本申請(qǐng)要求2014年3月24日提交的U.S.S.N.61/969,546的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益，其內(nèi)容全文通過(guò)引用結(jié)合到本文中。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及合成3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺的方法。發(fā)明背景癌癥是在美國(guó)僅次于心臟病的死亡的第二主要成因(CancerFactsandFigures2004,AmericanCancerSociety,Inc.)。盡管最近在癌癥診斷和治療中有進(jìn)步，但如果早期發(fā)現(xiàn)癌癥，外科和放射治療可能是有療效的，但對(duì)轉(zhuǎn)移性疾病的目前藥物治療通常為緩和性的，且很少提供長(zhǎng)期治愈。通過(guò)結(jié)合和調(diào)節(jié)很多下游效應(yīng)子，例如核因子-κB、Bcl-2族蛋白和鼠雙微體2(MDM2)，AKT族調(diào)節(jié)細(xì)胞存活和代謝。已知Akt1在細(xì)胞周期中起作用。另外，活化的Akt1可能夠使已維持潛在誘變作用并且可因此幫助在其它基因中獲得突變的細(xì)胞增殖和存活。Akt1也已牽涉血管生成和腫瘤生長(zhǎng)。研究已顯示Akt1缺陷增加病理血管生成和與皮膚和血管中基質(zhì)異常相關(guān)的腫瘤生長(zhǎng)。由于它能夠阻斷細(xì)胞凋亡并由此促進(jìn)細(xì)胞存活，Akt1是很多類型癌癥中的主要因素?；衔?-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(也稱為化合物7)已顯示調(diào)節(jié)AKT基因，并治療增殖疾病，包括癌癥(US2011/0172203A1，本文以后稱為‘203申請(qǐng))。最近在‘203申請(qǐng)中已公開3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺的小規(guī)模合成?！?03申請(qǐng)的合成對(duì)生產(chǎn)大量化合物不實(shí)際，并有幾個(gè)缺陷。因此，需要適應(yīng)安全和簡(jiǎn)單工業(yè)生產(chǎn)的3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)的改進(jìn)合成路線。發(fā)明概述本發(fā)明涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺的方法。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包括四步合成的制備化合物7的方法。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包括三步合成的制備化合物7的方法。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)的方法。本發(fā)明的方法描繪于以下代表性方案中。方案1方案1’本發(fā)明的方法從未在本領(lǐng)域報(bào)告。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括四個(gè)步驟(方案1)。第一步是1’和2’的取代反應(yīng)，以提供化合物3(步驟1)，或者是1和2的交叉偶聯(lián)反應(yīng)，以產(chǎn)生化合物3(步驟1a)。第二步是化合物3還原反應(yīng)生成苯胺化合物4。第三步是化合物4和化合物5(2-氨基煙堿醛)環(huán)化提供環(huán)化中間體化合物6’，化合物6’原位氧化生成化合物6。第四步是化合物6去保護(hù)，以提供3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括三個(gè)步驟(方案1’)。在一個(gè)實(shí)施方案中，方案1中描述的第二和第三步驟在精簡(jiǎn)過(guò)程(方案2’)中組合。第一步是1’和2’的取代反應(yīng)，以提供化合物3(步驟1)，或者是1和2的交叉偶聯(lián)反應(yīng)，以產(chǎn)生化合物3(步驟1a)。第二步包括化合物3還原生成中間體苯胺化合物4，在用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑后，使其與化合物5反應(yīng)，以生成化合物6’，化合物6’原位氧化提供化合物6(步驟2’)。第三步是化合物6去保護(hù)，以提供3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)(步驟3’)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)的方法，所述方法包括以下步驟：步驟3，使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)，所述方法包括以下步驟：步驟2，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)；和步驟3，使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)，所述方法包括以下步驟：步驟1，在堿存在下在極性非質(zhì)子溶劑中使2-氯-3-硝基-6-苯基吡啶(化合物1’)與(1-(4-氨基苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2’)反應(yīng)，以生成(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)；步驟2，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)；和步驟3，使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)，所述方法包括以下步驟：步驟1a，在鈀催化劑和磷配位體存在下在極性非質(zhì)子溶劑中使3-硝基-6-苯基吡啶-2-胺(化合物1)與(1-(4-溴苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2)偶聯(lián)，以生成(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)；步驟2，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)；和步驟3，使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺，所述方法包括以下步驟：步驟1，在堿存在下在極性非質(zhì)子溶劑中使2-氯-3-硝基-6-苯基吡啶(化合物1’)與(1-(4-氨基苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2’)反應(yīng)，以生成(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)；步驟2，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)；步驟3，使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)；和步驟4，用酸在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)，以生成3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺，所述方法包括以下步驟：步驟1a，在鈀催化劑和磷配位體存在下在極性非質(zhì)子溶劑中使3-硝基-6-苯基吡啶-2-胺(化合物1)與(1-(4-溴苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2)偶聯(lián)，以生成(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)；步驟2，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)；步驟3，使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)；和步驟4，用酸在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)，以生成3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)，所述方法包括以下步驟：步驟2’，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)，用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑，并使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)，所述方法包括以下步驟：步驟1，在堿存在下在極性非質(zhì)子溶劑中使2-氯-3-硝基-6-苯基吡啶(化合物1’)與(1-(4-氨基苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2’)反應(yīng)，以生成(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)；和步驟2’，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)，用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑，并使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)，所述方法包括以下步驟：步驟1a，在鈀催化劑和磷配位體存在下在極性非質(zhì)子溶劑中使3-硝基-6-苯基吡啶-2-胺(化合物1)與(1-(4-溴苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2)偶聯(lián)，以生成(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)；和步驟2’，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)，用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑，并使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺，所述方法包括以下步驟：步驟2’，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)，用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑，并使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)；和步驟3’，用酸在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)，以生成3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺，所述方法包括以下步驟：步驟1，在堿存在下在極性非質(zhì)子溶劑中使2-氯-3-硝基-6-苯基吡啶(化合物1’)與(1-(4-氨基苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2’)反應(yīng)，以生成(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)；步驟2’，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)，用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑，并使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)；和步驟3’，用酸在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)，以生成3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及制備3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺，所述方法包括以下步驟：步驟1a，在鈀催化劑和磷配位體存在下在極性非質(zhì)子溶劑中使3-硝基-6-苯基吡啶-2-胺(化合物1)與(1-(4-溴苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2)偶聯(lián)，以生成(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)；步驟2’，用還原劑在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-((3-硝基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3)，以生成(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)，用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑，并使(1-(4-((3-氨基-6-苯基吡啶-2-基)氨基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4)與2-氨基煙堿醛(化合物5)在氧化劑和酸存在下在極性質(zhì)子溶劑中反應(yīng)，以生成(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)；和步驟3’，用酸在極性非質(zhì)子溶劑中處理(1-(4-(2-(2-氨基吡啶-3-基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6)，以生成3-(3-(4-(1-氨基環(huán)丁基)苯基)-5-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟3。步驟3是化合物4和化合物5(2-氨基煙堿醛)環(huán)化以提供中間體化合物6’，化合物6’氧化生成化合物6：。在一個(gè)實(shí)施方案中，極性質(zhì)子溶劑為C1-4醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，極性質(zhì)子溶劑選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、仲丁醇和叔丁醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，極性質(zhì)子溶劑為甲醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，酸為有機(jī)酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，酸選自甲酸、乙酸和丙酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，酸為乙酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，酸:溶劑之比為約1:25至約25:1，約1:20至約20:1，約1:15至約15:1，約1:1至約15:1，約3:1至約12:1，或約5:1至約10:1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，酸:溶劑之比為約9:1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，乙酸:甲醇之比為約9:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑為空氣。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑為基于金屬或非金屬的鹽或催化劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑選自乙酸金屬鹽、過(guò)硼酸金屬鹽、金屬氯化物、鈀基催化劑及其水合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑選自過(guò)硼酸堿金屬鹽及其水合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑選自乙酸銅、過(guò)硼酸鈉、氯化鐵、鈀/碳及其水合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑選自Cu(OAc)2?H2O、NaBO3?4H2O、FeCl3?6H2O和10%Pd/C。