本發(fā)明屬于分子育種,尤其涉及一種鑒定桃果肉顏色的indel標記及其相關應用。
背景技術:
1、桃種質(zhì)資源按照果肉顏色主要分為白肉、黃肉和紅肉。其中紅肉桃中豐富的花色苷不僅賦予紅肉桃鮮艷的果實色澤,還因具備強抗氧化能力而在清除體內(nèi)自由基、抗腫瘤、防止心血管硬化等方面對人體健康發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,因此紅肉桃成為育種家和消費者青睞的對象。但是目前生產(chǎn)中紅肉桃所占的比重較小,這既和紅肉桃本身在外觀和風味上存在的缺陷有關,還與紅肉性狀遺傳的復雜性有關。
2、桃紅肉性狀的遺傳主要分為顯性遺傳的紅肉性狀(dbf_,dominantblood-flesh)和隱性遺傳(bf,blood-flesh)的紅肉性狀?,F(xiàn)有技術利用ssr標記構建遺傳連鎖圖譜,將紅肉顯性基因dbf定位于第5連鎖群頂端,位于ssr標記amp-pg157和amppg178之間,匹配桃基因組scaffold_5(442159-947234)。隨后,又有學者利用“大紅袍”和“曙光”(黃色果肉)雜交群體,將控制紅色果肉的顯性位點,定位于lg5上的wps19和wps32之間的3.2cm區(qū)域內(nèi),并結合轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)確定控制桃果肉紅色性狀的關鍵基因ppbl,該基因可以與ppnac1結合成二聚體,上調(diào)ppmyb10.1表達,導致果肉中花色素苷含量上升,果肉呈現(xiàn)紅色。后經(jīng)研究,通過對紅肉桃品種“天津水蜜”進行基因組組裝及注釋,從基因組層面鑒定到ppbl啟動子區(qū)域存在一個轉(zhuǎn)座子插入blood-te,且該轉(zhuǎn)座子與紅肉性狀共分離。另有學者利用“harrowblood”的s1、s2、f1、f2f3、bc1p1和bc1p2群體進行了紅肉性狀的遺傳規(guī)律分析,發(fā)現(xiàn)桃紅肉性狀受隱性基因bf控制,且該類型紅肉性狀與葉背中脈紅的性狀相連鎖,也與較弱的樹勢相連鎖。也有人利用‘harrowblood’בokinawa’的f2群體,將來源于“harrowblood”的bf位點定位于第4連鎖群上端(標記c41h上10.3cm處)。現(xiàn)有技術中也曾利用“sanguinechanas”דo’henry”的f2群體,構建了f2單株‘1173’遺傳連鎖圖譜,并將bf基因定位于第4連鎖群的snp_iga_386619和snp_iga_387198之間,匹配桃基因組scaffold_4(4212145-4523432)。另外這兩種類型的紅肉桃在花色苷的積累時間上也存在差異,其中dbf類型在果實成熟前花色苷開始猛烈增加,在果實成熟時達到最大。而bf類型則相反,其果實中的花色苷在發(fā)育中期開始積累,果實成熟前則有所下降。
3、目前生產(chǎn)上所用的紅肉桃育種材料以dbf_型為主,但是調(diào)控該類型的桃果實顏色的轉(zhuǎn)錄因子ppbl同時能夠促使果實早熟,因此該類型桃的成熟期集中在6月中旬至7月初。而bf類型的紅肉桃其成熟期可延續(xù)至7月底至8月初,加大該類型紅肉桃在育種中的應用,不僅可以為消費者提供種類豐富的紅肉桃產(chǎn)品,更重要的是有助于延長紅肉桃的供應周期。但是,目前缺乏鑒定bf類型紅肉桃果肉顏色分子標記。
技術實現(xiàn)思路
1、針對現(xiàn)有技術的不足,本發(fā)明提供的能夠鑒定桃果肉顏色的indel標記將有助于紅色果肉桃子選擇育種的發(fā)展,可以快速準確地根據(jù)育種目標進行選擇,還可以有效調(diào)控紅色果肉的桃子的供應周期。
2、為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明提供了以下技術方案:
3、本發(fā)明提供了一種鑒定桃果肉顏色的indel標記,所述indel標記的位置為prunus_persica_v2.0?chr4:4,329,938~4,329,947位處;
4、在本發(fā)明中,缺失位點兩端序列信息如下所示:
5、
6、斜體下劃線部分為紅肉桃中缺失的9bp。
7、本發(fā)明還提供了一種用于檢測權利要求1所述indel標記的引物,所述indel標記的引物的核苷酸序列如seq?id?no.1所示和seq?id?no.2所示;
8、
9、本發(fā)明還提供了一種用于檢測上述indel標記的試劑盒,所述試劑盒包含上述的引物。
10、本發(fā)明還提供了上述的indel標記、上述的引物或上述的試劑盒在桃育種的應用。
11、本發(fā)明還提供了上述的indel標記、上述的引物或上述的試劑盒在鑒定桃果肉顏色中的應用。
12、本發(fā)明還提供了一種鑒定桃果肉顏色的方法,包括如下步驟:以待測桃基因組dna為模板,利用上述的引物進行pcr擴增得到擴增產(chǎn)物;
13、當擴增產(chǎn)物的兩條條帶長度均為121bp,或者一條條帶長度小于121bp另一條條帶長度為121bp時,所述桃果肉顏色為非紅肉;
14、當擴增產(chǎn)物的兩條條帶均小于121bp時,所述桃果肉顏色為紅色。
1.一種鑒定桃果肉顏色的indel標記,其特征在于,所述indel標記的位置為prunus_persica_v2.0?chr4:4,329,938~4,329,947位處。
2.一種用于檢測權利要求1所述indel標記的引物,其特征在于,所述indel標記的引物的核苷酸序列如seq?id?no.1所示和seq?id?no.2所示。
3.一種用于檢測權利要求1所述indel標記的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包含權利要求2所述的引物。
4.權利要求1所述的indel標記、權利要求2所述的引物或權利要求3所述試劑盒在桃育種的應用。
5.權利要求1所述的indel標記、權利要求2所述的引物或權利要求3所述試劑盒在鑒定桃果肉顏色中的應用。
6.一種鑒定桃果肉顏色的方法,其特征在于,包括如下步驟:以待測桃基因組dna為模板,利用權利要求2所述的引物進行pcr擴增得到擴增產(chǎn)物;