本發(fā)明涉及一種牛樟芝素的制備方法。

背景技術(shù)：

antrocin(牛樟芝素)是由姜宏哲(hung-chenchiang)教授和他的合作者于1994年從中國臺(tái)灣牛樟芝(又名牛樟菇，非褶菌目、多孔科、多年生蕈菌類，學(xué)名為antrodiacamphorata)中分離出來的，分子結(jié)構(gòu)式為

牛樟芝的活性成分三萜類化合物除個(gè)別特殊外在其他薄孔菌屬的真菌中也均有發(fā)現(xiàn)。但是倍半萜化合物牛樟芝素卻唯有在野生牛樟芝的子實(shí)體中才能分離到，人工手段培養(yǎng)的牛樟芝尚未有報(bào)道分離得到牛樟芝素。

從結(jié)構(gòu)上看，牛樟芝素是一種倍半萜稀內(nèi)酯，具備一個(gè)6.6.5三環(huán)結(jié)構(gòu)，包含三個(gè)手性中心及兩個(gè)全碳取代中心。2011年，臺(tái)灣朝陽科技大學(xué)的曾耀銘教授對(duì)牛樟芝素的生物活性進(jìn)行研究。研究發(fā)現(xiàn)該分子具有選擇性抑制人轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞mda-mb-231細(xì)胞系的生理活性，其ic50值為0.6μm。2013年，曾耀銘教授又發(fā)現(xiàn)牛樟芝素在抑制人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞有很好的抑制增殖作用，對(duì)具野生型表皮生長因子受體(egfr)的肺癌細(xì)胞h441的ic50值為0.75μm，而對(duì)具突變型egfr的h1975肺癌細(xì)胞的ic50值0.83μm。

牛樟芝素具有良好的潛在抗癌活性，目前的人工合成報(bào)道，而且還未見有不對(duì)此合成的報(bào)道，因此目前的合成技術(shù)尚無法提供充足的牛樟芝素，以對(duì)其進(jìn)行深入的活性及構(gòu)效關(guān)系、毒理病理研究。因此，急需找到一種可以大量合成牛樟芝素的方法，以便提供足夠的牛樟芝素來研究其病理毒理、構(gòu)效關(guān)系，并且通過結(jié)構(gòu)修飾來闡明和改進(jìn)它的生物活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，有必要提供一種可以大量合成的牛樟芝素的牛樟芝素的制備方法，通過以化合合成手段大量的得到牛樟芝素，以便對(duì)牛樟芝素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和活性研究。

一種牛樟芝素的制備方法，包括如下步驟：

步驟一、將結(jié)構(gòu)式為的鼠尾草酸溶解于第一有機(jī)溶劑中，然后冷卻到-78℃，鼓氣通入臭氧，充分反應(yīng)后得到第一反應(yīng)液；

步驟二、向所述第一反應(yīng)液中加入硼氫化鈉，劇烈攪拌并充分反應(yīng)，反應(yīng)完成后純化得到結(jié)構(gòu)式為的化合物a，其中，所述鼠尾草酸與所述硼氫化鈉的摩爾比為1：3～10；

步驟三、在-78℃的條件下，將所述化合物a溶解于第二有機(jī)溶劑中，分批次投入碎鈉塊，攪拌并充分反應(yīng)，得到含有結(jié)構(gòu)式為的化合物b和結(jié)構(gòu)式為的化合物c的第二反應(yīng)液，其中，所述化合物a與所述碎鈉塊的摩爾比為1：5～20；

步驟四、除去所述第二反應(yīng)液中的有機(jī)溶劑后酸化并萃取所得產(chǎn)物，接著除去萃取劑并加入第三有機(jī)溶劑，然后加入對(duì)甲苯磺酸，于60℃～100℃下充分反應(yīng)，反應(yīng)完成后純化得到結(jié)構(gòu)式為的化合物d，其中，所述對(duì)甲苯磺酸和所述化合物a的摩爾比為0.1～0.5：1；

步驟五、將所述化合物d溶解于第四有機(jī)溶劑中，加入碘、三苯基膦和咪唑，攪拌并充分反應(yīng)，反應(yīng)完成后純化得到結(jié)構(gòu)式為的化合物d1，其中，所述碘與所述化合物d的摩爾比為1.1～1.6：1，所述三苯基膦與所述化合物d的摩爾比為1～1.3：1，所述咪唑與所述化合物d的摩爾比為1.2～1.7：1；以及