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑為NaBO3?4H2O。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物的溫度為約10℃至約30℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約15℃至約25℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約20℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物的溫度為約10℃至約60℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約30℃至約50℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約40℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約40小時(shí)至約50小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約43小時(shí)至約46小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約45小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約10小時(shí)至約18小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約12小時(shí)至約16小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約12小時(shí)，約13小時(shí)，約14小時(shí)，或約15小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約40小時(shí)至約50小時(shí)內(nèi)完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約43小時(shí)至約46小時(shí)內(nèi)完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約45小時(shí)內(nèi)完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約10小時(shí)至約18小時(shí)內(nèi)完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約12小時(shí)至約16小時(shí)內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約12小時(shí)，約13小時(shí)，約14小時(shí)，或約15小時(shí)內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在產(chǎn)生顯著量的化合物6的過(guò)氧化雜質(zhì)(M+16)N-氧化物之前完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在氧化完成時(shí)，過(guò)氧化雜質(zhì)(M+16)N-氧化物的量低于10%AUC，9%AUC，8%AUC，7%AUC，6%AUC，5%AUC，4%AUC，3%AUC，2%AUC，1%AUC，0.9%AUC，0.8%AUC，0.7%AUC，0.6%AUC，0.5%AUC，0.4%AUC，0.3%AUC，0.2%AUC，0.1%AUC，0.09%AUC，0.08%AUC，0.07%AUC，0.06%AUC，0.05%AUC，0.04%AUC，0.03%AUC，0.02%AUC，或0.01%AUC。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在氧化完成時(shí)，過(guò)氧化雜質(zhì)(M+16)N-氧化物的量低于3%AUC，2%AUC，1%AUC，0.9%AUC，0.8%AUC，0.7%AUC，0.6%AUC，0.5%AUC，0.4%AUC，0.3%AUC，0.2%AUC，0.1%AUC，0.09%AUC，0.08%AUC，0.07%AUC，0.06%AUC，0.05%AUC，0.04%AUC，0.03%AUC，0.02%AUC，或0.01%AUC。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括濃縮包含化合物6的反應(yīng)混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括加堿。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括在濃縮化合物6后加堿。在一個(gè)實(shí)施方案中，堿為氫氧化物(例如，NaOH，KOH)。在一個(gè)實(shí)施方案中，氫氧化物為KOH。在一個(gè)實(shí)施方案中，從2-甲基四氫呋喃和乙酸異丙酯分離化合物6。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括用2-MeTHF洗滌包含化合物6的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括在洗滌后去除水層，以得到有機(jī)層。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括用鹽水洗滌有機(jī)層，并除去產(chǎn)生的水層。在一個(gè)實(shí)施方案中，用鹽水洗滌和除去產(chǎn)生的水層的步驟重復(fù)一次，二次，或三次。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括在洗滌步驟后向有機(jī)層加入IPAc。在一個(gè)實(shí)施方案中，使IPAc與2-MeTHF混合。在一個(gè)實(shí)施方案中，向有機(jī)層加入IPAc導(dǎo)致形成漿料。在一個(gè)實(shí)施方案中，用乙酸異丙酯、乙酸異丙酯/庚烷混合物和庚烷洗滌化合物6。在一個(gè)實(shí)施方案中，異丙酯/庚烷混合物之比為1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，使化合物6純化，包括使化合物6溶于DCM，并使溶解的化合物6洗脫通過(guò)DCM硅膠。在一個(gè)實(shí)施方案中，用EtOAc沖洗硅膠。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟2。步驟2是化合物3還原生成苯胺化合物4：。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟2和3。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟2的還原劑為經(jīng)過(guò)催化Pd/C的氫氣。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟2的極性非質(zhì)子溶劑為EtOAc、四氫呋喃或2-甲基四氫呋喃。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟2的分離化合物4包括通過(guò)Celite?過(guò)濾反應(yīng)混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離進(jìn)一步包括加入甲醇，并濃縮反應(yīng)至干。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟1。步驟1是1’和2’的取代反應(yīng)，以提供化合物3：。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟1、2和3。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟1的極性非質(zhì)子溶劑為二甲基乙酰胺。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟1的堿為Na2CO3。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟1的反應(yīng)混合物的溫度為約90℃至約110℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約95℃至約105℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約100℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，1’通過(guò)與醇混合形成漿料來(lái)純化。在一個(gè)實(shí)施方案中，醇為甲醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟1a。步驟1a是1和2的交叉偶聯(lián)反應(yīng)，以產(chǎn)生化合物3：。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟1a、2和3。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟1a的鈀催化劑為Pd(II)催化劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，Pd(II)催化劑為Pd2(dba)3。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟1a的磷配位體為4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫噸。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟1a的極性非質(zhì)子溶劑為四氫呋喃。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟1a的反應(yīng)混合物的溫度為約60℃至約80℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物的溫度為約65℃至約75℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物的溫度為約70℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟4。步驟4是化合物6去保護(hù)以提供化合物7：。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟1、2、3和4。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟1a、2、3和4。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟4的極性非質(zhì)子溶劑為二氯甲烷。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟4的酸為甲磺酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟4的酸:化合物6之比為約5:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟4的反應(yīng)混合物在約1.5h至約3h內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物在約2h至約2.5h內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物在約2h內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟4中形成漿料。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括向漿料加水，去除產(chǎn)生的水層，并保留DCM層。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括向DCM層加水，并去除水層。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括合并水層，并用DCM洗滌該層。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括加堿。在一個(gè)實(shí)施方案中，堿為氫氧化物(例如，NaOH，KOH)。在一個(gè)實(shí)施方案中，氫氧化物為NaOH。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括在加堿后干燥有機(jī)層，以得到固體化合物7。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括在加堿后濃縮溶液，并加入IPAc。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟2’。步驟2’是化合物3還原生成中間體苯胺化合物4，在用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑后，使其與化合物5反應(yīng)，以生成化合物6’，化合物6’原位氧化提供化合物6：。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟1和2’。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟2’包括用極性質(zhì)子溶劑(例如MeOH)代替極性非質(zhì)子溶劑(例如，THF)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟2’中用于化合物3還原成苯胺化合物4的極性非質(zhì)子溶劑為乙酸乙酯、THF或2-MeTHF。在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑為THF。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟2’的還原劑為經(jīng)過(guò)催化Pd/C的氫氣。在一個(gè)實(shí)施方案中，氫氣在約20至約50psi的中壓。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物4包括通過(guò)Celite?過(guò)濾反應(yīng)混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離進(jìn)一步包括加入甲醇，并濃縮反應(yīng)至干。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟2’化合物4和化合物5反應(yīng)中使用的極性質(zhì)子溶劑為C1-4醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，極性質(zhì)子溶劑選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、仲丁醇和叔丁醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，極性質(zhì)子溶劑為甲醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟2’化合物4和化合物5反應(yīng)中使用的酸為有機(jī)酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，酸選自甲酸、乙酸和丙酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，酸為乙酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟2’中使用的酸:溶劑之比為約1:25至約25:1，1:20至約20:1，1:15至約15:1，約1:1至約15:1，約3:1至約12:1，或約5:1至約10:1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，酸:溶劑之比為約9:1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，乙酸:甲醇之比為約9:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟2’中使用的氧化劑為基于金屬或非金屬的鹽或催化劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑選自乙酸金屬鹽、過(guò)硼酸金屬鹽、金屬氯化物、鈀基催化劑及其水合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑選自過(guò)硼酸堿金屬鹽及其水合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑選自乙酸銅、過(guò)硼酸鈉、氯化鐵、鈀/碳及其水合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑選自Cu(OAc)2?H2O、NaBO3?4H2O、FeCl3?6H2O和10%Pd/C。