專(zhuān)利名稱(chēng)：來(lái)源于c型肝炎病毒的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用于C型肝炎病毒感染的診斷及C型肝炎的治療的C型肝炎病毒(HCV)肽。 更詳細(xì)地說(shuō)，本發(fā)明涉及HCV肽、含有HCV肽的多肽、編碼HCV肽或前述多肽的核苷酸、或識(shí)別上述物質(zhì)的抗體或類(lèi)似抗體活性物質(zhì)、含有前述核苷酸的載體、使用HCV肽或前述多肽誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的方法、或使用HCV肽、前述多肽、前述核苷酸或前述抗體 類(lèi)似抗體活性物質(zhì)的C型肝炎病毒檢測(cè)方法、C型肝炎的診斷、預(yù)防或治療方法、及預(yù)后的預(yù)測(cè)方法，以及含有上述物質(zhì)的C型肝炎治療用藥物組合物。
背景技術(shù)：
病毒性肝炎主要為病毒經(jīng)口感染的A型肝炎與通過(guò)血液感染的B型肝炎，除此以夕卜，也有主要通過(guò)輸血等感染的C型肝炎等。該C型肝炎是慢性化后轉(zhuǎn)移為肝硬化或肝癌的機(jī)率非常高的疾病之一。C型肝炎病毒(HCV)是屬于黃病毒科的單鏈RNA病毒，日本有200萬(wàn)人以上、世界中有I億7000萬(wàn)人為C型肝炎病毒感染者。對(duì)該C型肝炎實(shí)施干擾素與利巴韋林(Ribavirin)并用治療方法，但僅對(duì)3 4成的患者有效，對(duì)于大多數(shù)患者而言目前并無(wú)有效的治療方法。因此，盡快開(kāi)發(fā)出安全有效且簡(jiǎn)單的低成本診斷、及治療方法成為強(qiáng)烈的社會(huì)需求。有證據(jù)顯示(W089/04669)細(xì)胞性及體液性免疫應(yīng)答兩者在抑制HCV感染方面發(fā)揮主要作用。在過(guò)去的十多年間，眾多研究發(fā)現(xiàn)高免疫原性的HCV肽，發(fā)現(xiàn)多種可誘導(dǎo)細(xì)胞性或體液性免疫應(yīng)答的HCV肽(Hunziker et al. ,Mol Immunol. 2001 Dec ；38(6) :475-84)。然而，這些肽并非都具有臨床效果，實(shí)際上無(wú)論為預(yù)防還是為治療，至今仍然皆沒(méi)有有效的免疫治療手段。認(rèn)為主要原因在于上述肽的免疫原性較弱。另外，本發(fā)明人等已提出數(shù)個(gè)由細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)識(shí)別出的抗原肽具有在活體內(nèi)或活體外皆可導(dǎo)出細(xì)胞性免疫應(yīng)答及體液性免疫應(yīng)答雙方的能力(Goharaet al. , J Immunother. 2002Sep_0ct ；25 (5) :439-44, Mine et al. , Clin CancerRes. 2001Dec ；7 (12) :3950-62, Tanaka et al. , J Immunother. 2003 Jul-Aug ;26 (4)357-66，Mine et al. , Cancer Sci. 2003Jun ；94(6) :548-56)。而且，由細(xì)胞性及體液性免疫應(yīng)答兩者識(shí)別的HCV肽具有高于僅由細(xì)胞性免疫應(yīng)答識(shí)別的肽的免疫原性。作為順應(yīng)社會(huì)需求的新對(duì)策之一，因已累積可誘導(dǎo)細(xì)胞性免疫應(yīng)答及體液性免疫應(yīng)答兩者的HCV肽與僅具有體液性免疫應(yīng)答的肽相比，具有更高的免疫原性一連串認(rèn)知，所以可舉出特別指定上述肽的對(duì)策。