步驟六、將所述化合物d1溶解于第五有機(jī)溶劑中，加入第一有機(jī)堿，在80℃下攪拌并充分反應(yīng)，反應(yīng)完成后純化得到牛樟芝素。

在一個(gè)實(shí)施例中，步驟一中，所述第一有機(jī)溶劑為二氯甲烷、甲醇或體積比為1～6：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體；

步驟一中，所述鼓氣通入臭氧的操作的時(shí)間為1h。

在一個(gè)實(shí)施例中，所述第一有機(jī)溶劑為體積比為3：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體、體積比為4：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體或體積比為5：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體。

在一個(gè)實(shí)施例中，步驟二中，所述劇烈攪拌并充分反應(yīng)的操作的時(shí)間為1h。

在一個(gè)實(shí)施例中，步驟三中還包括在所述分批次投入碎鈉塊的操作之后，加入低元醇的操作，所述低元醇的碳原子數(shù)為1～4。

在一個(gè)實(shí)施例中，步驟三中，所述第二有機(jī)溶劑為液氨或體積比為5～10：1的液氨與四氫呋喃的混合液體；

步驟三中，所述劇烈攪拌并充分反應(yīng)的操作的時(shí)間為1h。

在一個(gè)實(shí)施例中，步驟四中，所述酸化的操作所用的酸為鹽酸或醋酸，所述酸化的操作為酸化至ph為1～2；

步驟四中，所述萃取的操作中，所述萃取劑為乙酸乙酯或二氯甲烷。

在一個(gè)實(shí)施例中，步驟四中，所述第三有機(jī)溶劑為甲苯、苯或四氫呋喃；

步驟四中，所述100℃下充分反應(yīng)的時(shí)間為1h～3h。

在一個(gè)實(shí)施例中，步驟五中，所述第四有機(jī)溶劑為四氫呋喃或二氯甲烷；

步驟五中，所述攪拌并充分反應(yīng)的操作的時(shí)間為1h～3h。

在一個(gè)實(shí)施例中，步驟六中，所述第一有機(jī)堿為1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯或乙醇鈉；步驟六中，所述在80℃下攪拌并充分反應(yīng)的操作的時(shí)間為3h。

這種牛樟芝素的制備方法操作簡(jiǎn)單，步驟簡(jiǎn)短，易于工業(yè)化生產(chǎn)，通過步驟一的臭氧氧化切斷反應(yīng)、步驟三的伯奇還原反應(yīng)、步驟四酯縮合反應(yīng)以及步驟五和通過步驟六的碘代-消除反應(yīng)，快速地構(gòu)建了分子的骨架結(jié)構(gòu)，從而完成了牛樟芝素的不對(duì)稱全合成。這種牛樟芝素的制備方法可以大量合成的牛樟芝素，合成的牛樟芝素可以用來研究其病理毒理、構(gòu)效關(guān)系，并且通過結(jié)構(gòu)修飾來闡明和改進(jìn)它的生物活性。

附圖說明

圖1為一實(shí)施方式的牛樟芝素的制備方法的制備方法的流程圖。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式做詳細(xì)的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實(shí)施的限制。

本發(fā)明的牛樟芝素的制備方法，其各步反應(yīng)均為在氮?dú)獗Ｗo(hù)下、干燥的溶劑中、無水的條件下進(jìn)行。

本發(fā)明的牛樟芝素的制備方法中，所有使用的化學(xué)試劑都是商業(yè)可得的原料，無須進(jìn)一步處理。

如圖1所示的一實(shí)施方式的牛樟芝素的制備方法，包括如下步驟：

s10、將鼠尾草酸溶解于第一有機(jī)溶劑中，然后冷卻到-78℃，鼓氣通入臭氧，充分反應(yīng)后得到第一反應(yīng)液。

鼠尾草酸的結(jié)構(gòu)式為

s10中，第一有機(jī)溶劑可以為二氯甲烷、甲醇或體積比為2～6：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體。

s10中，鼓氣通入臭氧的操作的時(shí)間為1h。

優(yōu)選的，第一有機(jī)溶劑為體積比為3：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體、體積比為4：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體或體積比為5：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體。

