前1化吸去孔內(nèi)舊培養(yǎng)液，換成化nks液W使各組細(xì)胞 同步生長(zhǎng)（即平衡），各給藥組在造模前加入相應(yīng)藥物預(yù)解化。除正常組外，平衡后的各組細(xì) 胞均按上方法加入建立屯、肌細(xì)胞此化損傷模型。造模結(jié)束后吸取各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液，-20 °(：冰箱保存待測(cè)生化指標(biāo)。各組屯、肌細(xì)胞則按常規(guī)方法加入適量0.125%膜蛋白酶消化，4 °C、800rpm離屯、lOmin，棄去上清，W生理鹽水制成2X106~3X106細(xì)胞懸液，-8(rC冰箱保存 備用。
[0036] 4、MTT法測(cè)定屯、肌細(xì)胞存活力
[0037] 用96孔板培養(yǎng)的各組屯、肌細(xì)胞于造模后加入10化MTT繼續(xù)培養(yǎng)地，傾去培養(yǎng)液， 加入DMSO 15化L，平板震蕩器震蕩5min，使結(jié)晶物充分溶解。W化nks液培養(yǎng)調(diào)零，用酶標(biāo)儀 W570/630nm雙波長(zhǎng)測(cè)定去除本底光吸收值后的吸光度(OD值），重復(fù)3次。
[003引5、屯、肌細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活力的測(cè)定
[0039] 實(shí)驗(yàn)原理:乳酸脫氨酶(LDH)能催化乳酸生成丙酬酸，丙酬酸與2,4-二硝基苯阱反 應(yīng)生成丙酬酸二硝基苯腺，在堿性溶液中呈棟紅色，通過(guò)比色可求出酶活力。樣品前處理， 按照下表進(jìn)行。依照試劑盒要求將輔酶I、堿性溶液適當(dāng)稀釋。
[0040]
[0041 ] 計(jì)算屯、肌細(xì)胞培養(yǎng)液中LD田舌力：LD田舌力(U/L) = (ODu-ODcV(ODs-ODb) X Cs XNX 1000 dN為培養(yǎng)液的稀釋倍數(shù)。
[0042] 6、統(tǒng)計(jì)分析
[0043] 數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（玉±8)表示，應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)，計(jì) 量資料組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)。
[0044] S、結(jié)果及結(jié)論
[0045] 1、過(guò)氧化氨損傷前后屯、肌細(xì)胞活力
[0046] 正常組的細(xì)胞存活率按100%計(jì)，試驗(yàn)結(jié)果顯示:也〇2應(yīng)激損傷后屯、肌細(xì)胞存活率 較正常組屯、肌細(xì)胞下降（P<〇.05) ;DMS0溶媒組與模型組相比較，DMSO對(duì)屯、肌細(xì)胞存活率無(wú) 影響(P〉0.05);而化合物（I)各給藥組均能使屯、肌細(xì)胞存活率明顯增加(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表 1 (沖<0.0 lvs正常組，胖<0.0 lvs模型組，▲?〉0.05vs模型組）。
[0047] 2、屯、肌細(xì)胞過(guò)氧化氨損傷培養(yǎng)液中LDH的活性
[004引與正常組比，模型組LDH含量明顯增高(P<0.01);與模型組比較，溶媒組的L畑含量 無(wú)顯著性差異(P〉0.05)，而化合物（I)低、中、高劑量組、陽(yáng)性藥物組的LDH活性明顯降低(P< 0.0 l)。見(jiàn)表2(沖<0.0 lvs正常組，胖<0.0 lvs模型組，▲?〉0.05vs模型組）。
[0049] 提示化合物(I)可W進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)成屯、肌細(xì)胞保護(hù)的藥物。
[0050] 表1化合物（I)對(duì)也〇2應(yīng)激損傷后屯、肌細(xì)胞存活率的影響(x± S，n = 6) 「0化11
[0054] 實(shí)施例3
[0055]片劑的制備:按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有機(jī)酸如酒石酸、或巧樣 酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或憐酸制成的鹽，按其與賦形劑重量比為1:9的 比例加入賦形劑，制粒壓片。
[0056] 實(shí)施例4
[0057] 口服液制備:按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有機(jī)酸如酒石酸、或巧樣 酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或憐酸制成的鹽，按常規(guī)口服液制法制成口服 液。
[0化引實(shí)施例5
[0059] 膠囊劑或顆粒劑的制備：按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有機(jī)酸如酒 石酸、或巧樣酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或憐酸制成的鹽，按其與賦形劑重 量比為1:9的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑。
[0060] 實(shí)施例6
[0061] 注射液的制備:按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有機(jī)酸如酒石酸、或巧 樣酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或憐酸制成的鹽，按常規(guī)加注射用水，精濾， 灌封滅菌制成注射液。
[0062] 實(shí)施例7
[0063] 無(wú)菌粉針的制備:按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有機(jī)酸如酒石酸、或 巧樣酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或憐酸制成的鹽，將其溶于無(wú)菌注射用水 中，攬拌使溶，用無(wú)菌抽濾漏斗過(guò)濾，再無(wú)菌精濾，分裝于安飯中，低溫冷凍干燥后無(wú)菌烙封 得粉針劑。
[0064]上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物α)，2. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于包含以下操作步驟：（a)將九里 香的干燥葉粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙 酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙醇 洗脫12個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75% 乙醇洗脫物浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80 :1、50 :1、30 :1、15:1和1:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分;（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比 為20:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中，用80%乙醇熱 回流提取，合并提取液。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹(shù)脂為AB-8型 大孔吸附樹(shù)脂。5. -種藥物組合物，其特征在于:該藥物組合物含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化 合物(I)和藥學(xué)上可接受的載體。6. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備心肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。7. 權(quán)利要求5所述的藥物組合物在制備心肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P9/00GK105924341SQ201610521261
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年7月4日
【發(fā)明人】鄭飛珍
【申請(qǐng)人】鄭飛珍