在確認(rèn)上述肽的同時(shí)，調(diào)查其是否可作為抑制HCV感染的新型治療方法及診斷手段的候補(bǔ)物質(zhì)是有益的。因此，本發(fā)明人等針對(duì)與被HLA-A2及HLA-A24限制性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)識(shí)別的肽具有反應(yīng)性的IgG是否可從HCV感染者的血清中檢測(cè)出進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)幾個(gè)CTL表位具有特異性的IgG與不同的HLA class I型或不同的HCV基因型無(wú)關(guān)，可由大多數(shù)HCV感染患者中檢出。并且，由該結(jié)果得知，上述肽可提供以肽為基礎(chǔ)的預(yù)防及治療用新型方法，從而完成本發(fā)明。因此，本發(fā)明的目的為提供一種HCV肽，其特征為，該HCV肽由細(xì)胞性免疫應(yīng)答及體液性免疫應(yīng)答識(shí)別、且具有高免疫原性。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述課題，本發(fā)明提供一種來(lái)源于C型肝炎病毒的肽，其特征為序列中含有HLA結(jié)合基序(binding-motif),且由C型肝炎病毒患者的血中抗體來(lái)識(shí)別。本發(fā)明的優(yōu)選方案為提供一種具有序列表的序列號(hào)I 8、16、20及38中任一種表示的氨基酸序列的來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、具有與該肽的氨基酸序列具有至少70%同源性的氨基酸序列的來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、及還具有由HLA-A2或HLA-A24限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞產(chǎn)生的識(shí)別性的來(lái)源于C型肝炎病毒的肽。本發(fā)明的其它方案為提供含有該來(lái)源于C型肝炎病毒的肽的多肽。作為該方案發(fā)明的優(yōu)選方案，提供一種具有與該多肽的氨基酸序列具有至少70%同源性的氨基酸序列的多肽、及還具有由HLA-A2或HLA-A24限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞產(chǎn)生的識(shí)別性的多肽。另外，本發(fā)明的另一方案為提供一種核苷酸，其為編碼該來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、或該多肽的核苷酸。本發(fā)明的另一方案為提供一種抗體或類(lèi)似抗體活性物質(zhì)，其可以免疫學(xué)的方式識(shí)別該來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、或該多肽。作為本發(fā)明的另一方案，提供一種含有上述核苷酸的載體。另外，本發(fā)明的另一方案為提供一種細(xì)胞毒性T細(xì)胞的誘導(dǎo)方法，其特征為使用編碼該來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、或該多肽的該核苷酸來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞。作為本發(fā)明的另一方案，提供一種C型肝炎病毒的檢測(cè)方法，其使用該來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗體、或類(lèi)似抗體活性物質(zhì)。另外，作為本發(fā)明的另一方案，提供一種C型肝炎等HCV感染相關(guān)疾病的診斷方法，其使用上述來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗體、或類(lèi)似抗體活性物質(zhì)。而且，另一方案為提供一種C型肝炎等HCV感染相關(guān)疾病的治療方法，其使用上述來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗體、或類(lèi)似抗體活性物質(zhì)。