特別優(yōu)選的，第一有機(jī)溶劑為體積比為3：1的二氯甲烷和甲醇的混合液體。

s20、向s10得到的第一反應(yīng)液中加入硼氫化鈉，劇烈攪拌并充分反應(yīng)，反應(yīng)完成后純化得到化合物a。

化合物a的結(jié)構(gòu)式為

s20中，鼠尾草酸與硼氫化鈉的摩爾比為1：3～10。

s20中，劇烈攪拌并充分反應(yīng)的操作的時(shí)間為1h。

s20中，反應(yīng)完成后純化得到化合物a的操作為：加入飽和的氯化銨溶液淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮，然后用硅膠柱層析純化，得到化合物a。

s30、在-78℃的條件下，將s20得到的化合物a溶解于第二有機(jī)溶劑中，分批次投入碎鈉塊，攪拌并充分反應(yīng)，得到含有化合物b和c的第二反應(yīng)液。

化合物b結(jié)構(gòu)式為化合物c的結(jié)構(gòu)式為

s30中，化合物a與碎鈉塊的摩爾比為1：5～20；

s30中，第二有機(jī)溶劑為液氨或體積比為5：1～10：1的液氨與四氫呋喃的混合液體。

優(yōu)選的，第二有機(jī)溶劑為液氨。

s30中，劇烈攪拌并充分反應(yīng)的操作的時(shí)間為1h。

s30中還包括在分批次投入碎鈉塊的操作之后，加入低元醇的操作。低元醇的碳原子數(shù)為1～4。

低元醇與化合物a的摩爾比為5～10：1。

低元醇可以為甲醇、乙醇、叔丁醇或異丙醇。

優(yōu)選的，低元醇可以為乙醇。

s40、除去s30得到的第二反應(yīng)液中的有機(jī)溶劑后酸化并萃取所得產(chǎn)物，接著除去萃取劑并加入第三有機(jī)溶劑，然后加入對(duì)甲苯磺酸，于100℃下充分反應(yīng)，反應(yīng)完成后純化得到化合物d。

化合物d的結(jié)構(gòu)式為

s40中，對(duì)甲苯磺酸和化合物a的摩爾比為0.1～0.5：1。

s40中，酸化的操作所用的酸為鹽酸或醋酸，酸化的操作為酸化至ph為1～2。

優(yōu)選的，酸化的操作所用的酸為鹽酸。

s40中，萃取的操作中，萃取劑為乙酸乙酯或二氯甲烷。

優(yōu)選的，萃取劑為乙酸乙酯。

s40中，第三有機(jī)溶劑為甲苯、苯或四氫呋喃；

s40中，100℃下充分反應(yīng)的時(shí)間為1h～3h。

s40中的反應(yīng)，在得到化合物d的同時(shí)還會(huì)得到結(jié)構(gòu)式為的化合物e。

通過在s30中加入低元醇，可以增加s40得到的反應(yīng)物中化合物d的比例，提高了產(chǎn)率。

s40中，反應(yīng)完成后純化得到化合物d的操作為：加入飽和碳酸氫鈉溶液，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮，然后用硅膠柱層析純化，得到化合物d。

s50、將s40得到的化合物d溶解于第四有機(jī)溶劑中，加入碘、三苯基膦和咪唑，攪拌并充分反應(yīng)，反應(yīng)完成后純化得到化合物d1。

化合物d1的結(jié)構(gòu)式為

s50中，碘與化合物d的摩爾比為1.1～1.6：1，三苯基膦與化合物d的摩爾比為1～1.3：1，咪唑與化合物d的摩爾比為1.2～1.7：1。

s50中，第四有機(jī)溶劑為四氫呋喃或二氯甲烷。

優(yōu)選的，第四有機(jī)溶劑為四氫呋喃。

s50中，攪拌并充分反應(yīng)的操作的時(shí)間為3h。

反應(yīng)完成后純化得到化合物d1的操作為：加入飽和氯化銨溶液淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮，然后用硅膠柱層析純化，得到化合物d1。

