專利名稱：翼果薹草在制備抗甲型流感病毒的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及翼果薹草在制備抗甲型流感病毒(Influenza A virus,Flu_A)的藥物 中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
翼果薹草，莎草科、薹草屬，多年生草本。根狀莖叢生。全株密生銹色點(diǎn)線。稈高 20-100厘米，扁鈍三棱形，基部具褐色葉鞘。葉長于或短于稈，寬2-3毫米。穗狀花序呈尖 塔狀圓柱形，長3-8厘米，寬1-1. 5厘米；小穗多數(shù)，緊密，卵形，雄雌順序，長5-7毫米；下部 苞片葉狀，長于花序，上部的剛毛狀；雌花鱗片矩圓卵形，長約2毫米，中間黃白色，兩側(cè)淡 銹色，膜質(zhì)，頂端具芒尖，脈3條。果囊卵狀橢圓形，長于鱗片，長3. 5-4毫米，膜質(zhì)，褐棕色， 兩面有多數(shù)細(xì)脈，基部圓，里面具海綿狀組織，中部以上邊緣具寬翅，翅緣有嚙蝕狀齒，頂端 急縮成中等長的喙，喙口具2齒。小堅(jiān)果卵形；柱頭2。分布于東北、華北、陜西、甘肅、四川、 河南、山東、江蘇、福建；朝鮮，日本，蘇聯(lián)遠(yuǎn)東地區(qū)也有。生于水邊或草叢中
翼果薹草作為藥用植物，在《本草綱目》、《中藥志》、《中華人民共和國藥典》(2005 版)均無記載，目前尚未見翼果薹草或翼果薹草提取物具有抗病毒活性的資料報(bào)道。
Flu A屬于正粘科病毒，在人類和其它生物每年都有小范圍的流行，引起上呼吸系 統(tǒng)感染。大流行時(shí)，可引起嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)感染，甚者引起肺炎、腦炎甚至死亡；

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了翼果薹草在制藥中的新用途
翼果薹草在制備抗Flu A的藥物中的應(yīng)用。
所述翼果薹草的應(yīng)用具體為先將翼果薹草進(jìn)行前處理，然后將前處理得到的提 取物用于制備抗病毒的藥物，如可將提取物與醫(yī)學(xué)上可接受的輔料一起制成膠囊劑、片劑、 顆粒劑、口服液制劑等，將提取物進(jìn)一步純化也可以制成注射制劑。
所述前處理為以下兩種方式之一 ①翼果薹草丙酮提取物取翼果薹草，經(jīng)水/丙酮提取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得膏狀物，即為 丙酮提取物，將其溶于細(xì)胞維持液中備用于試驗(yàn)。 ②翼果薹草醇提取物取翼果薹草，經(jīng)水/甲醇(或乙醇)提取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得膏狀 物，即為醇提取物，將其溶于細(xì)胞維持液中備用于試驗(yàn)。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，翼果薹草上述不同提取物對flu A均有顯著的抑制作用
a.翼果薹草丙酮提取物抑制Flu A在MDCK發(fā)生CPE， IC5。為2—7 88， TI為42. 52。
b.翼果薹草醇提取物抑制Flu A在MDCK發(fā)生CPE， IC5。為2-854， TI為70. 52。
為便于觀察與比較，上述內(nèi)容詳見表1。 本發(fā)明為翼果薹草臨床用于治療Flu A感染性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對研制抗Flu A 病毒的藥物提供了 一定的指導(dǎo)意義，具有重要的參考價(jià)值。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例翼果薹草提取物對病毒的作用研究
(1)制備翼果薹草提取物 取翼果薹草1000g分別采用1000ml水/丙酮提取、水/乙醇提取、分別蒸發(fā)獲得 濃縮丙酮提取物①和醇提取物②，用匿SO將上述提取物分別助溶于細(xì)胞維持液(無血清 DMEM， GIBIC0公司產(chǎn)品)中備用。
(2)細(xì)胞株與病毒株 狗腎細(xì)胞(MDCK，流感病毒敏感細(xì)胞)引自中國CDC病毒病研究所。