本發(fā)明的另一方案為提供一種藥物組合物，其含有上述來(lái)源于C型肝炎 病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗體、或類(lèi)似抗體活性物質(zhì)作為有效成分。另外，作為優(yōu)選方案，提供一種藥物組合物，該藥物組合物為C型肝炎病毒疫苗。作為本發(fā)明的另一方案，提供一種C型肝炎等HCV感染相關(guān)疾病的預(yù)后預(yù)測(cè)方法，其使用上述來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗體、或類(lèi)似抗體活性物質(zhì)。本發(fā)明的另一方案為提供一種診斷C型肝炎或預(yù)后預(yù)測(cè)的試劑盒，其含有上述來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗體、或類(lèi)似抗體活性物質(zhì)。


圖I是表示本發(fā)明中以ELISA法得到的HCV感染患者血中的IgG測(cè)定結(jié)果的圖。圖2是表示本發(fā)明中以ELISA法得到的HCV感染患者血中的IgG測(cè)定結(jié)果的圖。圖3是表示本發(fā)明中在圖I所示患者血清中的C-35肽反應(yīng)性抗體的代表例的吸收·溶出實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖。圖4是表示本發(fā)明中的6種來(lái)自HCV的HLA-A24結(jié)合肽(No. 3、12、13、25、32、38) 的CTL誘導(dǎo)結(jié)果的圖。 圖5是表示本發(fā)明中的來(lái)自HCV的HLA-A2結(jié)合性肽(No. 40至No. 57)的CTL誘導(dǎo)結(jié)果的圖。圖6是表示本發(fā)明中由51Cr游離試驗(yàn)得到的肽刺激PBMC的細(xì)胞毒活性的代表性結(jié)果的圖。圖7是表示本發(fā)明中由51Cr游離試驗(yàn)得到的肽刺激PBMC的細(xì)胞毒活性的代表性結(jié)果的圖。圖8是表示本發(fā)明中由使用抗CD8單克隆抗體的抑制試驗(yàn)確認(rèn)肽刺激PBMC的細(xì)胞毒性的HLA class I限制性的圖。圖9是表示HCV感染患者血清中抗肽IgG的檢測(cè)圖。圖10是表示HCV感染患者血清中抗肽IgG的檢測(cè)圖。圖11是表示對(duì)HCV感染患者血清中的抗肽IgG的特異性進(jìn)行調(diào)查的吸附試驗(yàn)結(jié)果的圖。圖12是表示對(duì)HCV感染患者血清中的抗肽IgG的特異性進(jìn)行調(diào)查的溶出試驗(yàn)結(jié)果的圖。圖13是表示由肽刺激PBMC導(dǎo)致IFN- Y產(chǎn)生的圖。圖14是表示由肽刺激PBMC導(dǎo)致IFN- Y產(chǎn)生的圖。 圖15是表示肽刺激PBMC的細(xì)胞毒性的圖。圖16是表示肽刺激PBMC的細(xì)胞毒性的圖。圖17是表示對(duì)表達(dá)NS5A的細(xì)胞的肽刺激PBMC的CTL活性的圖。圖18是表示對(duì)表達(dá)NS5A的細(xì)胞的肽刺激PBMC的CTL活性的圖。圖19是表示對(duì)表達(dá)NS5A的細(xì)胞的肽刺激PBMC的CTL活性的圖。圖20是表示抗NS5A_2132IgG活性的特異性的圖。圖21是表示由抗NS5A_2132IgG導(dǎo)致的細(xì)胞增殖阻礙分析結(jié)果的圖。圖22是表示抗NS5A_2132IgG的ADCC活性分析結(jié)果的圖。圖23是表示各種疾病的抗C-35抗體及抗NS5A-2132抗體的檢測(cè)圖。圖24是表示抗肽抗體的HLA或HCV基因型限制性的圖。圖25是表示抗肽抗體的HLA或HCV基因型限制性的圖。圖26是表示患者血清中抗NS5A-2132抗體的測(cè)定結(jié)果的圖。圖27是表示患者血清中抗NS5A_2132IgG的測(cè)定結(jié)果的圖。圖28是表示患者血清中抗NS5A抗體的水平及HCV RNA水平的圖。