s60、將s50得到的化合物d1溶解于第五有機(jī)溶劑中，加入第一有機(jī)堿，在80℃下攪拌并充分反應(yīng)，反應(yīng)完成后純化得到牛樟芝素。

s60中，第五有機(jī)溶劑為甲苯、苯或乙醇。

s60中，第一有機(jī)堿為1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯或乙醇鈉。

優(yōu)選的，第一有機(jī)堿為1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯。

s60中，在80℃下攪拌并充分反應(yīng)的操作的時(shí)間為3h。

這種牛樟芝素的制備方法操作簡(jiǎn)單，步驟簡(jiǎn)短，易于工業(yè)化生產(chǎn)，通過s10的臭氧氧化切斷反應(yīng)、s30的伯奇還原反應(yīng)、s40酯縮合反應(yīng)以及s50和s60的碘代-消除反應(yīng)，快速地構(gòu)建了分子的骨架結(jié)構(gòu)，從而完成了牛樟芝素的不對(duì)稱全合成。這種牛樟芝素的制備方法可以大量合成的牛樟芝素，合成的牛樟芝素可以用來研究其病理毒理、構(gòu)效關(guān)系，并且通過結(jié)構(gòu)修飾來闡明和改進(jìn)它的生物活性。

以下為具體實(shí)施例。

實(shí)施例中，反應(yīng)檢測(cè)時(shí)使用的是0.25mm煙臺(tái)銀龍硅膠有限公司生產(chǎn)的薄層色譜硅膠板(60f-254)；柱層析使用青島譜科分離材料有限公司生產(chǎn)的200-300目硅膠，使用石油醚沸程為60～90℃；核磁共振數(shù)據(jù)由以下儀器測(cè)得：brükeradvance500或brükeradvance400或brükeradvance300，使用tms或氘代溶劑中殘留的未氘代溶劑做內(nèi)標(biāo)，解釋多重裂分時(shí)所用到的簡(jiǎn)寫為s單峰，d雙重裂分，t三重裂分，q四重裂分，m多重裂分，br寬峰；質(zhì)譜由absciexhybridlc/ms/mssystem測(cè)得；紅外數(shù)據(jù)由shimadzuirprestige-21測(cè)得；hplc數(shù)據(jù)由shimadzulc20a測(cè)得；旋光數(shù)據(jù)由rudolphautopoliautomaticpolarimeter或者jascop-1020automaticpolarimeter測(cè)得。

實(shí)施例1

在無水的條件下，將結(jié)構(gòu)式為的鼠尾草酸(carnosicacid,25.0g,75.3mmol)溶解于3：1的二氯甲烷、甲醇混合溶劑(400ml)中，然后冷卻到-78℃，通入臭氧，鼓氣1小時(shí)后得到第一反應(yīng)液。

在第一反應(yīng)液中加入硼氫化鈉(12.6g,450.0mmol)，劇烈攪拌1小時(shí)后，加入飽和的氯化銨溶液淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(3×400ml)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。然后用硅膠柱層析純化，得到11.5g結(jié)構(gòu)式為的化合物a，產(chǎn)率58％?；衔颽的檢測(cè)數(shù)據(jù)如下：

(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2956,2917,1768,1447,1345,1216,1023,767；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.19(s,1h),4.71–4.55(m,2h),3.17(m,1h),2.50(m,1h),2.37(m,2h),2.04–1.80(m,2h),1.44(m,3h),1.25(td,j＝13.5,4.0hz,1h),1.04(td,j＝13.5,4.0hz,1h),0.92(s,3h),0.80(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ179.8,171.4,164.7,128.4,71.0,53.1,44.1,41.7,33.5,32.2,31.6,24.3,19.6,19.1,17.6；hrms(esi):m/zcalcdforc15h20o4na⁺[m+na]⁺:287.1254,found287.1252.