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑為NaBO3?4H2O。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟2’化合物4和化合物5反應(yīng)中反應(yīng)混合物的溫度為約10℃至約30℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約15℃至約25℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約20℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物的溫度為約10℃至約60℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約30℃至約50℃。在另一個(gè)實(shí)施方案中，溫度為約40℃。在一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約40小時(shí)至約50小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約43小時(shí)至約46小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約45小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約10小時(shí)至約18小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約12小時(shí)至約16小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將反應(yīng)混合物攪拌約12小時(shí)，約13小時(shí)，約14小時(shí)，或約15小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約40小時(shí)至約50小時(shí)內(nèi)完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約43小時(shí)至約46小時(shí)內(nèi)完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約45小時(shí)內(nèi)完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約10小時(shí)至約18小時(shí)內(nèi)完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約12小時(shí)至約16小時(shí)內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在約12小時(shí)，約13小時(shí)，約14小時(shí)，或約15小時(shí)內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化在產(chǎn)生顯著量的化合物6的過(guò)氧化雜質(zhì)(M+16)N-氧化物之前完成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在氧化完成時(shí)，過(guò)氧化雜質(zhì)(M+16)N-氧化物的量低于10%AUC，9%AUC，8%AUC，7%AUC，6%AUC，5%AUC，4%AUC，3%AUC，2%AUC，1%AUC，0.9%AUC，0.8%AUC，0.7%AUC，0.6%AUC，0.5%AUC，0.4%AUC，0.3%AUC，0.2%AUC，0.1%AUC，0.09%AUC，0.08%AUC，0.07%AUC，0.06%AUC，0.05%AUC，0.04%AUC，0.03%AUC，0.02%AUC，或0.01%AUC。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在氧化完成時(shí)，過(guò)氧化雜質(zhì)(M+16)N-氧化物的量低于3%AUC，2%AUC，1%AUC，0.9%AUC，0.8%AUC，0.7%AUC，0.6%AUC，0.5%AUC，0.4%AUC，0.3%AUC，0.2%AUC，0.1%AUC，0.09%AUC，0.08%AUC，0.07%AUC，0.06%AUC，0.05%AUC，0.04%AUC，0.03%AUC，0.02%AUC，或0.01%AUC。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括濃縮包含化合物6的反應(yīng)混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括加堿。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括在濃縮化合物6后加堿。在一個(gè)實(shí)施方案中，堿為氫氧化物(例如，NaOH，KOH)。在一個(gè)實(shí)施方案中，氫氧化物為KOH。在一個(gè)實(shí)施方案中，從2-甲基四氫呋喃和乙酸異丙酯分離化合物6。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括用2-MeTHF洗滌包含化合物6的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括在洗滌后去除水層，以得到有機(jī)層。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括用鹽水洗滌有機(jī)層，并除去產(chǎn)生的水層。在一個(gè)實(shí)施方案中，用鹽水洗滌和除去產(chǎn)生的水層的步驟重復(fù)一次，二次，或三次。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物6包括在洗滌步驟后向有機(jī)層加入IPAc。在一個(gè)實(shí)施方案中，使IPAc與2-MeTHF混合。在一個(gè)實(shí)施方案中，向有機(jī)層加入IPAc導(dǎo)致形成漿料。在一個(gè)實(shí)施方案中，用乙酸異丙酯、乙酸異丙酯/庚烷混合物和庚烷洗滌化合物6。在一個(gè)實(shí)施方案中，異丙酯/庚烷混合物之比為1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，使化合物6純化，包括使化合物6溶于DCM，并使溶解的化合物6通過(guò)DCM硅膠洗脫。在一個(gè)實(shí)施方案中，用EtOAc沖洗硅膠。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟3’。步驟3’是化合物6去保護(hù)以提供化合物7：。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括步驟1、2’和3’。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟3’的極性非質(zhì)子溶劑為二氯甲烷。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟3’的酸為甲磺酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，酸:化合物6之比為約5:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟3’的反應(yīng)混合物在約1.5h至約3h內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟3’的反應(yīng)混合物在約2h至約2.5h內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟3’的反應(yīng)混合物在約2h內(nèi)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟3’中形成漿料。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括向漿料加水，去除產(chǎn)生的水層，并保留DCM層。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括向DCM層加水，并去除水層。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括合并水層，并用DCM洗滌該層。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括加堿。在一個(gè)實(shí)施方案中，堿為氫氧化物(例如，NaOH，KOH)。在一個(gè)實(shí)施方案中，氫氧化物為NaOH。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括在加堿后干燥有機(jī)層，以得到固體化合物7。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離化合物7包括在加堿后濃縮溶液，并加入IPAc。先前方法缺陷本申請(qǐng)的方法相對(duì)于先前‘203申請(qǐng)中公開的方法是個(gè)改進(jìn)?！?03專利中制備化合物7鹽酸鹽的方法描繪于方案2中：方案2如方案2中‘203申請(qǐng)的方法以羧酸AA開始，羧酸AA用疊氮磷酸二苯酯(DPPA)經(jīng)過(guò)Curtius重排，隨后用芐醇捕集異氰酸酯，這產(chǎn)生Cbz保護(hù)的中間體BB。在氫解條件下去保護(hù)提供苯胺2’。苯胺2’加到2,6-二氯-3-硝基吡啶得到粗CC。在通過(guò)柱層析純化后，使CC經(jīng)過(guò)還原條件，并與2-氨基煙堿醛(5)環(huán)化，以提供環(huán)化化合物DD。環(huán)化產(chǎn)物Suzuki偶聯(lián)到苯硼酸以提供化合物6。在6用HCl在二氧雜環(huán)己烷中去保護(hù)后，所需的化合物7鹽酸鹽分離為非晶固體。‘203申請(qǐng)的方法難以放大，實(shí)施花費(fèi)大，并且不適合工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)。‘203申請(qǐng)的方法的缺陷至少如下：1.采取5%總收率的線性路線，2.利用可能爆炸的疊氮化學(xué)物質(zhì)，3.需要昂貴的柱層析純化，4.用鈀化學(xué)物質(zhì)制備倒數(shù)第二的中間體6，這導(dǎo)致7中不可接受的鈀雜質(zhì)水平，5.在合成開始引入昂貴材料，和6.使用Na2S2O4采用復(fù)雜的氧化還原化學(xué)。本發(fā)明的方法是制備7的優(yōu)勢(shì)路線，并克服以上所列缺陷。例如，本發(fā)明的方法在路線早期安排利用鈀的步驟，這減少最終產(chǎn)物化合物7中鈀雜質(zhì)的量(若有的話)。例如，在本發(fā)明的方法中在早期安排涉及鈀的產(chǎn)生化合物1的反應(yīng)(方案1或方案1’)和產(chǎn)生化合物3的交叉偶聯(lián)反應(yīng)(方案1或方案1’)。相反，‘203方法用鈀化學(xué)物質(zhì)制備倒數(shù)第二的中間體6，這導(dǎo)致最終產(chǎn)物化合物7中的雜質(zhì)問(wèn)題。本發(fā)明的方法也縮減為減少的步驟數(shù)，并排除需要疊氮化學(xué)物質(zhì)和Na2S2O4(見方案2，制備化合物DD)。已知疊氮物危險(xiǎn)，并且有毒。Na2S2O4是一種易燃固體，并且可在水分和空氣存在下點(diǎn)燃。因此，排除需要疊氮化學(xué)物質(zhì)和Na2S2O4使本發(fā)明的方法更安全，更實(shí)用。本發(fā)明的方法可大規(guī)模進(jìn)行，而‘203申請(qǐng)的方法花費(fèi)大，且難以放大。例如，用‘203方法的過(guò)程制備化合物2’包括用DPPA使化合物BB經(jīng)過(guò)Curtius重排，隨后用過(guò)量芐醇捕集異氰酸酯(見方案2，化合物BB的制備)。雖然這種化學(xué)適用于小規(guī)模，但大規(guī)模進(jìn)行困難，且富有挑戰(zhàn)性。在小規(guī)模，Cbz保護(hù)的化合物BB只用沉淀和柱純化二者分兩次收獲以62%的適中收率制備，這是勞動(dòng)量大的，并且大規(guī)模進(jìn)行花費(fèi)極高。本發(fā)明的方法用化合物3作為合成中間體(方案1或方案1’)，這類似于‘203合成中化合物CC的制備(方案2)?！?03方法的化合物CC制備一般只提供50%收率，而化合物3用本發(fā)明的方法提供86%收率。具體地講，在Na2CO3存在下，在DMA中在1’和2’的反應(yīng)中得到化合物3?！?03方法的缺陷的另一個(gè)實(shí)例涉及通過(guò)用無(wú)水HCl在二氧雜環(huán)己烷中直接處理將6去保護(hù)，得到作為非晶固體的7鹽酸鹽(方案2)。需要在二氧雜環(huán)己烷中高過(guò)量的HCl(10equiv.)。在去保護(hù)期間，6的鹽立即從溶液沉淀析出，由于非均相性質(zhì)使反應(yīng)變慢，且對(duì)監(jiān)測(cè)是個(gè)挑戰(zhàn)。由于離子色譜分析報(bào)告的值在二鹽和三鹽理論值之間，分離的產(chǎn)物可能是二鹽和三鹽(HCl)的混合物。將‘203方法的一些試劑和條件應(yīng)用于本發(fā)明路線的努力也是失敗的。例如，用‘203申請(qǐng)的方法從化合物3開始制備化合物6有很多復(fù)雜性。具體地講，用這些條件從方案2的CC產(chǎn)生化合物DD以使本發(fā)明的3轉(zhuǎn)化成6有很多缺陷(方案3)。方案3使CC轉(zhuǎn)化成DD的‘203方法復(fù)雜，并且作為一鍋反應(yīng)進(jìn)行(方案2)。應(yīng)用‘203方法的條件，(本發(fā)明的)3的硝基部分被還原成苯胺衍生物，衍生物然后與醛5反應(yīng)，生成推測(cè)的亞胺中間體。分子內(nèi)加成得到環(huán)化中間體6’，中間體6’在整個(gè)反應(yīng)進(jìn)程中意外地穩(wěn)定，可通過(guò)LCMS分析觀察到。6’氧化提供6。對(duì)所進(jìn)行的反應(yīng)認(rèn)識(shí)到一些問(wèn)題。最難的問(wèn)題是在這些條件下顯著量的去保護(hù)的6。在整理期間確定，經(jīng)猝滅水相的pH很酸性(例如，pH=3)，這可能貢獻(xiàn)大量去保護(hù)產(chǎn)物。6的沉淀使整理操作復(fù)雜化，并且使得不太可能放大。所利用的這些條件不利于將來(lái)發(fā)展機(jī)遇。由于‘203方法的條件應(yīng)用于本發(fā)明合成路線的復(fù)雜性，開發(fā)新條件克服上述復(fù)雜性?；蛘?，不應(yīng)用‘203方法使3轉(zhuǎn)化成6(這導(dǎo)致6去保護(hù)和整理復(fù)雜性)，所要求保護(hù)的方法是利用二步法從4合成6(方案4)的新方法。方案4第一步是3不連續(xù)還原成苯胺4，隨后形成亞胺，環(huán)化，然后氧化。用Pd/C(例如，10%)使3氫解，以高收率(例如，定量收率)提供化合物4。然后用多種反應(yīng)條件進(jìn)行一系列反應(yīng)，以確定實(shí)施例2環(huán)化(見表4)的可行性。化合物4容易轉(zhuǎn)化成化合物6，并以約86%收率大規(guī)模分離化合物6。本發(fā)明的方法克服203方法的缺陷，得到對(duì)大規(guī)模制備安全的合成方法。本發(fā)明方法的發(fā)展和優(yōu)化本發(fā)明方法的發(fā)展和優(yōu)化包括化合物1、1’、2、2’、3、4、6和7的合成。這些步驟按以下順序討論：步驟1(合成化合物3)，方案1的步驟2(合成化合物4)，方案1的步驟3(合成化合物6)，方案1’的步驟2’(合成中間體化合物4，然后化合物6)，方案1的步驟4或方案1’的步驟3’(合成化合物7)，然后合成起始化合物1、1’、2和2’。最后討論具有高Pd含量的6和7的純化。