(3)細(xì)胞毒性測定 參照文獻(xiàn)汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對呼吸道合胞病毒抑制作用 的實(shí)驗(yàn)研究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ;24 (1) :25 27的方法，將各樣品以2倍比做系列 稀釋(2—卜—5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的MDCK上，每孔100i! L，每稀釋度縱 向重復(fù)3孔(A、 B、 C行)，平行設(shè)微孔板D的1 6孔為細(xì)胞對照，7 12孔不接種細(xì)胞為 空白對照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續(xù)觀察5d，細(xì)胞出現(xiàn)100%以上的病變?yōu)?，75%病變 為+++，50%病變?yōu)?+，25%病變?yōu)?，低于10%為±。用Reed-Muench方法計(jì)算藥物半數(shù) 細(xì)胞中毒濃度(TD5。)。
(4)抑毒試驗(yàn) 將樣品按稀釋順序橫向接種于96板孔中的單層細(xì)胞上，每孔100i! L，每稀釋度縱 向重復(fù)4孔，微孔板的A、B、C行加含有100個(gè)TCID5。的病毒100 y L作為試驗(yàn)組(病毒培養(yǎng) 物原液，使用前加10ul胰酶預(yù)處理)，D行補(bǔ)充等容量細(xì)胞維持液為不同濃度藥物對照，平 行設(shè)F行作為病毒對照，E行的1 12作為細(xì)胞對照。37°C、5% (A培養(yǎng)，每日觀察CPE， 連續(xù)觀察4d。病毒對照出現(xiàn)90%以上CPE時(shí)終止試驗(yàn)，顯微鏡下觀察并記錄每孔細(xì)胞病 變率，細(xì)胞出現(xiàn)100%以上的病變?yōu)?，75%病變?yōu)?++，50%病變?yōu)?+，25%病變?yōu)?，低于 10%為± 。用Reed-Muench方法計(jì)算半數(shù)抑毒濃度(IC5。)，最終將TD5。和IC5。相比獲得抑 毒指數(shù)(TI)。
(5)結(jié)果 ①樣品TD5。的測定對照組細(xì)胞顯微鏡下觀察貼壁生長致密、形態(tài)良好。丙酮提 取、醇提取物TD5。分別為2—2' 、2—"。 ②抑毒實(shí)驗(yàn)對照組細(xì)胞貼壁致密、形態(tài)良好。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)lu A病毒對照組 在第4d出現(xiàn)90 %以上的CPE 。 而抑毒試驗(yàn)各組細(xì)胞，按照樣品稀釋梯度，梯度規(guī)律出現(xiàn)CPE : a丙酮提取物Flu A-MDCK實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在第6稀釋度之前細(xì)胞完全被保護(hù)，第7孔
CPE+，第8孔++，第9孔#， IC50為2—8。 b醇提取物Flu A-MDCK實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在第6稀釋度之前細(xì)胞完全被保護(hù)，第7孔 CPE+，第8孔++，第9孔#， IC50為2—8。
③抑毒指數(shù)
a丙酮提取物64. 0
b醇提取物45. 2 從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，翼果薹草具有顯著的抑制flu-A的作用。
權(quán)利要求
翼果薹草在制備抗甲型流感病毒的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了翼果薹草在制備抗Flu A的藥物中的應(yīng)用。所述翼果薹草的應(yīng)用具體為先將翼果薹草進(jìn)行前處理，然后將前處理得到的提取物用于制備抗病毒的藥物，如可將提取物與醫(yī)學(xué)上可接受的輔料一起制成膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液制劑等，將提取物進(jìn)一步純化也可以制成注射制劑。所述前處理為以下兩種方式之一①翼果薹草丙酮提取物取翼果薹草，經(jīng)水/丙酮提取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得膏狀物，即為丙酮提取物，將其溶于細(xì)胞維持液中備用于試驗(yàn)。②翼果薹草醇提取物取翼果薹草，經(jīng)水/甲醇(或乙醇)提取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得膏狀物，即為醇提取物，將其溶于細(xì)胞維持液中備用于試驗(yàn)。
文檔編號(hào)A61P31/16GK101780195SQ20101900601
公開日2010年7月21日 申請日期2010年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月1日
發(fā)明者張少華 申請人:張少華