圖29是表示世代研究(Cohort Study)的抗C-35抗體及抗NS5A-2132抗體的檢測(cè)圖。圖30是表示世代研究(Cohort Study)的抗NS5A-2132抗體的檢測(cè)圖。圖31是表示本發(fā)明中，由Luminex法得到的HCV感染患者血中IgG測(cè)定結(jié)果的圖。圖32是表示本發(fā)明中由Luminex法得到的HCV感染患者血中IgG測(cè)定結(jié)果的圖。圖33是表示使用本發(fā)明的肽的C型肝炎治療過(guò)程的圖。圖34是表示使用本發(fā)明的肽的C型肝炎治療過(guò)程的圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述來(lái)源于C型肝炎病毒的肽是含有HLA結(jié)合基序(binding-motif)、且可由C型肝炎病毒患者的血中抗體識(shí)別出的HCV肽。另外，本發(fā)明的HCV肽在其序列中含有HLA結(jié)合基序，S卩，HLA-A2或HLA-A24結(jié)合基序。且該HCV肽由細(xì)胞性免疫應(yīng)答及體液性免疫應(yīng)答識(shí)別，同吋，顯示較高的免疫原性。作為上述HCV肽，例如可包含下述表I及表3所舉出的肽。本發(fā)明中特別優(yōu)選的HCV肽之ー為包含具有以下氨基酸序列的HLA-A2結(jié)合性基序的肽C-35 :YLLPRRGPRL(序列號(hào) I)對(duì)于HCV感染者而言，對(duì)該肽的肽反應(yīng)性IgG抗體的檢測(cè)率及HCV感染癥特異性分別為93%與100%，非常高。另外，本發(fā)明中特別優(yōu)選的其它HCV肽為包含具有以下氨基酸序列的HLA-A24結(jié)合性基序的肽NS5A-2132 :RYAPACKPL(序列號(hào) 2)E2-488 HYAPRPCGI (序列號(hào) 3)El-213 VYEAADMIM(序列號(hào) 4)NS3-1081 :VYHGAGSKTL(序列號(hào) 5)C-176 :IFLLALLSCL(序列號(hào) 6)C-173 :SFSIFLLALL(序列號(hào) 7)EYVLLLFLL (序列號(hào) 8)PYIEQGMQL(序列號(hào) I6)IFTITKILL (序列號(hào) 20)SFAIKffEYVL (序列號(hào) 38)特別是NS5A-2132，對(duì)于多數(shù)HLA-A24陽(yáng)性患者而言，可誘導(dǎo)細(xì)胞性免疫及體液性免疫兩者。本發(fā)明的HCV肽也可為與該肽的氨基酸序列具有至少70 %、優(yōu)選為80 %或80 %以上、更優(yōu)選為90%或90%以上同源性的肽。另外，本發(fā)明的HCV肽也可以進(jìn)ー步含有由HLA-A2或HLA-A24限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)識(shí)別的肽。由在細(xì)胞內(nèi)制造的抗原蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)分解出的肽構(gòu)成的、可與該HLA結(jié)合的抗原肽中，每個(gè)HLA型均在該序列內(nèi)存在基序(motif)，細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)可識(shí)別該抗原肽與HLA的復(fù)合體來(lái)破壞HCV感染細(xì)胞。本發(fā)明的多肽在該氨基酸序列中含有上述本發(fā)明的肽的氨基酸序列，該氨基酸的總數(shù)并無(wú)特別限定。另外，在本發(fā)明的多肽中，超過(guò)構(gòu)成該肽的氨基酸的其余氨基酸位于該肽的氨基酸N-末端及/或C-末端側(cè)、或上述兩側(cè)。因此，該多肽具有與上述肽的功能及作用實(shí)質(zhì)相同的功能及作用。需要說(shuō)明的是，本說(shuō)明書(shū)中，即使僅記載“肽”時(shí)，只要無(wú)特別否定時(shí)，均應(yīng)當(dāng)理解為包含“多肽”。具有如上所述地定義的氨基酸序列的肽可使用下述方法得到一般的化學(xué)合成法，蛋白質(zhì)分子酶分解法，使用進(jìn)行了轉(zhuǎn)化、使編碼目標(biāo)氨基酸序列的堿基序列表達(dá)的宿主的基因重組技術(shù)等。采用化學(xué)合成法制造作為目標(biāo)的該肽時(shí)，可依據(jù)一般的肽化學(xué)中公知的慣用方法進(jìn)行制造，例如使用肽合成機(jī)由固相合成法合成。如此得到的粗肽可由蛋白質(zhì)化學(xué)中一般使用的純化方法、例如鹽析法、極限過(guò)濾法、逆相色譜法、離子交換色譜法、親和色譜法等而