步驟1：合成化合物3在一個(gè)實(shí)施方案中，可通過(guò)使用取代反應(yīng)和/或交叉偶聯(lián)反應(yīng)(方案5)合成化合物3。方案5在一個(gè)實(shí)施方案中，使用取代反應(yīng)，通過(guò)將化合物1’和2’在極性非質(zhì)子溶劑(例如，DMA)中連同堿(例如，Na2CO3，2equiv.)加熱到約100℃過(guò)夜，制備化合物3。一旦反應(yīng)完成，通常使反應(yīng)混合物冷卻到環(huán)境溫度，并加入約3%NaCl水溶液和EtOAc。在一個(gè)實(shí)施方案中，用Na2SO4干燥EtOAc層，并濃縮成油?？墒勾只衔?重新溶于EtOAc，并用另外的水洗滌，以去除殘余DMA。在一個(gè)實(shí)施方案中，以較大規(guī)模(例如，30g)進(jìn)行反應(yīng)，通常在整理期間從溶液沉淀出化合物3?；衔?可以約64%收率分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，萃取溶劑為2-MeTHF。在一個(gè)實(shí)施方案中，可加入庚烷作為反溶劑，以提高分離收率，而無(wú)純度降低。在一個(gè)實(shí)施方案中，以約85%收率從2-MeTHF/庚烷(例如，50/502-MeTHF/庚烷(18vol.)溶液)結(jié)晶化合物3。實(shí)施例3中的表6提供2-MeTHF和庚烷中化合物3溶解度分析的詳細(xì)討論。在另一個(gè)實(shí)施方案中，進(jìn)行化合物1和化合物2的交叉偶聯(lián)反應(yīng)生成化合物3。在一個(gè)實(shí)施方案中，所用催化劑的量為約5%摩爾，所用磷配位體的量為約5%摩爾。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物3一般以約81%收率和極佳純度(>99%AUC)作為結(jié)晶固體得到。在一個(gè)實(shí)施方案中，在所用催化劑的量小于約2.5%摩爾，且所用磷配位體的量小于約2.5%摩爾時(shí)，反應(yīng)可在約23小時(shí)后停留在73%(AUC)。在一個(gè)實(shí)施方案中，加約1%摩爾Pd2(dba)3和約2%摩爾Xantphos在約47小時(shí)后導(dǎo)致完全轉(zhuǎn)化成化合物3，得到約75%收率化合物3(98.98%AUC)，為深紅色結(jié)晶固體。實(shí)施例4提供涉及交叉偶聯(lián)反應(yīng)的初始試驗(yàn)的詳細(xì)討論。取代反應(yīng)和交叉偶聯(lián)反應(yīng)二者均產(chǎn)生化合物3(完全細(xì)節(jié)在實(shí)施例1中)。然而，用交叉偶聯(lián)反應(yīng)確定幾個(gè)缺陷。這些缺陷是(1)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)在THF中緩慢。(2)通常需要重新填充催化劑和配位體以完成反應(yīng)。(3)在整理和分離期間需要將溶劑從THF交換為EtOAc。(4)有必要進(jìn)行炭處理，以去除雜質(zhì)；(5)過(guò)量使用原料化合物2，然而，在反應(yīng)完成后剩余顯著量的化合物2。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)溶劑從THF切換到2-MeTHF，以試圖解決以上列舉的問(wèn)題。這使反應(yīng)在較高溫度進(jìn)行，也簡(jiǎn)化整理，因?yàn)?-Me-THF水不混溶，且不需要溶劑交換到EtOAc。然而，這種改進(jìn)不解決所有以上列舉的問(wèn)題。實(shí)施例5提供優(yōu)化交叉偶聯(lián)反應(yīng)的完全細(xì)節(jié)?？偟膩?lái)講，交叉偶聯(lián)反應(yīng)緩慢，需要再填充催化劑和配位體以完成反應(yīng)；分離步驟勞動(dòng)量大；去除與2A相關(guān)的雜質(zhì)富有挑戰(zhàn)性(見實(shí)施例9)；且在用交叉偶聯(lián)方法制備時(shí)，在化合物3中存在升高含量的殘余鈀。為了滿足最終活性藥物成分中Pd的可接受水平，需要用Pd清除劑純化7(見實(shí)施例10)。因此，在本發(fā)明的方法中，尋求1’和2’的取代反應(yīng)產(chǎn)生化合物3。步驟2：合成化合物4在一個(gè)實(shí)施方案中，用氫氣在適中壓力通過(guò)化合物3催化氫化合成化合物4。催化氫化化合物3可在極性非質(zhì)子溶劑(例如，EtOAc、THF、2-MeTHF)中用Pd/C(例如，10%，10%重量)在通常40psi氫氣下進(jìn)行。一般在約3小時(shí)后通過(guò)HPLC分析完成反應(yīng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在通過(guò)Celite?過(guò)濾去除催化劑后，通過(guò)濃縮濾液至干，可以定量收率分離化合物4，為泡沫。在適中壓力下用氫氣反應(yīng)一般具有高收率。實(shí)施例6提供探索過(guò)的其它反應(yīng)條件。步驟3：合成化合物6在一個(gè)實(shí)施方案中，在氧化劑和酸(例如，乙酸)存在下在極性質(zhì)子溶劑(例如，甲醇)中通過(guò)使化合物4與化合物5(2-氨基煙堿醛)反應(yīng)合成化合物6。為了達(dá)到在本發(fā)明方法中使用的條件，研究很多優(yōu)化反應(yīng)。見實(shí)施例7。例如，研究了如EtOH、PrOH、甲苯和DMSO的溶劑，但反應(yīng)緩慢。為了確定適合的反應(yīng)條件，考察不同比率和溫度的HOAc/MeOH混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，約9:1(v/v)的酸:溶劑比以良好收率提供化合物6。在一個(gè)實(shí)施方案中，乙酸:甲醇比為約9:1(v/v)。如果反應(yīng)溫度提高到約50℃，可觀察到雜質(zhì)7：雜質(zhì)7。在一個(gè)實(shí)施方案中，在環(huán)境溫度利用10個(gè)體積AcOH/MeOH(約9:1)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)空氣氣氛開放在環(huán)境溫度在AcOH/MeOH(10vol.)中攪拌化合物4(1.0equiv.)和化合物5(1.05equiv.)過(guò)夜提供接近完全的向化合物6的轉(zhuǎn)化。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物4和化合物5在選自乙酸金屬鹽、過(guò)硼酸金屬鹽、金屬氯化物、鈀基催化劑及其水合物的氧化劑存在下反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物4和化合物5在過(guò)硼酸堿金屬鹽及其水合物存在下反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使化合物4和化合物5在選自乙酸銅、過(guò)硼酸鈉、氯化鐵、鈀/碳及其水合物的氧化劑存在下反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使化合物4和化合物5在選自Cu(OAc)2?H2O、NaBO3?4H2O、FeCl3?6H2O和10%Pd/C的氧化劑存在下反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使化合物4和化合物5在NaBO3?4H2O存在下反應(yīng)。分離化合物6并非不重要，需要廣泛研究以確定分離6的適合條件。見實(shí)施例7。在一個(gè)實(shí)施方案中，一旦反應(yīng)混合物完成，就濃縮反應(yīng)混合物(55℃)，直至蒸餾停止。在一個(gè)實(shí)施方案中，加入2-MeTHF，隨后加入20%KOH至pH>13。在一個(gè)實(shí)施方案中，去除水層，并用5%鹽水溶液洗滌有機(jī)層。在一個(gè)實(shí)施方案中，去除第一次洗滌后的水層，并進(jìn)行第二次5%鹽水洗滌。在一個(gè)實(shí)施方案中，去除第二次洗滌后的水層。在一個(gè)實(shí)施方案中，向有機(jī)溶液加入IPAc(0.5%重量2-MeTHF)，導(dǎo)致形成漿料。在一個(gè)實(shí)施方案中，然后過(guò)濾粗化合物6，并用IPAc、IPAc/正庚烷(1/1)洗滌，然后用正庚烷洗滌。在一個(gè)實(shí)施方案中，在濾器上干燥化合物6經(jīng)歷2小時(shí)后，將化合物6轉(zhuǎn)移到真空烘箱，并在約40℃干燥過(guò)夜。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物6以約86%收率(考慮溶劑含量)，97.3%(AUC)分離，為淺黃色固體。在一個(gè)實(shí)施方案中，1HNMR(CDCl3)顯示，分離的化合物6包含0.8%重量IPAc、0.7%重量2-MeTHF，沒(méi)有庚烷。在另一個(gè)實(shí)施方案中，主要雜質(zhì)為以2.3%存在的N-氧化物(M+16)。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)使6溶于DCM，并使溶解的6洗脫通過(guò)預(yù)填充(DCM)硅膠塞，完成化合物6純化。在一個(gè)實(shí)施方案中，然后用EtOAc洗柱。一般收集兩個(gè)級(jí)分，并通過(guò)HPLC分析。在一個(gè)實(shí)施方案中，觀察到?jīng)]有N-氧化物雜質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將級(jí)分合并，且部分濃縮，得到稠漿。在一個(gè)實(shí)施方案中，加入正庚烷，并攪拌混合物約15分鐘。過(guò)濾經(jīng)純化化合物6，用庚烷洗滌，并在真空烘箱中在約45℃干燥。在一個(gè)實(shí)施方案中，在干燥約15小時(shí)后，得到化合物6[約89%回收率，約100%(AUC)]，為灰白色固體。一般1H-NMR顯示僅微量EtOAc，沒(méi)有正庚烷存在。方案1’中的步驟2’：合成中間體化合物4，然后合成化合物6在一個(gè)實(shí)施方案中，用氫氣在適中壓力通過(guò)化合物3催化氫化合成中間體化合物4。催化氫化化合物3可在極性非質(zhì)子溶劑(例如，EtOAc、THF、2-MeTHF)中用Pd/C(例如，10%，10%重量)在通常40psi的氫氣下進(jìn)行。通常在約3小時(shí)后通過(guò)HPLC分析完成反應(yīng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在與化合物5反應(yīng)前不分離中間體化合物4。在適中壓力下用氫氣反應(yīng)一般具有高收率。在一個(gè)實(shí)施方案中，用極性質(zhì)子溶劑代替極性非質(zhì)子溶劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，在氧化劑和酸(例如，乙酸)存在下在極性質(zhì)子溶劑(例如，甲醇)中通過(guò)使化合物4與化合物5(2-氨基煙堿醛)反應(yīng)合成化合物6。為了達(dá)到在本發(fā)明方法中使用的條件，研究很多優(yōu)化反應(yīng)。見實(shí)施例7。例如，研究了如EtOH、PrOH、甲苯和DMSO的溶劑，但反應(yīng)緩慢。為了確定適合反應(yīng)條件，考察不同比率和溫度的HOAc/MeOH混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，約9:1(v/v)的酸:溶劑比以良好收率提供化合物6。在一個(gè)實(shí)施方案中，乙酸:甲醇比為約9:1(v/v)。如果反應(yīng)溫度提高到約50℃，可觀察到雜質(zhì)7：雜質(zhì)7。在一個(gè)實(shí)施方案中，在環(huán)境溫度利用10個(gè)體積AcOH/MeOH(約9:1)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)空氣氣氛開放在環(huán)境溫度在AcOH/MeOH(10vol.)中攪拌化合物4(1.0equiv.)和化合物5(1.05equiv.)過(guò)夜，提供接近完全的向化合物6的轉(zhuǎn)化。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物4和化合物5在選自乙酸金屬鹽、過(guò)硼酸金屬鹽、金屬氯化物、鈀基催化劑及其水合物的氧化劑存在下反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物4和化合物5在過(guò)硼酸堿金屬鹽及其水合物存在下反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使化合物4和化合物5在選自乙酸銅、過(guò)硼酸鈉、氯化鐵、鈀/碳及其水合物的氧化劑存在下反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使化合物4和化合物5在選自Cu(OAc)2?H2O、NaBO3?4H2O、FeCl3?6H2O和10%Pd/C的氧化劑存在下反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使化合物4和化合物5在NaBO3?4H2O存在下反應(yīng)。分離化合物6并非不重要，需要廣泛研究以確定分離6的適合條件。見實(shí)施例7。在一個(gè)實(shí)施方案中，一旦反應(yīng)混合物完成，就濃縮反應(yīng)混合物(55℃)，直至蒸餾停止。在一個(gè)實(shí)施方案中，加入2-MeTHF，隨后加入20%KOH至pH>13。在一個(gè)實(shí)施方案中，去除水層，并用5%鹽水溶液洗滌有機(jī)層。在一個(gè)實(shí)施方案中，去除第一次洗滌后的水層，并進(jìn)行第二次5%鹽水洗滌。在一個(gè)實(shí)施方案中，去除第二次洗滌后的水層。在一個(gè)實(shí)施方案中，向有機(jī)溶液加入IPAc(0.5%重量2-MeTHF)，導(dǎo)致形成漿料。在一個(gè)實(shí)施方案中，然后過(guò)濾粗化合物6，并用IPAc、IPAc/正庚烷(1/1)洗滌，然后用正庚烷洗滌。在一個(gè)實(shí)施方案中，在濾器上干燥化合物6經(jīng)歷2小時(shí)后，將化合物6轉(zhuǎn)移到真空烘箱，并在約40℃干燥過(guò)夜。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物6以約86%收率(考慮溶劑含量)，97.3%(AUC)分離，為淺黃色固體。在一個(gè)實(shí)施方案中，1HNMR(CDCl3)顯示，分離的化合物6包含0.8%重量IPAc、0.7%重量2-MeTHF，沒(méi)有庚烷。在另一個(gè)實(shí)施方案中，主要雜質(zhì)為以2.3%存在的N-氧化物(M+16)。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)使6溶于DCM，并使溶解的6洗脫通過(guò)預(yù)填充(DCM)硅膠塞，完成化合物6純化。在一個(gè)實(shí)施方案中，然后用EtOAc洗柱。一般收集兩個(gè)級(jí)分，并通過(guò)HPLC分析。在一個(gè)實(shí)施方案中，觀察到?jīng)]有N-氧化物雜質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將級(jí)分合并，且部分濃縮，得到稠漿。在一個(gè)實(shí)施方案中，加入正庚烷，并攪拌混合物約15分鐘。過(guò)濾經(jīng)純化化合物6，用庚烷洗滌，并在真空烘箱中在約45℃干燥。在一個(gè)實(shí)施方案中，在干燥約15小時(shí)后，得到化合物6[約89%回收率，約100%(AUC)]，為灰白色固體。通常，1H-NMR顯示僅微量EtOAc，沒(méi)有正庚烷存在。方案1中的步驟4或方案1’中的步驟3’：合成化合物7用不同酸(如TFA)在不同溶劑(如DCE、苯甲醚和IPA)中研究化合物6轉(zhuǎn)化成化合物7(見實(shí)施例8)。在實(shí)施例8中的優(yōu)化研究表明，二氯甲烷(DCM)和甲磺酸(MSA)適合使化合物6轉(zhuǎn)化成化合物7。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)將化合物6溶于DCM合成化合物7，并經(jīng)約15分鐘加入MSA(例如，Tmax=29?C)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，MSA:化合物6之比為約5:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，在約2小時(shí)后呈現(xiàn)稠漿，加入水，并攪拌混合物約40分鐘。去除水層，并加入水，以萃取DCM層。合并水層，然后用DCM洗滌。在一個(gè)實(shí)施方案中，向水層加入DCM，并使混合物呈堿性(例如，用6NNaOH)至pH=13。使層分離，并用DCM重新萃取水層。