在-78℃的條件下，將化合物a(9.0g,34.1mmol)溶解于液氨(500ml)中，分批次投入剪碎的鈉塊(11.8g,511.5mmol)，攪拌2小時(shí)，得到包括結(jié)構(gòu)式為的化合物b和結(jié)構(gòu)式為的化合物c兩種化合物的第二反應(yīng)液。

小心緩慢的往第二反應(yīng)液中滴加氯化銨溶液(250ml)，淬滅反應(yīng)后多余的液氨在真空下除去，加入適量鹽酸，調(diào)節(jié)溶液ph＝1～2，所得的反應(yīng)液用乙酸乙酯(3×300ml)萃取，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。濃縮產(chǎn)物溶解于甲苯中(100ml)，加入對(duì)甲苯磺酸(1.44g,10.2mmol)，于100℃攪拌2小時(shí)，冷卻到室溫后小心的加入飽和碳酸氫鈉溶液(100ml)，用乙酸乙酯萃取(3×300ml)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。然后用硅膠柱層析純化，得到3.53g結(jié)構(gòu)式為的化合物d(產(chǎn)率41％)和4.81g結(jié)構(gòu)式為的化合物e(產(chǎn)率56％)?；衔飀的檢測(cè)數(shù)據(jù)如下：

(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2931,2866,2364,1762,1458,1189,1089,1045,772；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.37(dd,j＝9.2,4.3hz,1h),4.06(d,j＝9.2hz,1h),3.60–3.48(m,2h),2.24(s,1h),2.15(dd,j＝13.3,1.4hz,1h),1.96–1.87(m,1h),1.78(dd,j＝11.2,4.2hz,2h),1.62(dt,j＝13.6,2.7hz,1h),1.57–1.43(m,4h),1.28(td,j＝13.3,3.1hz,1h),1.23–1.16(m,3h),1.14(s,3h),0.93(s,3h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ177.81,68.61,65.94,50.46,49.11,48.13,41.56,40.51,34.67,33.24,33.10,29.64,22.79,22.21,18.66；hrms(esi):m/zcalcdforc15h24o3na⁺[m+na]⁺:275.1618,found275.1616?；衔飁的檢測(cè)數(shù)據(jù)如下：(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2940,2870,1772,1691,1458,1226,1021,890,759；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ3.87–3.77(m,3h),3.63(d,j＝8.0hz,1h),2.42(m,,1h),2.37–2.29(m,1h),2.14(ddd,j＝13.0,9.5,3.6hz,2h),1.78(ddd,j＝13.2,10.1,3.3hz,2h),1.61(dd,j＝13.1,3.0hz,1h),1.50–1.35(m,4h),1.28–1.16(m,2h),0.92(s,3h),0.87(m,1h),0.80(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ182.7,74.8,66.4,47.6,45.8,42.2,36.8,34.6,33.7,32.2,27.3,20.7,20.6,20.0；hrms(esi):m/zcalcdforc15h25o3⁺[m+h]⁺:253.1798,found253.1798.

將化合物d(1.0g,3.97mmol)溶解于四氫呋喃(30ml)中，依次加入碘(1.51g,5.95mmol)、三苯基膦(1.35g,5.16mmol)、咪唑(405mg,5.95mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入飽和氯化銨溶液(100ml)淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(3×300ml)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。然后用硅膠柱層析純化，得到1.44g結(jié)構(gòu)式為的化合物d1，產(chǎn)率99％?；衔飀1的檢測(cè)數(shù)據(jù)如下：(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2927,2391,1767,1099,1043,782；¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ4.39(dd,j＝9.4,4.3hz,1h),3.90(d,j＝9.4hz,1h),3.32(dd,j＝10.3,2.2hz,1h),3.19(dd,j＝10.3,5.2hz,1h),2.17(d,j＝12.9hz,1h),1.97(dd,j＝5.5,3.1hz,1h),1.82(d,j＝11.3hz,1h),1.76(dd,j＝10.2,4.2hz,1h),1.64(dd,j＝15.1,12.2hz,1h),1.56–1.46(m,2h),1.34(dd,j＝13.3,3.1hz,1h),1.25(m,4h),1.16(s,3h),1.14(d,j＝1.9hz,1h),0.96(s,3h)；¹³cnmr(125mhz,cdcl3)δ176.8,67.8,51.7,50.6,49.1,41.6,39.1,34.8,33.4,33.3,33.3,22.7,22.3,18.8,14.1；hrms(esi):m/zcalcdforc15h23io2na⁺[m+na]⁺:385.0635,found385.0634.