純化。另ー方面，以基因重組技術(shù)生產(chǎn)所希望的該肽時(shí)，例如可以將編碼上述合成的目標(biāo)氨基酸序列的DNA片段插入適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中，使用該表達(dá)載體對(duì)微生物或動(dòng)物細(xì)胞實(shí)施轉(zhuǎn)化，培養(yǎng)得到的轉(zhuǎn)化體，從而得到所希望的該肽。作為可使用的表達(dá)載體，可使用該技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)公知的質(zhì)粒、病毒載體等。作為該肽生產(chǎn)技術(shù)中使用表達(dá)載體的宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法，可使用公知方法，例如氯化I丐法、磷酸I丐共沉淀法、DEAE葡聚糖法、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染(Lipofectin)法、電穿孔法(electroporation)等,可依據(jù)所使用的宿主細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)選擇。得到的肽的純化可采用上述純化法對(duì)從培養(yǎng)后的培養(yǎng)液中回收的細(xì)胞提取液或培養(yǎng)上清液進(jìn)行純化。作為該發(fā)明的其它方案之一的核苷酸，包括含有上述來(lái)源于C型肝炎病毒的肽或上述多肽的寡核苷酸或聚核苷酸，包括核糖核苷酸或去氧核苷酸。另外，該核苷酸也可以利用本領(lǐng)域的已知方法進(jìn)行改變。該核苷酸的改變例如包含公知的標(biāo)記、甲基化、“caps”、由類(lèi)似物取代I個(gè)或I個(gè)以上天然核苷酸、核苷酸內(nèi)改變等。核苷酸內(nèi)改變可舉出例如非離子性改變(例如，甲基磷酸、磷酸三酷、磷酰胺酯等)、離子性改變(例如，硫代磷酸酷、ニ硫代磷酸酯等)、例如蛋白質(zhì)(例如，核酸水解酶、毒素、抗體、信號(hào)肽等)的修飾部分的改變，利用螯合劑(例如金屬、硼等)的改變等。上述核苷酸序列可提供ー種被編碼在HCV的基因組中的HCV抗原的肽及多肽序列，另外，可以提供用作診斷試驗(yàn)或疫苗成分的有用的肽。一旦獲得本發(fā)明的核苷酸，就可構(gòu)筑核苷酸探針及肽，上述核苷酸探針及肽在診斷HCV感染相關(guān)疾病方面，或篩選血液中或血液制劑中的HCV感染方面是有用的。由該核苷酸序列可合成例如24至30個(gè)核苷酸或更長(zhǎng)的DNA寡聚物。該核苷酸還可作為用于檢測(cè)受試者血清中的HCV RNA、或用于篩選血液或血液制劑中HCV存在的探針而使用。另外，該核苷酸序列可設(shè)計(jì)、生產(chǎn)出作為診斷對(duì)HCV的抗體存在的試藥也有用的HCV特異性肽。且對(duì)于來(lái)自該序列的純化肽的抗體，也可用于檢測(cè)HCV感染者及HCV感染血液制劑中的HCV抗原。作為本發(fā)明的另一方案之一的抗體包括來(lái)自該C型肝炎病毒的肽、對(duì)該多肽具有反應(yīng)性的嵌合抗體、改變抗體、單價(jià)抗體、Fab、F(ab’)2、Fab’、單鏈Fv (scFv)蛋白質(zhì)以及單一結(jié)構(gòu)域抗體。另外，該抗體可以免疫學(xué)的方式識(shí)別該肽或該多肽。作為本發(fā)明的另一方案之一的載體為含有該核苷酸、可以將所選擇的宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化的構(gòu)筑物，可以在該宿主中表達(dá)不同種類(lèi)的編碼序列。