通常經(jīng)Na2SO4干燥有機(jī)層，然后濃縮，得到固體沉淀。在一個(gè)實(shí)施方案中，進(jìn)一步濃縮混合物，并加入IPAc。在一個(gè)實(shí)施方案中，再次縮減混合物，并加入IPAc。加入另外的IPAc，并攪拌漿料過(guò)夜。在一個(gè)實(shí)施方案中，過(guò)濾化合物7，用IPAc洗滌，并在真空烘箱(例如，>28英寸汞柱)中在約45℃干燥約2天。得到化合物7(約87%收率，約99.8%AUC)，為淺黃色固體。在一個(gè)實(shí)施方案中，1HNMR(CDCl3)顯示，分離的7包含IPAc(0.5%重量)和DCM(<0.1%重量)。合成起始化合物1、1’、2和2’制備化合物1、1’、2和2’需要廣泛篩選和優(yōu)化，以獲得安全高收率方法。制備這些起始化合物的研究細(xì)節(jié)提供于實(shí)施例9中。純化具有高Pd含量的6和7在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)交叉偶聯(lián)路線制備的化合物3具有高含量殘余鈀(例如，1888ppm)。如果這批化合物3通過(guò)隨后步驟帶到化合物6，此批中化合物6的殘余鈀含量一般仍很高(例如，281ppm)。因此，為了提供具有小于20ppm殘余鈀的化合物7，開始關(guān)于從化合物6和7游離堿純化鈀的試驗(yàn)，以確定去除殘余鈀的方法。見實(shí)施例10。在一個(gè)實(shí)施方案中，清除劑在化合物7游離堿的情況下比化合物6更有效。在另一個(gè)實(shí)施方案中，清除劑為QuadraSilMP。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用QuadraSilMP作為清除劑從化合物7樣品去除鈀。定義為方便起見，在此總結(jié)說(shuō)明書、實(shí)施例和所附權(quán)利要求中使用的某些術(shù)語(yǔ)。本發(fā)明的方法涉及本申請(qǐng)中所述的任何方法。HPLC為高效液相色譜。ACN或MeCN為乙腈。DMA為二甲基乙酰胺。MTBE為甲基叔丁基醚EtOH為乙醇。DMSO為二甲亞砜。DPPA為疊氮磷酸二苯酯。NMR為核磁共振。MS為質(zhì)譜。RB為圓底。DI為去離子水。DCM為二氯甲烷。DCE為1,2-二氯乙烷。TFA為三氟乙酸。MSA為甲磺酸。THF為四氫呋喃。2-MeTHF為2-甲基四氫呋喃。EtOAc為乙酸乙酯。IPAc為乙酸異丙酯。IPA為異丙醇。Xantphos為4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫噸。在本說(shuō)明書中，除非上下文另外清楚地指明，否則單數(shù)形式也包括復(fù)數(shù)。除非另外定義，否則本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)均具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員普遍了解的相同含義。如果發(fā)生沖突，應(yīng)以本說(shuō)明書為準(zhǔn)。除非另外指明，本文所用的所有百分比和比率均以重量計(jì)。本文引用的所有公布和專利文獻(xiàn)均通過(guò)引用結(jié)合到本文中，如同明確和單獨(dú)指定每個(gè)這些公布或文獻(xiàn)通過(guò)引用結(jié)合到本文。引用公布和專利文獻(xiàn)不旨在認(rèn)定任何為相關(guān)現(xiàn)有技術(shù)，它也不構(gòu)成任何關(guān)于其內(nèi)容或日期的認(rèn)定?，F(xiàn)已通過(guò)書面說(shuō)明描述了本發(fā)明，但本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到，可在不同的實(shí)施方案中實(shí)施本發(fā)明，且前文的描述和以下實(shí)施例是為了說(shuō)明，而不是對(duì)以下權(quán)利要求的限制。實(shí)施例實(shí)施例1：制備化合物1、1’、2、2’、3、4、6和7制備1向裝配有測(cè)溫探頭、氬入口管和回流冷凝器的100L夾套反應(yīng)器加入甲苯(30L,30vol.)、EtOH(6L,6vol.)、2-氨基-3-硝基-6-氯-吡啶(1.0kg,5.76mol.)、苯基硼酸(772g,6.34mol.)，隨后加入DI水(6.0L,6vol.)中K2CO3(1.75kg,12.67mol)的溶液。在室溫?cái)嚢杷没旌衔?0分鐘。在向反應(yīng)混合物加Pd(PPh3)4(67.1g,1mol)之前，用氬使反應(yīng)混合物脫氣30分鐘，然后使所得混合物脫氣另外10分鐘。然后將反應(yīng)加熱到80-85℃。通過(guò)HPLC斷定在12小時(shí)內(nèi)反應(yīng)完成。使反應(yīng)冷卻至室溫，并用水(10L,10vol.)稀釋。去除有機(jī)層，水層用MTBE(2x10L,20vol.)萃取。用炭處理合并的有機(jī)層，并加熱到50℃經(jīng)歷1小時(shí)。熱溶液通過(guò)Celite?床過(guò)濾，用熱(~50℃)MTBE(2L,2vol.)洗滌床，并經(jīng)硫酸鈉干燥濾液。在減壓下在低于50℃濃縮有機(jī)層，以得到深褐色固體(1.094kg,88.9%)。在庚烷(3.5L,3.5vol.)中研磨粗化合物3小時(shí)，濾出固體，用庚烷(1.5L,1.5vol.)洗滌并干燥，得到1(980.0g,79.6%,89.6%純度)，化合物通過(guò)1HNMR(CDCl3)和MS表征。制備1'向裝配有攪拌器、氬入口管、回流冷凝器和溫度計(jì)的3L三頸RB燒瓶加入乙腈(1500mL)、Cu(I)Cl(59.7g,604.0mmol)和亞硝酸叔丁酯(112.2mL,929mmol)。將混合物加熱到40-50℃，然后分批加入1(100.0g,467.3mmol)。在40-50℃攪拌所得混合物1小時(shí)，并通過(guò)HPLC斷定反應(yīng)完成。用氯化銨水溶液(2.0L,20vol.)猝滅反應(yīng)，并用MTBE(2.0L,20vol.)稀釋。去除有機(jī)層，水層用MTBE(2x1L,20vol.)萃取。用炭處理合并的有機(jī)層，并加熱到50℃。熱溶液通過(guò)Celite?墊過(guò)濾，用熱MTBE(1L,1vol.)洗滌Celite?墊，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗1'(61.1g,60.7%)。在甲醇(183mL，相對(duì)于粗重3vol.)中研磨粗化合物15分鐘。將固體過(guò)濾，用甲醇(30mL)洗滌并干燥，得到1'(48.0g,43.4%)。在環(huán)境溫度用庚烷(100mL,1vol.)研磨此化合物1小時(shí)，過(guò)濾，用庚烷(25mL)洗滌并干燥，得到1'，為黃色固體(42.02g,38.5%,97.6%純度)?；衔锿ㄟ^(guò)1HNMR(CDCl3)和MS表征。用這種方法制備另外的批料，結(jié)果可見于表1中。表1.從1制備1'從1制備1a向裝配有攪拌器、氬入口管、回流冷凝器和溫度計(jì)的3L三頸圓底燒瓶加入1(200.0g,929.3mmol)、THF(1600mL,8vol.)和DI水(400mL,2vol.)。在室溫?cái)嚢杷没旌衔?0分鐘，然后經(jīng)10分鐘時(shí)間加入亞硝酸叔丁酯(110.3mL,929.3mmol,1.0equiv.)。加熱反應(yīng)混合物到55-60℃，并攪拌14小時(shí)(在反應(yīng)過(guò)程期間發(fā)現(xiàn)從溶液沉降出化合物1a)。14小時(shí)后，HPLC分析顯示存在~18.7%的1，然后使反應(yīng)混合物冷卻到40℃，并加入亞硝酸叔丁酯(110.3mL,929.3mmol,1.0equiv.)，然后加熱到60℃，并攪拌20小時(shí)。34小時(shí)后，HPLC顯示5%的1。然后，向反應(yīng)混合物加入0.1equiv亞硝酸叔丁酯(11.1mL,92.6mmol,0.1equiv.)，并在60℃攪拌6小時(shí)。40小時(shí)后，HPLC顯示仍有5%原料，然后使反應(yīng)冷卻到室溫，過(guò)濾固體，用EtOAc(400mL,2vol.)洗滌固體并干燥，得到化合物1a(148.1g;73.8%,95.7%純度)，通過(guò)1HNMR(DMSO-d6)和MS表征。從1b和苯基硼酸制備1a向裝配有測(cè)溫探頭、氮入口管和回流冷凝器的100L夾套反應(yīng)器加入甲苯(27.0L,30vol.)和EtOH(5.4L,6vol.)，隨后加入6-氯-3-硝基吡啶-2(1H)-酮(900.0g,5.15mol)和苯基硼酸(640.4g,5.253mol)。在加入DI水(5.4L,6vol.)中K2CO3(173.9g,11.33mol)的溶液之前，將混合物在環(huán)境溫度攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物用氬在室溫脫氣30分鐘。加入四(三苯基膦)合鈀(178.2g,3%mol)，并加熱溶液到95-100℃(內(nèi)部溫度為77-79℃)，并攪拌3小時(shí)。3小時(shí)后，HPLC顯示2.8%原料和另一種單一雜質(zhì)(15.3%,1.17RRT)。在相同溫度保持反應(yīng)3小時(shí)。在6小時(shí)后，反應(yīng)沒(méi)有進(jìn)展，使混合物冷卻到室溫，脫氣30分鐘，加入另外5.0g四(三苯基膦)合鈀，并加熱溶液到95-100℃。在1小時(shí)后通過(guò)HPLC斷定反應(yīng)完成。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用DI水(11.7L,13vol.)稀釋反應(yīng)，隨后用EtOAc(18.0L,20vol.)稀釋，并攪拌1小時(shí)。使兩個(gè)層分離，在水層中留下固體。水層用EtOAc(13.5L,15vol.)萃取。用3NHCl中和合并的水層pH至6.2-6.8，在沉淀出更多固體時(shí)，濾出固體，用水(2x2.5L,5vol.)洗滌，在真空下在45-50℃干燥48小時(shí)，提供1a(761.1g，68.9%收率，78.0%純度)，為黃色固體?；衔锿ㄟ^(guò)1HNMR(DMSO-d6)和MS表征。在生成固體時(shí)，用3NNaOH(15L)萃取合并的有機(jī)(乙酸乙酯)層。將有機(jī)層分離。然后用3NHCl酸化水層pH至5-6，在沉淀出更多固體時(shí)，濾出固體，用DI水(2.0L)洗滌，并干燥得到化合物1a(140.0g，12.7%，93.8%純度，第2次收獲)。從1a制備1'向裝配有測(cè)溫探頭、氮入口管和回流冷凝器的20L夾套反應(yīng)器加入乙腈(6.0L,5vol.)，隨后加入1a(1.2kg,5.5mol.)，然后經(jīng)5分鐘時(shí)間加入POCl3(1.2L,1vol.)。在通過(guò)HPLC斷定反應(yīng)完成之前，經(jīng)12-15小時(shí)緩慢加熱反應(yīng)混合物到70-80℃。使反應(yīng)混合物冷卻到室溫，將反應(yīng)猝滅到低于10℃的冰水(24L)中，并用低于15℃6NNaOH溶液(~7.2L)堿化至pH：8-9。將沉淀的固體濾出，用DI水(3.6L,3vol.)洗滌并干燥，得到1'，為深棕色固體(786g,60.8%)。使粗1'溶于EtOAc(12L,10vol.)[注：觀察到一些不溶性固體]，并攪拌30分鐘。通過(guò)Celite?床過(guò)濾溶液，并用EtOAc(3L,3vol.)洗滌。用炭處理有機(jī)溶液，通過(guò)Celite?墊濾出，Celite?墊用乙酸乙酯(3L,3vol.)洗滌。將所得濾液濃縮至干，得到1'(688.3g,52.9%,98.07%純度)。化合物通過(guò)1HNMR(CDCl3)和MS表征。從1a制備1’的批料總結(jié)可見于表2和3中。表2.用1a和POCl3制備的1'甲醇中1'的漿料混合物使化合物1'[1.78kg(475.0g，第2批；688.0g，第3批；617.0g，第4批)]與甲醇(1.8L,1vol.)漿料在20℃共混。在過(guò)濾前，在20℃攪拌漿料30分鐘。用甲醇洗滌經(jīng)過(guò)濾固體，得到1’(1.71kg，96%收率，99.5%AUC)。表3.1'的漿料混合物結(jié)果制備B使甲苯(1.54L)和水(154mL)中粉末狀氫氧化鉀(536g,9.56mol,5.6equiv.)的懸浮體溫?zé)嶂?5℃。然后加入溴化四丁基銨(28g,0.85mol,0.05equiv.)和1,3-二溴丙烷(379g,1.88mol,1.1equiv.)，隨后經(jīng)42分鐘滴加甲苯(500mL)中A(200g,1.7mol,1.0equiv.)的溶液。在加入期間，溫度升高到95℃，然后，在完成加入A時(shí)加熱混合物到回流。在此溫度攪拌所得粉紅漿料1小時(shí)，此時(shí)，通過(guò)HPLC分析斷定反應(yīng)完成。然后使混合物冷卻到20-25℃，并通過(guò)Celite?墊過(guò)濾。用甲苯(1.0L)洗滌固體，所得濾液用水(2×300mL)、鹽水(150mL)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾并濃縮，得到粗B(263g)，為橙色油。然后通過(guò)真空蒸餾(b.p.105℃/750毫托)純化產(chǎn)物，得到B[140g,52%,97.7%(AUC)]，為無(wú)色液體。存在的主要雜質(zhì)鑒定為B2(2.3%AUC)(關(guān)于細(xì)節(jié)，見實(shí)施例9，合成B)。制備C分批向H2SO4(100mL)加入固體KNO3(17.0g,0.17mol,1.06equiv.)，保持溫度<15℃。攪拌15分鐘后，加入B(25.0g,0.16mol,1.0equiv.)，保持溫度<15℃。1小時(shí)后，對(duì)混合物取樣，并通過(guò)HPLC分析，顯示反應(yīng)完成。然后將混合物倒在冰上，并用DCM(200mL)萃取。有機(jī)層用1MNaOH、鹽水洗滌，然后經(jīng)MgSO4干燥。濃縮后，分離C[32.1g,99%,95.5%(AUC)]，為橙色/棕色固體。1HNMR(CDCl3)顯示物質(zhì)略微不如通過(guò)HPLC測(cè)定的純。制備D分批向H2SO4(1.9L)加入固體KNO3(318.1g,3.18mol,1.06equiv.)，保持溫度<15℃。攪拌15分鐘后，經(jīng)75分鐘加入化合物B(471.3g,3.0mol,1.0equiv.)，保持溫度<20℃。兩小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析混合物，顯示反應(yīng)完成(70%C,30%D)。然后在環(huán)境溫度攪拌此反應(yīng)過(guò)夜，在此點(diǎn)通過(guò)HPLC分析未剩下C。然后將混合物倒在冰(3kg)上，有DCM(3L)存在。有機(jī)層用1MNaOH(1.0L)、鹽水(500mL)洗滌，然后經(jīng)MgSO4干燥。濃縮后，加入庚烷(1.5L)和EtOAc(500mL)，在環(huán)境溫度攪拌混合物4小時(shí)。然后過(guò)濾固體并干燥，提供D[365.5g，55%，經(jīng)兩個(gè)步驟，~99%(AUC)]，為淺黃色固體。從C制備D向AcOH(520mL)中C(40g,0.19mol,1.0equiv.)的溶液緩慢加入H2SO4(280mL)，產(chǎn)生顯著放熱(25→65℃)。然后將此混合物加熱到90℃過(guò)夜，在此時(shí)通過(guò)HPLC分析斷定反應(yīng)完成。使混合物冷卻到環(huán)境溫度，倒在冰上，并用DCM萃取。有機(jī)層用飽和水性NaHCO3、水然后鹽水洗滌。在用MgSO4干燥后，使溶液部分濃縮，并加入庚烷。進(jìn)一步濃縮導(dǎo)致沉淀出D。過(guò)濾并用庚烷洗滌，提供D[30.0g,69%,99%(AUC)]，為淺棕色固體。制備E在EtOH(50mL)和6MNaOH(60.6mL,363.3mmol,8.0equiv.)中在60℃攪拌D(10.0g,45.4mmol,1.0equiv.)過(guò)夜。17小時(shí)后，HPLC分析顯示反應(yīng)完成。將混合物冷卻到環(huán)境溫度，用水(60mL)稀釋并部分濃縮，以去除EtOH。濃縮后，用DCM(2×100mL)洗滌混合物，然后用水性6MHCl酸化水層。用DCM(3×100mL)萃取酸性水層，合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并經(jīng)MgSO4干燥。濃縮后，分離E[10.2g,100%,95%(AUC)]，為棕色固體。制備H使甲苯(3.85L,7.7vol.)和水(385mL,0.77vol.)中粉末狀氫氧化鉀(801g,14.3mol,5.6equiv.)的懸浮體溫?zé)嶂?0℃。然后加入溴化四丁基銨(41.1g,2.81mol,0.05equiv.)和1,3-二溴丙烷(566g,2.81mol,1.1equiv.)。