將化合物d1(2.1g,5.80mmol)溶解于甲苯(50ml)中，加入1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯(8.6ml,58.0mmol)，在80℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)，加入飽和氯化銨溶液(100ml)淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(3×300ml)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。然后用硅膠柱層析純化，得到0.68g牛樟芝素(產(chǎn)率50％)。牛樟芝素的檢測(cè)數(shù)據(jù)如下：(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2957,2906,2847,1762,1444,1378,1365,1124,1053,987,894；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.83(s,1h),4.80(s,1h),4.48(dd,j＝9.5,6.8hz,1h),4.15(d,j＝9.5hz,1h),2.67(d,j＝6.8hz,1h),2.34(m,1h),2.24(m,1h),2.15(dd,j＝13.4,1.6hz,1h),1.81(m,1h),1.76(m,1h),1.56(m,1h),1.53(m,1h),1.49(m,1h),1.38(m,1h),1.34(m,1h),1.23(dd,j＝13.4,3.0hz,1h),1.18(s,3h),0.93(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ178.2,146.5,111.0,69.2,54.0,48.3,46.5,41.8,36.7,33.1,33.0,30.2,22.2,22.0,18.5；hrms(esi):m/zcalcdforc15h22o2na⁺[m+na]⁺:257.1512,found257.1512.

實(shí)施例2

在無水的條件下，將結(jié)構(gòu)式為的鼠尾草酸(carnosicacid,25.0g,75.3mmol)溶解于3：1的二氯甲烷、甲醇混合溶劑(400ml)中，然后冷卻到-78℃，通入臭氧，鼓氣1小時(shí)后得到第一反應(yīng)液。

在第一反應(yīng)液中加入硼氫化鈉(12.6g,450.0mmol)，劇烈攪拌1小時(shí)后，加入飽和的氯化銨溶液淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(3×400ml)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。然后用硅膠柱層析純化，得到11.5g結(jié)構(gòu)式為的化合物a，產(chǎn)率56％?；衔颽的檢測(cè)數(shù)據(jù)如下：(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2956,2920,1765,1443,1341,1209,1023,767；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.19(s,1h),4.72–4.55(m,2h),3.17(m,1h),2.50(m,1h),2.37(m,2h),2.03–1.79(m,2h),1.44(m,3h),1.25(td,j＝13.5,4.0hz,1h),1.04(td,j＝13.5,4.0hz,1h),0.92(s,3h),0.80(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ179.8,171.4,164.7,128.4,71.0,53.1,44.1,41.7,33.5,32.2,31.6,24.3,19.6,19.1,17.6；hrms(esi):m/zcalcdforc15h20o4na⁺[m+na]⁺:287.1254,found287.1252。

在-78℃的條件下，將化合物a(9.0g,34.1mmol)溶解于液氨(500ml)中，分批次投入剪碎的鈉塊(11.8g,511.5mmol)后加入乙醇(10ml)，攪拌2小時(shí)，得到包括結(jié)構(gòu)式為的化合物b和結(jié)構(gòu)式為的化合物c兩種化合物的第二反應(yīng)液。