該表達(dá)載體可為克隆用載體或插入用載體任一。作為克隆用載體例如可使用質(zhì)粒、病毒(例如腺病毒質(zhì)粒載體)等。另外，該克隆用載體是可轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞、且具有在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行核苷酸復(fù)制能力的復(fù)制子(例如，質(zhì)粒、染色體、病毒、粘粒等)。另ー方面，插入用載體雖在宿主細(xì)胞中不發(fā)揮復(fù)制子的作用，但其是為了穩(wěn)定地轉(zhuǎn)化宿主而具有將駐留物插入宿主中的復(fù)制子(典型例為染色體)內(nèi)的能力的載體。作為本發(fā)明的其它方案之一，包括通過(guò)使用該肽誘導(dǎo)以HCV細(xì)胞作為目標(biāo)的細(xì)胞毒性T細(xì)胞的誘導(dǎo)方法。本發(fā)明的誘導(dǎo)方法為，例如在表達(dá)HLA-A2的細(xì)胞中添加該肽，使 其表達(dá)在HLA-A2上，以由HLA-A2表達(dá)該肽的細(xì)胞刺激T細(xì)胞后，誘導(dǎo)該T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為CTL。該方法中所使用的HLA-A2表達(dá)細(xì)胞可由HCV患者的血液中采集，但也可在非HLA-A2表達(dá)細(xì)胞中導(dǎo)入編碼HLA-A2的基因而制成。因此，本發(fā)明的該肽不僅可用于HCV檢測(cè)及診斷，也可作為C型肝炎病毒相關(guān)疾病的疫苗等藥物組合物使用。另外，如上所述地誘導(dǎo)出的CTL因以HCV感染細(xì)胞作為目標(biāo)，攻擊該HCV感染細(xì)胞，因此，可與該肽同樣地用作細(xì)胞治療法等的藥物組合物。而且，作為本發(fā)明的其它方案的該來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸及/或抗體、類(lèi)似抗體活性物質(zhì)可用于檢測(cè)、診斷HCV感染。HCV的檢測(cè)及HCV相關(guān)疾病的診斷，例如利用與編碼該肽的核酸序列的相互作用及/或反應(yīng)性，根據(jù)該肽存在的檢測(cè)、對(duì)應(yīng)核酸序列存在量的檢測(cè)、在該肽的個(gè)體中活體分布的確定/或來(lái)自個(gè)體的檢體中存在量的確定來(lái)進(jìn)行。換言之，可通過(guò)將該肽作為標(biāo)記物進(jìn)行檢定來(lái)進(jìn)行HCV的檢測(cè)及HCV相關(guān)疾病的診斷。另外，該測(cè)定可使用公知的測(cè)定方法進(jìn)行，作為這種測(cè)定方法，例如可舉出利用抗原抗體反應(yīng)系統(tǒng)、酶反應(yīng)系統(tǒng)、PCR反應(yīng)系統(tǒng)等的方法。HCV相關(guān)疾病的治療效果的確認(rèn)及預(yù)后的預(yù)測(cè)可通過(guò)監(jiān)測(cè)罹患HCV相關(guān)疾病的受試者體內(nèi)具有對(duì)該肽的反應(yīng)性的抗體的血中濃度來(lái)進(jìn)行。特優(yōu)選測(cè)定出受試者血中的抗C-35IgG 或抗 NS5A-2132IgG 的水平。作為本發(fā)明的另一方案的藥物組合物例如可舉出疫苗。疫苗由來(lái)源于C型肝炎病毒的肽、多肽及/或核苷酸組成，適當(dāng)含有醫(yī)學(xué)上可接受的助劑及/或載體。作為助劑可使用可強(qiáng)化免疫應(yīng)答的助劑，例如freund的不完全助劑、氫氧化鋁膠等。另外，作為載體例如可使用PBS、蒸餾水等稀釋劑、生理鹽水等。本發(fā)明的藥物組合物可根據(jù)其使用方式，例如通過(guò)ロ服、靜脈給藥或皮下給藥等非ロ服或經(jīng)皮途徑進(jìn)行給藥。作為其劑型例如可舉出片劑、顆粒劑、軟膠囊劑、硬膠囊劑、液齊U、油劑、乳化劑等。