下一步，經(jīng)30分鐘緩慢加入甲苯(1.25L,2.2vol.)中G(500g,2.6mol,1.0equiv.)的溶液，同時(shí)保持溫度在50-85℃。將所得紫色漿料加熱至回流(100℃)，并在此溫度攪拌1小時(shí)，此時(shí)HPLC分析顯示G完全消失。使混合物冷卻至70℃，并加入庚烷(5.2L)。然后使所得漿料冷卻至環(huán)境溫度，并經(jīng)Celite?墊過(guò)濾。用甲苯(2.0L)洗滌固體(顯著量)，所得濾液用水(3×500mL)、鹽水(500mL)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾并濃縮。這提供粗產(chǎn)物H[519g,86%,86%(AUC)]，為紅色油。制備I向AcOH(800mL)中H(200g,0.85mol,1.0equiv.)的溶液緩慢加入H2SO4(400mL)，產(chǎn)生顯著放熱(25→40℃)。將此混合物加熱到90℃過(guò)夜，此時(shí)HPLC分析顯示反應(yīng)完成。使混合物冷卻到環(huán)境溫度，然后緩慢加入到冰水(3.0L)和二氯甲烷(2.0L)的混合物。用另外的二氯甲烷(3.0L)稀釋雙相混合物，并分離酸性水層。有機(jī)層用水(2×2.5L)、水性0.5MNaOH(2×2.0L)然后用鹽水(500mL)洗滌。有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾并濃縮，提供粗I(195g)，為棕色油。粗I通過(guò)柱層析在硅膠上用80%EtOAc/庚烷純化，得到I[159g，74%來(lái)自G，>99%(AUC)]，為白色固體。制備2向3L三頸燒瓶加入I(250g,0.98mol,1.0equiv.)和t-BuOH(1250mL,5.0vol.)。將漿料加熱到65℃并攪拌，直至所有固體已溶解(約10分鐘)。經(jīng)35分鐘分批小心加入Pb(OAc)4(40.1g,1.13mol,1.15equiv.)，同時(shí)保持溫度<75℃。在Pb(OAc)4加入完成時(shí)，在80℃攪拌漿料80分鐘，在此點(diǎn)通過(guò)HPLC分析反應(yīng)完成。然后使?jié){料冷卻到25℃，加入Na2CO3(250g,1.0equiv.)，隨后加入MTBE(1.9L)。攪拌漿料30分鐘，然后通過(guò)Celite?墊過(guò)濾去除固體。用10%水性NaHCO3(3×2.0L)、10%鹽水(500mL)洗滌濾液，經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾并濃縮，得到粗2[301g,94%,89%(AUC)]，為淡紫色固體。粗2通過(guò)在10/90MTBE/庚烷(5.0vol.)中再漿化純化，以提供2[270g,84%,94%(AUC)]，為灰白色固體。然后在1/1乙腈/水中(5.0vol.)在環(huán)境溫度使2[270g,0.83mol,94%(AUC)]再漿化22小時(shí)。過(guò)濾固體并干燥，得到化合物2[240g，89%回收率，95.2%(AUC)]，為白色固體。然后使這種物質(zhì)與2的其它批料混合，并通過(guò)硅膠塞(填充并用1/99MeOH/DCM洗脫)純化。然后濃縮富級(jí)分至干(525g的2)，并通過(guò)在環(huán)境溫度在MTBE(2.0vol.)和庚烷(6.0vol.)中漿化混合，以得到均勻批料。這提供2[513g,97.2%(AUC)]，為白色固體。制備D向裝配有測(cè)溫探頭、氮入口管、回流冷凝器和加料漏斗的20L夾套反應(yīng)器加入濃H2SO4(14L,4vol.)，使混合物冷卻到5-6℃，并分批加入KNO3(3.183kg,23.6mol)，保持溫度在10-15℃之間。在攪拌所得漿料15分鐘后，經(jīng)90分鐘時(shí)間加入B(3.5kg,22.27mol)，保持內(nèi)部溫度在10-20℃之間。然后使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度，攪拌16小時(shí)，此時(shí)通過(guò)HPLC分析斷定反應(yīng)完成。然后將反應(yīng)混合物倒入冷水(~5℃)(35L,10vol.)和DCM(35L,10vol.)的混合物，同時(shí)保持溫度<15℃。分離有機(jī)層，水層用DCM[21L(6vol.)和14L(4vol.)]萃取兩次。合并的有機(jī)層用1NNaOH(35L,10vol.)、鹽水(1.75L,0.5vol.)洗滌，并經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥。濃縮有機(jī)層，得到D，為灰白色固體(3.61kg，72.7%收率，83.1%AUC)。純化D使粗D(3.6kg)懸浮于MTBE(7L,2vol.)，并在環(huán)境溫度攪拌30分鐘。然后過(guò)濾固體，用MTBE(700mL,0.2vol.)洗滌，在真空下干燥，得到D(2.65kg，54.2%，98.3%純度)，為灰白色固體。從D制備F經(jīng)5分鐘分4批向75℃的t-BuOH(230mL,6.0vol.)中D(30g,136.2mmol,1.0equiv.)的漿料加入Pb(OAc)4(69.5g,156.7mmol,1.15equiv.)。然后加熱漿料到80℃經(jīng)歷90分鐘，此時(shí)HPLC分析顯示反應(yīng)完成(沒(méi)有剩余D)。然后使?jié){料冷卻到25℃，加入Na2CO3(30g，1.0重量當(dāng)量)，隨后加入MTBE(200mL)。攪拌漿料30分鐘，然后通過(guò)Celite?墊過(guò)濾去除固體。用水性10%NaHCO3(3×200mL)、鹽水洗滌濾液，經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾并濃縮，得到粗F[34.0g,86%,92.5%(AUC)]，為灰白色固體。1HNMR(CDCl3)與所需產(chǎn)物一致。將此物質(zhì)“原樣”用于下一步驟，無(wú)需進(jìn)一步純化。從E制備F向t-BuOH(40mL,20vol.)中E(2.0g,9.0mmol,1.0equiv.)的溶液加入Et3N(1.10g,10.9mmol,1.2equiv.)。將此溶液加熱到75℃，在此時(shí)間經(jīng)5分鐘滴加DPPA(2.71g,9.9mmol,1.09equiv.)。在81℃攪拌過(guò)夜后，通過(guò)HPLC分析反應(yīng)完成(沒(méi)有剩余E)，然后冷卻到環(huán)境溫度。反應(yīng)濃縮至干，通過(guò)1HNMR用內(nèi)標(biāo)(CDCl3中的富馬酸二甲酯)分析。根據(jù)此分析，發(fā)現(xiàn)F的總收率為78%。制備F向裝配有回流冷凝器、測(cè)溫探頭和氮入口管的20L潔凈干燥夾套反應(yīng)器加入t-BuOH(9.25L,5vol.)中的D(1.85kg,8.174mol,98.3%純度)，將所得混合物加熱到50-55℃，并攪拌45分鐘。分4等批向此混合物加入Pb(OAc)4(4.2kg,9.400mol)，并加熱所得漿料到80℃經(jīng)歷兩小時(shí)。兩小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析斷定反應(yīng)完成。使反應(yīng)混合物冷卻到~25℃，加入Na2CO3(1.85kg,17.002mol)，隨后加入MTBE(10L,5.5vol.)。攪拌混合物30分鐘，然后通過(guò)Celite?床過(guò)濾去除固體。用MTBE(5L,2.5vol.)洗滌Celite?墊。然后用10%NaHCO3水溶液(20.0L,10vol.)、鹽水(5L,2.5vol.)洗滌濾液，經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥，在減壓下濃縮，得到粗F(1.9kg,75.8%收率,96.1%AUC)，為灰白色固體。純化F使粗F(1.9kg)溶于45℃的EtOH(15.4L,8vol.)，并攪拌15分鐘。以一定速率分批緩慢加入DI水(11.2L,6vol.)，以保持45℃內(nèi)部溫度。在環(huán)境溫度攪拌所得白色懸浮體兩小時(shí)。然后過(guò)濾漿料，固體用4:3乙醇-水混合物(2vol.)洗滌，在40℃真空下干燥，得到F(1.61kg,65.6%收率,99.4%AUC)，為灰白色固體。制備2’向包含5%Pd/C(1.45g,5%重量負(fù)載量,50%濕催化劑)的玻璃壓力容器加入20/80MeOH/EtOH(290mL,10vol.)中F(29g,99.2mmol,1.0equiv.)的溶液。使此懸浮體置于H2(45psi)下，并在環(huán)境溫度攪拌16小時(shí)。16小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析反應(yīng)完成，并通過(guò)Celite?墊過(guò)濾混合物。濃縮濾液，得到粗2’(34g)，為棕色油。然后通過(guò)柱層析(1:1EtOAc/庚烷，在硅膠上)純化粗2’，提供2’[30.4g,100%,97.7%(AUC)]，為粘性黃色油。這批化合物2’中的唯一雜質(zhì)為2’的氨基甲酸異丙酯衍生物(2.3%AUC)。制備2'向裝配有測(cè)溫探頭的2-L不銹鋼高壓釜反應(yīng)器加入EtOH(5.0L,10vol.)，隨后加入F[500.0g,1.71mol,99.4%純度]和10%Pd/C(25.0g,5%重量)。在填充氫到45-50psi之前，用氮清洗反應(yīng)器，并在環(huán)境溫度攪拌。4小時(shí)后，通過(guò)HPLC斷定反應(yīng)完成。通過(guò)Celite?墊過(guò)濾反應(yīng)混合物，Celite?墊用EtOH(2L,4vol.)洗滌。在減壓下濃縮濾液，得到2'(456.5g,>100%)，為灰白色半固體。純化2'使粗2'懸浮于庚烷(1L,2vol.)，并在環(huán)境溫度攪拌兩小時(shí)。過(guò)濾漿料，固體用庚烷(250mL,0.5vol.)洗滌，然后在35-40℃真空下干燥，得到2'(405.0g,91.6%收率,99.16%AUC)，為灰白色固體。通過(guò)Pd催化交叉偶聯(lián)反應(yīng)制備3向N2正流下的1L夾套反應(yīng)器加入1(30.0g,139.4mmol,1.0equiv.)、2(47.75g,146.37mmol,1.05equiv.)、Cs2CO3(99.92g,306.7mmol,2.2equiv)，隨后加入試劑級(jí)THF(300mL,10vol.,KF=0.024%H2O)。攪拌所得懸浮體，并用N2清洗15分鐘。然后加入Pd2(dba)3(1.60g,1.74mmol,1.25%mol)和Xantphos(2.02g,3.49mmol,2.5%mol)，并在N2正壓下利用60℃內(nèi)部溫度加熱反應(yīng)。在3小時(shí)取反應(yīng)樣品，發(fā)現(xiàn)觀察到僅3%產(chǎn)物。加入額外量Pd2(dba)3(1.60g,1.74mmol,1.25%mol)和Xantphos(2.02g,3.49mmol,2.5%mol)，反應(yīng)從正N2切換到N2覆蓋。23.5小時(shí)后，通過(guò)HPLC觀察到73%產(chǎn)物。加入額外的Pd2(dba)3(1.40g,1.52mmol,1.0%mol)、Xantphos(1.80g,3.12mmol,2.0%mol)和Cs2CO3(50.0g,153.0mmol,1.1equiv.)。在30.5小時(shí)HPLC顯示96%產(chǎn)物和3.1%剩余的1。攪拌反應(yīng)另外17小時(shí)，在47小時(shí)總反應(yīng)時(shí)間后沒(méi)有剩余1。將反應(yīng)冷卻到20℃。加入500mLEtOAc，隨后加入250mLH2O。攪拌雙相混合物15分鐘后，去除有機(jī)層。用500mLEtOAc萃取水層，合并的有機(jī)層用鹽水(500mL)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并過(guò)濾。在4℃保持經(jīng)過(guò)濾溶液45小時(shí)，直至可繼續(xù)整理。向經(jīng)干燥溶液加入30.0gDARCO活性炭(100目)，并在45℃攪拌混合物1小時(shí)。通過(guò)Celite?墊過(guò)濾混合物，Celite?用2x300mLEtOAc洗滌，然后在真空中濃縮。使所得紅色泡沫溶于275mLDCM，并通過(guò)加料漏斗經(jīng)10分鐘時(shí)間加入1.0L庚烷。用3(100mg)對(duì)所得紅色溶液引晶，然后在20℃攪拌1小時(shí)。經(jīng)15分鐘時(shí)間加入庚烷(500mL)，并在20℃攪拌所得漿料18小時(shí)。檢測(cè)溶液中3的濃度為5mg/mL，然后過(guò)濾漿料。固體用200mL5%DCM/庚烷洗滌，隨后用2x400mL庚烷洗滌。在20℃在真空下干燥固體16小時(shí)，得到38.34g(60%,96.5%AUC,SLI1.1%-“M-14”)3，為細(xì)和粗的橙色結(jié)晶固體的混合物。在結(jié)晶期間，~6g固體覆在燒瓶上。根據(jù)5g試驗(yàn)，此分離不象預(yù)期那樣進(jìn)行。使燒瓶壁上的固體溶于DCM和分離的38g，使此與母液混合并濃縮，回收全部量的3。在此失敗的結(jié)晶嘗試期間，發(fā)現(xiàn)3的新多晶型體，允許從EtOAc第二次重結(jié)晶。來(lái)自交叉偶聯(lián)反應(yīng)的3的重結(jié)晶將粗固體(66.1g)轉(zhuǎn)移到500mL燒瓶，加入250mL(4vol.)EtOAc，并將混合物加熱到回流30分鐘。然后使溶液冷卻到50℃，用3引晶，并在50℃保持15分鐘。然后使?jié){料冷卻到20℃，并攪拌16小時(shí)。在16小時(shí)后檢驗(yàn)3的濃度，發(fā)現(xiàn)為15mg/mL。將漿料過(guò)濾，用濾液洗凈燒瓶，洗液加到過(guò)濾漏斗。然后，固體用50mLEtOAc、50mL50%EtOAc/己烷洗滌，最后用100mL己烷洗滌。在60℃在真空下干燥所得深紅固體3小時(shí)。這提供48.4g的3(75%,98.9%AUC,SLI1.0%-“M-14”)，為深紅色結(jié)晶固體。通過(guò)取代反應(yīng)制備3向2L三頸燒瓶加入1’(48.0g,1.0equiv.)、2’(59.0g,1.1equiv.)和Na2CO3(43.4g,2.0equiv.)。加入DMA(310mL,6.5vol.)，并加熱反應(yīng)到100℃。18.5小時(shí)后，HPLC分析顯示反應(yīng)完成。使反應(yīng)冷卻到9℃，并加入2-MeTHF(960mL,20vol.)。加入10%NaCl水溶液(720mL,15vol.)，導(dǎo)致生成一些固體。攪拌混合物1小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到分液漏斗(用100ml水向前沖洗固體)。使層分離，水層(Vaq~1200mL)用2-MeTHF(2×200mL)反萃取。合并的有機(jī)層然后用10%NaCl水溶液(2×250mL)洗滌，然后對(duì)于DMA(0.3%重量)通過(guò)1HNMR分析。在保持溶液過(guò)夜后，取出等分試樣(6mL)，并用水洗滌(3mL)，產(chǎn)生很好的相分離(需要>30分鐘)。加入水(650mL,1/2批量)，并攪拌10分鐘，然后轉(zhuǎn)移到分液漏斗，使其靜置。90分鐘后，達(dá)到部分相分離(Vaq=250mL)。加入鹽水(250mL)，產(chǎn)生相分離。分離出有機(jī)層(1300mL,27vol.,Kf=3.45%)，并加到3-LRB燒瓶。加熱燒瓶(常壓)，蒸餾出一些2-MeTHF。一旦剩余15個(gè)體積2-MeTHF(720mL)(30分鐘)，就重新分析溶液的水含量(Kf=0.24%)。然后使反應(yīng)冷卻到50-55℃，并通過(guò)濾紙精細(xì)過(guò)濾(polishedfiltered)(存在很少固體)。然后將溶液再加到3-L燒瓶(在潔凈燒瓶后)，并將溶液蒸餾到9體積(430mL)。然后將溶液加熱到70℃，并經(jīng)1小時(shí)分批加入庚烷。然后關(guān)閉加熱，使溶液緩慢冷卻到室溫(在1小時(shí)后溫度為48℃)。攪拌70小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析檢驗(yàn)?zāi)敢旱?(2.7mg/mL)，然后過(guò)濾。用25%2-MeTHF/庚烷溶液(75mL,漿料)洗滌固體，隨后用相同溶液2×240mL置換洗滌。餅用庚烷(240mL)再一次洗滌，然后在真空烘箱中在室溫干燥20小時(shí)。分離3(81.1g,86%收率,99.2%AUC)，為深紅色固體。1HNMR(CDCl3)分析顯示不存在殘余溶劑。制備4向1L玻璃反應(yīng)器加入化合物3(80.0g,1.0equiv.)和10%Pd/C(4.0g,5%重量,50%水濕)。加入THF(400mL,5vol.)