小心緩慢的往第二反應(yīng)液中滴加乙醇(100ml)，淬滅反應(yīng)后多余的液氨在真空下除去，加入適量鹽酸，調(diào)節(jié)溶液ph＝1～2，所得的反應(yīng)液用乙酸乙酯(3×300ml)萃取，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。濃縮產(chǎn)物溶解于甲苯中(100ml)，加入對(duì)甲苯磺酸(1.44g,10.2mmol)，于60℃攪拌1小時(shí)，冷卻到室溫后小心的加入飽和碳酸氫鈉溶液(100ml)，用乙酸乙酯萃取(3×300ml)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。然后用硅膠柱層析純化，得到4.76g結(jié)構(gòu)式為的化合物d(產(chǎn)率56％)和2.38g結(jié)構(gòu)式為的化合物e(產(chǎn)率28％)。(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2928,2867,2359,1762,1458,1189,1076,1045,769；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.37(dd,j＝9.2,4.3hz,1h),4.06(d,j＝9.2hz,1h),3.61–3.49(m,2h),2.24(s,1h),2.15(dd,j＝13.3,1.4hz,1h),1.95–1.88(m,1h),1.77(dd,j＝11.2,4.2hz,2h),1.62(dt,j＝13.6,2.7hz,1h),1.57–1.43(m,4h),1.28(td,j＝13.3,3.1hz,1h),1.22–1.15(m,3h),1.13(s,3h),0.93(s,3h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ177.81,68.61,65.94,50.46,49.11,48.13,41.56,40.51,34.67,33.24,33.10,29.64,22.79,22.21,18.66；hrms(esi):m/zcalcdforc15h24o3na⁺[m+na]⁺:275.1618,found275.1616?；衔飁的檢測(cè)數(shù)據(jù)如下：(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2942,2873,1773,1689,1453,1226,1011,890,759；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ3.86–3.76(m,3h),3.62(d,j＝8.0hz,1h),2.42(m,,1h),2.36–2.28(m,1h),2.14(ddd,j＝13.0,9.5,3.6hz,2h),1.78(ddd,j＝13.2,10.1,3.3hz,2h),1.60(dd,j＝13.1,3.0hz,1h),1.50–1.35(m,4h),1.27–1.15(m,2h),0.92(s,3h),0.87(m,1h),0.80(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ182.7,74.8,66.4,47.6,45.8,42.2,36.8,34.6,33.7,32.2,27.3,20.7,20.6,20.0；hrms(esi):m/zcalcdforc15h25o3⁺[m+h]⁺:253.1798,found253.1798。

將化合物d(1.0g,3.97mmol)溶解于四氫呋喃(30ml)中，依次加入碘(1.51g,5.95mmol)、三苯基膦(1.35g,5.16mmol)、咪唑(405mg,5.95mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入飽和氯化銨溶液(100ml)淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(3×300ml)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。然后用硅膠柱層析純化，得到1.44g結(jié)構(gòu)式為的化合物d1，產(chǎn)率100％?；衔飀1的檢測(cè)數(shù)據(jù)如下：(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2928,2386,1767,1093,1043,782；¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ4.39(dd,j＝9.4,4.3hz,1h),3.90(d,j＝9.4hz,1h),3.31(dd,j＝10.3,2.2hz,1h),3.19(dd,j＝10.3,5.2hz,1h),2.17(d,j＝12.9hz,1h),1.98(dd,j＝5.5,3.1hz,1h),1.82(d,j＝11.3hz,1h),1.77(dd,j＝10.2,4.2hz,1h),1.64(dd,j＝15.1,12.2hz,1h),1.57–1.47(m,2h),1.35(dd,j＝13.3,3.1hz,1h),1.25(m,4h),1.16(s,3h),1.14(d,j＝1.9hz,1h),0.96(s,3h)；¹³cnmr(125mhz,cdcl3)δ176.8,67.8,51.7,50.6,49.1,41.6,39.0,34.8,33.4,33.3,33.3,22.7,22.3,18.8,14.1；hrms(esi):m/zcalcdforc15h23io2na⁺[m+na]⁺:385.0635,found385.0634。

將化合物d1(2.1g,5.80mmol)溶解于甲苯(50ml)中，加入1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯(8.6ml,58.0mmol)，在80℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)，加入飽和氯化銨溶液(100ml)淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(3×300ml)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌、無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。然后用硅膠柱層析純化，得到0.68g牛樟芝素(產(chǎn)率50％)。(c＝0.1,chcl3)；ir(thinfilm,νcm^-1):2958,2902,2847,1762,1441,1375,1365,1124,1053,987,894；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.83(s,1h),4.80(s,1h),4.48(dd,j＝9.5,6.8hz,1h),4.15(d,j＝9.5hz,1h),2.67(d,j＝6.8hz,1h),2.34(m,1h),2.24(m,1h),2.15(dd,j＝13.4,1.6hz,1h),1.81(m,1h),1.76(m,1h),1.56(m,1h),1.53(m,1h),1.49(m,1h),1.38(m,1h),1.34(m,1h),1.23(dd,j＝13.4,3.0hz,1h),1.18(s,3h),0.93(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ178.2,146.5,111.0,69.2,54.0,48.3,46.5,41.8,36.7,33.1,33.0,30.2,22.2,22.0,18.5；hrms(esi):m/zcalcdforc15h22o2na⁺[m+na]⁺:257.1512,found257.1512

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。