該藥物組合物的給藥量，可依據(jù)給藥患者的癥狀等適當(dāng)改變，一般而言成人毎日給藥量以該肽量計(jì)可以為O. I 10mg，給藥間隔可以為數(shù)日或數(shù)月一次。本說(shuō)明書(shū)中所引用的所有專(zhuān)利及參考文獻(xiàn)內(nèi)容皆為本說(shuō)明書(shū)的一部分。另外，作為本案所要求的優(yōu)先權(quán)的基礎(chǔ)的日本專(zhuān)利申請(qǐng)2003-330258號(hào)說(shuō)明書(shū)及附圖的內(nèi)容皆引用作為本案說(shuō)明書(shū)的一部分。實(shí)施例由實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。但這些實(shí)施例僅為更具體說(shuō)明本發(fā)明所舉例，本發(fā)明并不限定于以下的實(shí)施例。
需要說(shuō)明的是，以下實(shí)施例所使用的氨基酸的簡(jiǎn)稱(chēng)如下。A為丙氨酸、C為胱氨酸、D為天門(mén)冬氨酸、E為谷氨酸、F為苯丙氨酸、G為甘氨酸、H為組氨酸、I為異亮氨酸、K為賴(lài)氨酸、L為亮氨酸、M為蛋氨酸、P為脯氨酸、R為精氨酸、S為絲氨酸、T為蘇氨酸、V為纈氨酸、Y表示酪氨酸。實(shí)施例I :與HCV感染者血清中的HCV肽具有反應(yīng)性的IgG的檢測(cè)Ii使用具有來(lái)自HCV基因型Ib蛋白質(zhì)的保存區(qū)域的HLA-A2結(jié)合性基序或HLA-A24結(jié)合性基序的合成肽(如表I)。作為陰性對(duì)照組使用具有HLA-A2結(jié)合性基序的來(lái)自HIV的肽。上述肽均使用市售品，其純度由逆相高壓液相色譜法進(jìn)行分析的結(jié)果為90%或90%以上。
表I
權(quán)利要求
1.一種來(lái)源于C型肝炎病毒的肽，所述肽被從C型肝炎病毒患者中檢測(cè)出的抗體識(shí)別，該肽由序列號(hào)3表示的氨基酸序列構(gòu)成。
2.如權(quán)利要求I所述的來(lái)源于C型肝炎病毒的肽，其特征為，該肽還具有利用HLA-A24限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞的識(shí)別性。
3.一種核苷酸，其特征為，該核苷酸編碼如權(quán)利要求I或2所述的來(lái)源于C型肝炎病毒的肽。
4.一種載體，其特征為含有如權(quán)利要求3所述的核苷酸。
5.一種細(xì)胞毒性T細(xì)胞的誘導(dǎo)方法，其特征為使用如權(quán)利要求I或2所述的來(lái)源于C型肝炎病毒的肽在體外誘導(dǎo)出細(xì)胞毒性T細(xì)胞。
6.一種藥物組合物，其特征為含有如權(quán)利要求I或2所述的來(lái)源于C型肝炎病毒的肽作為有效成分。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征為，藥物組合物為C型肝炎病毒疫苗。
8.—種診斷C型肝炎病毒感染癥或預(yù)測(cè)預(yù)后的試劑盒，其特征為含有如權(quán)利要求I或2所述的來(lái)源于C型肝炎病毒的肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種來(lái)源于C型肝炎病毒的肽，其特征為序列中含有HLA結(jié)合基序(binding-motif)，且由從C型肝炎病毒(HCV)患者體內(nèi)檢測(cè)出的抗體來(lái)識(shí)別。本發(fā)明的肽可用于C型肝炎病毒的診斷及C型肝炎的治療、及預(yù)后的預(yù)測(cè)。
文檔編號(hào)A61K35/76GK102659922SQ201210144678
公開(kāi)日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2004年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月22日
發(fā)明者伊東恭悟, 佐田通夫, 山田亮 申請(qǐng)人:株式會(huì)社綠多肽