，并用氬清洗反應(yīng)器。然后使反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度處于H2(30psi)下，并攪拌。2小時(shí)后，將反應(yīng)混合物加熱到30℃，并攪拌。另外4小時(shí)后，使壓力升高到40psi，并攪拌過(guò)夜。16小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析斷定反應(yīng)完成(3未檢出)。然后通過(guò)Celite?過(guò)濾反應(yīng)混合物，墊用THF(3×160mL)洗滌。然后濃縮有機(jī)溶液(VF=90mL)，并加入MeOH(400mL,5vol.)。濃縮混合物至干，得到半固體/泡沫。加入另外的MeOH(400mL,5vol.)(并非所有固體溶解)，濃縮混合物至干，得到4[77.0g,98%收率(考慮溶劑),98.9%(AUC)]，為灰色固體。1HNMR(CDCl3)顯示4.3%重量MeOH和0.1%重量THF。制備6向裝配有噴管和熱電偶的2LRB燒瓶加入化合物4(75.1g,1.0equiv.)。加入AcOH(675mL,9vol.)，隨后加入5(22.4g,1.05equiv.)和MeOH(75mL,1vol.)。然后通過(guò)噴管向反應(yīng)引入空氣。在環(huán)境溫度攪拌21小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析反應(yīng)，顯示存在1.7%的4、79.7%的6和18.6%的6’。攪拌反應(yīng)另外24小時(shí)，此時(shí)斷定反應(yīng)完成(0.3%的4,1.9%的6’)。然后濃縮反應(yīng)混合物(55℃)，直至蒸餾停止(計(jì)算殘余AcOH=86.3g)。加入2-MeTHF(960mL,12.8vol.)，隨后加入20%KOH(392g)。需要另外的210mL20%KOH達(dá)到pH>13。攪拌混合物10分鐘，然后使其沉降。去除水層(650mL)，并用5%鹽水溶液(375mL,5vol.)洗滌有機(jī)層。去除水層(390mL,pH=10)，并進(jìn)行第二次5%鹽水洗滌(375mL,5vol.)。去除水層(380mL,pH=7)。由于在兩次洗滌后達(dá)到中性pH，省略第三次鹽水洗滌。然后使2-MeTHF溶劑交換進(jìn)入IPAc(7vol.,0.5%重量2-MeTHF)，導(dǎo)致形成漿料。在攪拌65小時(shí)后，對(duì)母液取樣，顯示6的濃度為6.3mg/mL。然后過(guò)濾固體，并用IPAc(90mL,1.2vol.)、IPAc/正庚烷(1/1,180mL,2.4vol.)然后正庚烷(90mL,1.2vol.)洗滌。在濾器上干燥2小時(shí)后，將固體轉(zhuǎn)移到真空烘箱，并在40℃干燥過(guò)夜，得到6[80.9g,86%收率(考慮溶劑含量),97.3%(AUC)]，為淺黃色固體。1HNMR(CDCl3)顯示0.8%重量IPAc、0.7%重量2-MeTHF，沒(méi)有庚烷存在。主要雜質(zhì)為以2.3%存在的N-氧化物(M+16)。純化6使化合物6(74.2g)溶解(存在細(xì)末)于DCM(560mL)，并洗脫通過(guò)預(yù)填充(DCM)硅膠(330g)塞。然后用EtOAc(3.0L)洗柱。收集兩個(gè)級(jí)分(2.5L,1.0L)，并通過(guò)HPLC分析。在兩個(gè)級(jí)分中均未觀察到N-氧化物雜質(zhì)。合并級(jí)分，部分濃縮(VF=620mL,8.3vol.)，得到稠漿。加入正庚烷(620mL,8.3vol.)，并攪拌混合物15分鐘。母液樣品顯示6的濃度為2.7mg/mL。過(guò)濾固體，用庚烷(150mL,2vol.)洗滌，并在真空烘箱中在45℃干燥。15小時(shí)后，得到6[65.9g,89%回收率,~100%(AUC)]，為灰白色固體。1H-NMR只顯示有微量EtOAc，沒(méi)有正庚烷存在。制備7使化合物6(65.4g)溶于DCM(650mL,10vol.)，并經(jīng)15分鐘加入MSA(60.0g,5.0equiv.)(Tmax=29℃)。2小時(shí)后，呈現(xiàn)稠漿，對(duì)反應(yīng)取樣(母液)，通過(guò)HPLC分析顯示沒(méi)有6存在。加入水(460mL,7vol.)，并攪拌混合物40分鐘。去除水層，并加入水(200mL,3vol.)，以萃取DCM層。合并水層，然后用DCM(170mL,2.5vol.)洗滌。向水層加入DCM(650mL,10vol.)，并用6NNaOH(120mL)使混合物堿化至pH=13。在加入期間，開始從溶液沉降出固體，并粘到瓶壁。此時(shí)顯著提高加堿速率，使固體很容易溶解(Tmax=25℃)。這可能是由于，在混合物有足夠堿性使固體在DCM中變得可溶之前，7從溶液沉淀出來(lái)。由于在此時(shí)缺乏放熱，一旦固體存在就更快加堿似乎是謹(jǐn)慎的。使層分離，并用DCM(325mL,5vol.)重新萃取水層。經(jīng)Na2SO4干燥有機(jī)層(Kf=0.17%)，然后濃縮到360mL(5.5vol.)，導(dǎo)致固體沉淀。進(jìn)一步濃縮混合物(150mL,2.3vol.)，并加入IPAc(900mL,13.8vol.)。再次縮減溶劑體積(VF=245mL,4vol.)，并加入IPAc(325mL,5vol.)。分析溶劑比顯示，DCM水平低于目標(biāo)水平(1.6%重量)。加入另外的IPAc(65mL,1vol.)，并攪拌漿料過(guò)夜。母液定量顯示7濃度低于目標(biāo)水平(2.0mg/mL)。過(guò)濾固體，用IPAc(2×130mL,2×2vol.)洗滌，并在真空烘箱(>28英寸汞柱)中在45℃干燥2天。得到7(46.9g,87%收率,99.8%AUC)，為淺黃色固體。1HNMR(CDCl3)顯示IPAc(0.5%重量)和DCM(<0.1%重量)存在。實(shí)施例2.形成化合物6的初始優(yōu)化進(jìn)行的試驗(yàn)列表在表4中給出。表4.形成化合物6*的優(yōu)化項(xiàng)目溫度℃**時(shí)間(h)AcOH(equiv.)溶劑(vol.)46’6711002052(DMSO)1.67094.25210016038(DMF)25.060.6270.89310016051(MeOEtOH)17.5510.9768.3141001.55.538(DMSO)1.030.2787.40510051.3710(DMSO)10.087.5570.81610022.7410(DMSO)4.042.9483.6471001010(DMSO)92.804.142.61810012.7519(DMSO)22.5726.2749.7191001.55.519(DMSO)0.850.2177.309.41010023.85(DMSO)1.120.6080.557.481110024.2510(DMSO)0.840.9483.386.48*所有反應(yīng)均在敞口瓶中以30-70mg規(guī)模進(jìn)行。**代表性瓶溫度?？捎杀?中數(shù)據(jù)推測(cè)，DMSO是最佳溶劑(見項(xiàng)目1-3)，并且使用乙酸加速反應(yīng)(見項(xiàng)目4-11)。加入3至4當(dāng)量酸顯示最佳反應(yīng)特性。此二步策略也避免在一鍋法中觀察到的反應(yīng)的不均勻性質(zhì)。一旦環(huán)化提供6’完成，就需要在空氣存在下容易氧化產(chǎn)生6。最初用表4中確定的條件進(jìn)行兩個(gè)單獨(dú)反應(yīng)，但遺憾的是達(dá)到低于預(yù)期收率的收率，也需要柱純化(表5)。表5：用二步策略合成6溫度℃時(shí)間(h)AcOH(equiv.)DMSO(vol.)收率，%純度(%AUC)100-1104.53.556699.21100-12520.54.0104993.20實(shí)施例3：2-MeTHF和庚烷中3的溶解度分析進(jìn)行一系列試驗(yàn)檢驗(yàn)2-MeTHF和庚烷混合物中3的溶解度。表6：在25℃，2-MeTHF/庚烷中3的溶解度2-MeTHF/庚烷(v/v)1/09/18/27/36/45/54/63/72/8溶解度(mg/mL)1003223138.04.53.81.20.3實(shí)施例4：在交叉偶聯(lián)反應(yīng)中用1和2s產(chǎn)生3的篩選和優(yōu)化反應(yīng)用替代化合物(2s)代替2來(lái)篩選條件(利用Pd2(dba)3和Xantphos)和優(yōu)化交叉偶聯(lián)反應(yīng)。探索此反應(yīng)的初始試驗(yàn)總結(jié)于表7中?？梢钥吹剑?%摩爾Pd2(dba)3和Xantphos與Cs2CO3在THF中組合得到90%分離收率。90%收率初始顯示該方法是達(dá)到3的可行選項(xiàng)。表7.1和2s交叉偶聯(lián)可行性的初始結(jié)果探索交叉偶聯(lián)反應(yīng)的催化負(fù)載量?？稍诒?中看到，Pd2(dba)3的量可降低到1.25%摩爾，Xantphos的量可降低到2.5%摩爾，同時(shí)觀察不到分離收率降低。在表7中所列的幾個(gè)反應(yīng)也檢驗(yàn)與空氣容許量相關(guān)的反應(yīng)穩(wěn)健性。已發(fā)現(xiàn)，不必在加催化劑之前由氬鼓泡通過(guò)反應(yīng)混合物使THF脫氣，覆蓋氬足以防止催化劑氧化。表8.1和2s交叉偶聯(lián)反應(yīng)的優(yōu)化實(shí)施例5：用2-MeTHF作溶劑關(guān)于100g化合物2交叉偶聯(lián)反應(yīng)的試驗(yàn)用2-MeTHF作溶劑對(duì)100g化合物2進(jìn)行交叉偶聯(lián)反應(yīng)試驗(yàn)。在加入1.25%Pd2(dba)3和2.5%Xantphos后，反應(yīng)進(jìn)度緩慢。利用第二次加入Pd2(dba)3(1.25%)和Xantphos(2.5%)及Cs2CO3(1.1equiv.)推進(jìn)反應(yīng)完成(45小時(shí)總時(shí)間)。在整理期間，相分離是個(gè)問(wèn)題。細(xì)的不溶粉末在溶液中漂浮和反應(yīng)器壁被黑色殘余物包覆導(dǎo)致在萃取整理期間出現(xiàn)困難。加入鹽水或溫?zé)岱磻?yīng)混合物不改善這個(gè)問(wèn)題。過(guò)濾此批料(雙相)去除任何微粒提供滿意的相分離，進(jìn)行其余萃取整理，沒(méi)有附帶事件。用庚烷作為反溶劑，從2-MeTHF分離最終產(chǎn)物(收率：72%，純度：96.98%)。實(shí)施例6：關(guān)于氫化反應(yīng)制備化合物4的試驗(yàn)初始在40psi氫氣下，利用10%Pd/C(10%重量)，在EtOAc(15vol.)中進(jìn)行3的催化氫化。3小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析反應(yīng)完成。在通過(guò)Celite?過(guò)濾去除催化劑后，通過(guò)濃縮濾液至干，以定量收率分離化合物4，為泡沫。雖然反應(yīng)具有高收率，但由于3在EtOAc中的不良溶解性，進(jìn)行反應(yīng)所需的溶劑的量限制產(chǎn)量。因此，期望發(fā)現(xiàn)防止不良轉(zhuǎn)化風(fēng)險(xiǎn)同時(shí)提高體積效率的此反應(yīng)的替代溶劑。為了解決這一問(wèn)題，除了2-MeTHF外，還在HOAc和THF中評(píng)估3的溶解性。由于6和7游離堿對(duì)這些候選物顯示良好的溶解性，選擇這些溶劑，并用于其它過(guò)程步驟。3的溶解度為在HOAc中24.8mg/mL，在2-MeTHF中100mg/mL，在THF中155mg/mL。這些結(jié)果顯示，在小于10體積THF中進(jìn)行氫化應(yīng)是可能的。在一個(gè)實(shí)施方案中，THF用于氫化反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，2-MeTHF用于氫化反應(yīng)。在使用THF時(shí)，利用6體積溶劑觀察到3完全溶解，而2-MeTHF需要8體積。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)氫化反應(yīng)在40psi氫壓在40℃進(jìn)行時(shí)，一般使反應(yīng)在2至3小時(shí)內(nèi)完成。研究的最后變量是催化劑負(fù)載量。初始10%重量負(fù)載量減小到5%重量，反應(yīng)時(shí)間、收率或純度沒(méi)有任何減小。研究4的分離方法作為濃縮至干的替代方法。在使用THF或2-MeTHF時(shí)，部分濃縮隨后溶劑交換進(jìn)入2-PrOH(3-5vol.)并加庚烷(10-15vol.)作為反溶劑得到適當(dāng)漿料，在過(guò)濾時(shí)，提供4(95%收率)，為具有高純度(>99%AUC)的淺灰色固體。或者，由于化合物4可溶于HOAc，氫化反應(yīng)可在HOAc(10vol.)中進(jìn)行，并直接轉(zhuǎn)入環(huán)化/氧化步驟，以直接提供6。在環(huán)境溫度經(jīng)受40psi氫壓時(shí)，氫化反應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)完成。過(guò)濾催化劑提供4的潔凈溶液，它可直接用于轉(zhuǎn)化成化合物6。還探索在沒(méi)有氫氣下通過(guò)3的催化氫化合成化合物4。在醇(MeOH或EtOH)溶劑中合并化合物3、醛5(1.05equiv.)、NH4COOH(5equiv.)和10%Pd/C(50%重量)，并加熱到65℃。HPLC分析顯示轉(zhuǎn)化成化合物6，但與在40psi標(biāo)準(zhǔn)氫解條件比較，反應(yīng)時(shí)間很長(zhǎng)。在AcOH和AcOH/二氧雜環(huán)己烷中研究不用氫氣的氫化反應(yīng)，不完全轉(zhuǎn)化成6。還省略醛5以分步方式探索不用氫氣的氫化反應(yīng)。在這些條件下，在環(huán)境溫度在MeOH中不到4小時(shí)內(nèi)3很容易轉(zhuǎn)化成4。氫化反應(yīng)用10%MeOH/AcOH溶液是成功的。用AcOH作為溶劑也得到4，然而反應(yīng)停滯，這是以前證明對(duì)4轉(zhuǎn)化成6成功的溶劑。為了優(yōu)化反應(yīng)條件，已發(fā)現(xiàn)可用10%MeOH/AcOH(10vol.)與NH4COOH(5equiv.)和30%負(fù)載量催化劑進(jìn)行反應(yīng)提供4。然后濾出催化劑，并醛5直接得到6。遺憾的是，如果反應(yīng)長(zhǎng)時(shí)間(>24小時(shí))保持，則產(chǎn)生額外雜質(zhì)。由于在40psi氫下3轉(zhuǎn)化成4不是問(wèn)題，不再進(jìn)一步進(jìn)行不用氫氣優(yōu)化氫解的努力。實(shí)施例7.4轉(zhuǎn)化成6的篩選和優(yōu)化進(jìn)行一組篩選反應(yīng)，以研究4轉(zhuǎn)化成6’，然后可轉(zhuǎn)化成6。利用1.1和3.0兩種當(dāng)量的醛5，通過(guò)評(píng)價(jià)溶劑EtOH、PrOH、甲苯和DMSO開始優(yōu)化。這些反應(yīng)對(duì)100mg的4進(jìn)行。結(jié)果匯總于表9中。表9.4轉(zhuǎn)化成6’的溶劑篩選也在富馬酸存在下利用迪安-斯達(dá)克分水器在氮下在甲苯中回流化合物4和5，以去除水。反應(yīng)很遲緩，反應(yīng)純度特性沒(méi)有希望(表10)。表10.對(duì)合成化合物6’的研究時(shí)間(h)溫度℃4(%)6’(%)6(%)(Vol.)19.5回流13.5381.212.094726回流9.7275.631.594744回流7.4677.621.8047基于9中的結(jié)果發(fā)現(xiàn)難以防止6’氧化成6。可在溫和條件下直接使4轉(zhuǎn)化成6。反應(yīng)在HOAc/MeOH(9/1,47vol.)中進(jìn)行?？蓮谋?1中的數(shù)據(jù)看到，與用其它系統(tǒng)觀察到的比較，使用這種溶劑系統(tǒng)改善純度特性。表11：在AcOH/MeOH中直接從4合成6時(shí)間(h)溫度℃4(%)6’67注解1507.37%2.15%88.58%0.74%1.1equiv.52504.23%0.42%92.53%0.88%1.1equiv.515.5201.13%0.49%92.73%0.93%1.1equiv.5利用減小反應(yīng)體積和僅略微過(guò)量(1.05-1.1equiv.)化合物5研究其它優(yōu)化反應(yīng)。在升高的溫度，反應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)完成(或接近完成)(表12-14)。然而產(chǎn)生新的雜質(zhì)，雜質(zhì)7，且在更濃縮的反應(yīng)中更顯著。在環(huán)境溫度反應(yīng)慢，但帶來(lái)更有利的純度特性，避免雜質(zhì)7生成。雜質(zhì)7對(duì)于所有收集的數(shù)據(jù)，在環(huán)境溫度關(guān)于進(jìn)一步研究選擇的溶劑體積為10體積AcOH/MeOH(9:1)。對(duì)空氣氣氛開放在環(huán)境溫度下在AcOH/MeOH(10vol.)中攪拌化合物4(1.0equiv.)和化合物5(1.05equiv.)過(guò)夜提供接近完全的向化合物6的轉(zhuǎn)化。表12：在AcOH/MeOH(9:1,20體積)中4轉(zhuǎn)化成6總時(shí)間(h)溫度℃4(%)6’(%)6(%)7(%)1502.3630.5263.810.814502.470.3993.080.8320環(huán)境溫度0.340.4092.820.74表13：在AcOH/MeOH(9:1,10體積)中4轉(zhuǎn)化成6總時(shí)間(h)溫度℃4(%)6’(%)6(%)7(%)1501.7139.7555.241.344500.920.3292.382.9320環(huán)境溫度0.350.1593.141.76表14：在AcOH/MeOH(9:1,5體積)中4轉(zhuǎn)化成6總時(shí)間(h)溫度℃4(%)6’(%)6(%)7(%)1500.9838.6757.241.924500.340.7491.034.4720環(huán)境溫度0.400.1888.734.91更具體地講，在環(huán)境溫度攪拌反應(yīng)直至4被消耗時(shí)，提高反應(yīng)溫度到50℃經(jīng)另外2小時(shí)促進(jìn)任何剩余的6’轉(zhuǎn)化成6(表15)?；蛘?，在環(huán)境溫度攪拌反應(yīng)較長(zhǎng)時(shí)間(24小時(shí))最終導(dǎo)致完全轉(zhuǎn)化成6。因此，這些數(shù)據(jù)顯示，如果施加熱量驅(qū)使反應(yīng)完成至6，一旦4反應(yīng)成6’完成，反應(yīng)混合物總純度不受熱量影響。表15：在反應(yīng)后期階段反應(yīng)溫度(50℃)的影響總時(shí)間(h)溫度℃4(%)6’(%)6(%)7(%)*Vol.*1環(huán)境溫度2.6883.2410.090.15104環(huán)境溫度1.8166.2830.780.431021環(huán)境溫度0.293.7892.861.291023500.270.0995.531.0810*用HOAc/MeOH(9:1)作為溶劑混合物。探索進(jìn)一步研究以評(píng)價(jià)增加5加料(1.2equiv.vs.1.05)的影響。顯示增加5的當(dāng)量對(duì)反應(yīng)有不利影響。沒(méi)有觀察到反應(yīng)速率提高和顯著量雜質(zhì)7生成。完成進(jìn)一步研究以評(píng)價(jià)改變HOAc/MeOH溶劑比的影響和溫度(50℃vs.20℃)對(duì)反應(yīng)的影響?？稍诒?6中看到，不考慮溶劑比，在6小時(shí)在兩個(gè)溫度4到6’或6的消耗速率是相似的，但與乙酸的量比較，從6’到6的氧化速率更取決于溫度。當(dāng)反應(yīng)在20℃進(jìn)行時(shí)，雜質(zhì)特性更有利，通過(guò)HPLC分析(AUC)具有<1%未知雜質(zhì)。表16.4轉(zhuǎn)化成6的MeOH/HOAc條件優(yōu)化然后，此步驟進(jìn)展的焦點(diǎn)轉(zhuǎn)移到整理。利用1.05當(dāng)量醛5，在5.0g規(guī)模(4)在50℃用1:9MeOH/HOAc(10vol.)進(jìn)行試驗(yàn)反應(yīng)。反應(yīng)終點(diǎn)提供粗反應(yīng)混合物，通過(guò)HPLC分析具有1.0%的4、93%的6、0.2%的6’和0.9%的7。濃縮去除大部分乙酸后，使殘余物溶于EtOAc，并用堿性水溶液洗滌去除殘余HOAc。然后使EtOAc溶液濃縮到5體積，并出現(xiàn)結(jié)晶。在環(huán)境溫度攪拌漿料4小時(shí)后，通過(guò)過(guò)濾分離固體，并在真空下干燥。這種方法以67%收率(98.4%AUC)提供6，為灰白色固體。雖然此初始試驗(yàn)很有希望，但在隨后較大規(guī)模試驗(yàn)中遇到復(fù)雜情況。一個(gè)問(wèn)題是在中和乙酸期間，經(jīng)常得到乳液。研究多種溶劑系統(tǒng)，并評(píng)價(jià)6的溶解度，以估計(jì)萃取效率(表17)。表17.6的溶解度溶劑EtOAcIPAcDCM甲苯MTBETHF2-MeTHF溶解度(mg/mL)6.62.91264.50.6911025在向反應(yīng)混合物加入IPAc和水時(shí)，觀察到適合的相分離。然而，一旦IPAc層分離并用堿處理中和殘余乙酸，就形成乳液。由于在EtOAc和IPAc中6的低溶解度，在整理完成之前也有6從溶液結(jié)晶出來(lái)的問(wèn)題。也探索DCM/水系統(tǒng)，雖然沒(méi)有6過(guò)早結(jié)晶的問(wèn)題，但乳化問(wèn)題仍在中和HOAc期間持續(xù)。試圖中和反應(yīng)至pH~5-6，以避免堿性水層。這種方法確實(shí)避免乳化，但在中和AcOH方面不完全足夠。加額外水洗也導(dǎo)致乳化問(wèn)題。假定用于猝滅AcOH的堿也可由于在水中生成鹽的溶解性產(chǎn)生差異。在初始試驗(yàn)中使用水性NaOH。在用DCM作為有機(jī)溶劑時(shí)，使用KOH沒(méi)有任何實(shí)質(zhì)影響。研究的第三種溶劑系統(tǒng)是2-MeTHF/水。最初，雖然比使用DCM(10vol.)時(shí)需要更多有機(jī)溶劑(15vol.)，但實(shí)現(xiàn)了有利的相分離。在堿化時(shí)，該系統(tǒng)有相同乳化問(wèn)題。也用該系統(tǒng)篩選不同的堿，包括KOH和NH4OH。在使用NH4OH時(shí)，出現(xiàn)顯著量排氣。在使用KOH時(shí)，乳液形成改善。因此，在整理中選擇KOH作為堿。在2-MeTHF中過(guò)早結(jié)晶問(wèn)題也是風(fēng)險(xiǎn)。然而，經(jīng)確定，這僅當(dāng)混合物在整理期間冷卻時(shí)有風(fēng)險(xiǎn)。如果在猝滅(~40-50℃)期間溫?zé)峄旌衔铮瑒t所有固體都保留在溶液中。一旦中和HOAc完成，從2-MeTHF簡(jiǎn)單溶劑交換進(jìn)入IPAc就以良好收率和純度[>80%,~99%(AUC)]提供6。為了減小需要中和的AcOH的量，在水性整理之前評(píng)估部分AcOH的蒸餾。穩(wěn)定性研究顯示，反應(yīng)混合物對(duì)濃縮(15vol.至4vol.)和延長(zhǎng)保持時(shí)間(>1天)穩(wěn)定。根據(jù)這一信息進(jìn)行一系列試驗(yàn)，其中AcOH在中和前部分去除(至4vol.)。試驗(yàn)總結(jié)可見于以下表18中。經(jīng)確定，蒸餾AcOH顯著減小整理體積，并且在未來(lái)試驗(yàn)中實(shí)施。表18.分離6的溶劑和堿優(yōu)化試驗(yàn)萃取溶劑(vol.)AcOH含量(vol.)所用堿第1次洗滌(pH)第2次洗滌(pH)第3次洗滌收率(AUC)1MeTHF(10)4NaOH614N/A85%(97.5%)2DCM(10)4NaOH614N/AN/A3DCM(10)4NaOH10水N/A75%(97.5%)4DCM(10)4KOH12N/AN/AN/A5MeTHF(15)9KOH5713.585%(98.8%)6MeTHF(15)9NH4OH5111185%(99.0%)7DCM(10)9KOH55N/AN/A8MeTHF(15)9KOH571482%(98.9%)9MeTHF(15)4KOH8.6水水84%(99.1%)雖然已建立6的分離方法，但在用此方法合成和分離的6的一些批料中，偶爾由LCMS分析檢測(cè)具有M+16質(zhì)量的雜質(zhì)(<4%AUC)。還不了解為何和在何處生成這種雜質(zhì)。一旦生成這種雜質(zhì)，就難以由重結(jié)晶凈化。將雜質(zhì)帶入去保護(hù)步驟和在分離7期間清除雜質(zhì)也不成功。已發(fā)現(xiàn)，利用EtOAc洗脫6的硅膠過(guò)濾成功去除雜質(zhì)。實(shí)施例8.合成7的優(yōu)化初始嘗試從6合成7包括向6的DCM溶液(10vol.)加入TFA(10equiv.)。在環(huán)境溫度在15小時(shí)后總轉(zhuǎn)化率是完全的。提高溫度到40℃使轉(zhuǎn)化時(shí)間減少到4小時(shí)。評(píng)估的其它溶劑是DCE、苯甲醚和IPA。在后兩種情況下，從溶液沉淀出化合物6和7的混合物(推測(cè)為TFA鹽)。在80℃1小時(shí)后，DCE提供完全轉(zhuǎn)化。雖然轉(zhuǎn)化成7相對(duì)容易，但整理是個(gè)問(wèn)題，導(dǎo)致用多個(gè)條件粘性固體沉淀出溶液。一旦反應(yīng)猝滅條件建立，就進(jìn)行數(shù)個(gè)試驗(yàn)分離7。用水性HCl萃取導(dǎo)致水層中固體沉淀。用不同酸研究其它試驗(yàn)避免沉淀，包括檸檬酸和甲磺酸(MSA)。已發(fā)現(xiàn)MSA不導(dǎo)致整理期間固體沉淀。這允許用DCM洗滌水層去除雜質(zhì)，包括殘余物6。通過(guò)加入DCM，隨后用水性NaOH堿化，以使7游離堿萃取進(jìn)入DCM層，完成7從MSA水層分離。這一方法不在萃取過(guò)程期間沉淀固體，使前面遇到的問(wèn)題最大限度地減小。通過(guò)濃縮該體積DCM誘導(dǎo)結(jié)晶，隨后加入庚烷作為反溶劑，促進(jìn)從DCM溶液分離。隨后試驗(yàn)顯示，通過(guò)從DCM溶劑交換進(jìn)入2-PrOH提供很好過(guò)濾的漿料。由于在多種一般溶劑中7的不良溶解性，可用于有效萃取7的可能候選溶劑限于DCM(表19)。表19.在選擇溶劑中7的溶解度溶劑EtOAcIPAcDCM甲苯MTBETHF2-MeTHF溶解度(mg/mL)5.62.9739.30.76244.8基于整理和分離7期間使用MSA的成功，嘗試用MSA(5equiv.)代替TFA進(jìn)行6的去保護(hù)。在環(huán)境溫度MSA介導(dǎo)反應(yīng)比TFA更容易(1小時(shí))。如上所述通過(guò)DCM萃取過(guò)程利用整理。實(shí)施例9：對(duì)合成化合物1、1’、2和2’的研究9a).對(duì)合成化合物1和1’的研究方法之一(方案6)依賴市售6-氯-2-氨基-3-硝基吡啶和苯基硼酸之間的Suzuki反應(yīng)提供1。幸運(yùn)的是，1不僅是合成3的所需原料，而且是合成1’的中間體。方案6Suzuki反應(yīng)包含放大反應(yīng)和使通過(guò)量達(dá)到最大限度的兩個(gè)主要問(wèn)題。這種程序需要大體積溶劑(85vol.)，還利用約2%molPd(PPh3)4催化劑。為了減少溶劑量和降低Pd(PPh3)4的催化負(fù)載量，進(jìn)行簡(jiǎn)短優(yōu)化系列。已發(fā)現(xiàn)，溶劑量可降低到36總體積，Pd(PPh3)4的催化負(fù)載量可降低到1%mol，沒(méi)有1的收率或純度降低。結(jié)果列于表20中，優(yōu)化條件的代表性步驟可見于實(shí)施例部分。表20：合成1的反應(yīng)體積和催化負(fù)載量研究可通過(guò)Sandmeyer反應(yīng)(方案6的步驟2)的程序合成化合物1’。雖然可合成1’，但反應(yīng)具有低收率(30-40%分離收率)。兩種主要副產(chǎn)物鑒定為1的脫鹵和水解。進(jìn)行供選條件的簡(jiǎn)單篩選，結(jié)果匯總于表21中。如表21中所示，無(wú)水乙腈(MeCN)不影響分離收率，也不影響用替代性氯化物源(TMSCl)、新的CuCl或二氧雜環(huán)己烷代替MeCN。表21.試驗(yàn)和改善1轉(zhuǎn)化成1'(Sandmeyer化學(xué)反應(yīng))所用的條件提高Sandmeyer反應(yīng)收率遇到的困難引起探索得到1’的替代條件。已觀察到，Sandmeyer反應(yīng)中的主要雜質(zhì)之一是羥基衍生物1a。在用POCl3處理1a時(shí)，以良好收率得到1’(80%)。最初研發(fā)一種方法，在進(jìn)行POCl3反應(yīng)之前使1轉(zhuǎn)化成1a，以得到1’(方案7)。通過(guò)在水性THF中進(jìn)行Sandmeyer反應(yīng)，以適中收率和純度(表22)得到1a。最初單純進(jìn)行POCl3反應(yīng)(5vol.)，但發(fā)現(xiàn)用乙腈作溶劑也很好地起作用，并且POCl3的加料可減少到1體積(表23)。方案7表22.利用Sandmeyer化學(xué)反應(yīng)用1在水性THF中制備1a表23.純POCl3vs.MeCN/POCl3用于1a轉(zhuǎn)化成1'的比較用POCl3使1a轉(zhuǎn)化成1’的能力不僅提高1’的分離收率，而且1b可以購(gòu)得，從而可能允許無(wú)需重氮鎓化學(xué)反應(yīng)制備1a。用苯基硼酸和1b利用Suzuki反應(yīng)在一個(gè)步驟提供1a(方案8)。最初嘗試熟悉Suzuki反應(yīng)用6-氯-3-硝基吡啶-2(1H)-酮與苯基硼酸和Pd(PPh3)4制備1a在表24中給出?？偟膩?lái)說(shuō)，Suzuki反應(yīng)是成功的，但在所有情況下觀察到無(wú)法識(shí)別的雜質(zhì)。清除這種雜質(zhì)是個(gè)挑戰(zhàn)，但以后發(fā)現(xiàn)，可在POCl3反應(yīng)后在1’分離期間清除雜質(zhì)。方案8表24.1b和苯基硼酸的Suzuki反應(yīng)的優(yōu)化和實(shí)施9b).研發(fā)化合物2和2’方案9和10說(shuō)明產(chǎn)生化合物2和2’的合成步驟方案9方案109bi).合成B如下評(píng)價(jià)合成B。將粉末狀KOH(5.6equiv.)、水(0.77vol.)、甲苯(7.7vol.)和催化量溴化四丁基銨(0.05equiv.)的混合物加熱到45℃。然后一次加入1,3-二溴丙烷(1.10equiv)，隨后緩慢加入甲苯(5.0vol.)中苯乙腈A(1.0equiv.)的溶液。經(jīng)45分鐘加入此溶液，同時(shí)保持反應(yīng)溫度在55-85℃。在加入化合物A期間，沉淀出顯著量白色固體。然后將混合物加熱到回流(98-102℃)經(jīng)歷1小時(shí)，并通過(guò)HPLC分析。1小時(shí)后已消耗化合物A，斷定反應(yīng)完成。在此階段使反應(yīng)混合物冷卻到70℃，然后用正庚烷(10.4vol.)稀釋，以沉淀另外的無(wú)機(jī)鹽。在冷卻混合物到20-30℃后，通過(guò)過(guò)濾去除固體，并用水和鹽水洗滌濾液。在經(jīng)MgSO4干燥后，濃縮濾液，以提供粗B，為黃色油(一般>90%粗物料回收率)。然后通過(guò)真空蒸餾(750毫托,bp=105-110℃)純化這種粗油，以提供B(一般50-60%收率)。蒸餾的B一般包含2-4%水平的單一雜質(zhì)B2(HPLC,AUC)。在50g至500g規(guī)模制備四批化合物B，沒(méi)遇到任何放大困難。雜質(zhì)B2作為C的供選路線，用4-硝基苯基乙腈研究以上方法。在多個(gè)試驗(yàn)中，在向甲苯和水中的KOH加入4-硝基苯基乙腈后，反應(yīng)混合物變成黑色焦油。9bii).合成C和D通過(guò)向H2SO4中KNO3的混合物緩慢加入B的溶液，同時(shí)保持溫度低于15℃，使B轉(zhuǎn)化成C。在小規(guī)模(25g)，反應(yīng)在不到1小時(shí)內(nèi)完成，并通過(guò)將溶液倒在冰上猝滅反應(yīng)。在萃取整理后，這種方法提供C[99%收率,95%(AUC)]，為自由流動(dòng)的棕褐色固體。然而，在放大(500g)后難以使反應(yīng)停止在C。相反，C進(jìn)一步意外地水解成D。兩小時(shí)后，在反應(yīng)混合物中沒(méi)有剩余可檢測(cè)的B，然而觀察到70%C和30%D，HPLC(AUC)。在攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜后，C轉(zhuǎn)化成D完成。將混合物倒在冰上，并用DCM萃取。濃縮DCM溶液后，使殘余物溶于熱EtOAc(500mL)和庚烷(1.5L)，并緩慢冷卻到環(huán)境溫度，以誘導(dǎo)結(jié)晶。這提供純D[55%收率，從B經(jīng)兩個(gè)步驟，99%(HPLC,AUC)]，為淺黃色固體。由于母液分析顯示仍存在合理純的D(92%AUC)，可利用進(jìn)一步優(yōu)化提高從此結(jié)晶的收率。然而，從此母液分離第二次收獲的粗略嘗試不成功，導(dǎo)致出油，沒(méi)有結(jié)晶。9biii).從C合成D由于B可容易地在一鍋法中轉(zhuǎn)化成D，只短暫地檢驗(yàn)C到D的轉(zhuǎn)化。H轉(zhuǎn)化成I有兩種可能的路線。一種方法使用30%水性H2O2和DMSO中的K2CO3。為了避免在較大規(guī)模下過(guò)氧化物問(wèn)題的可能性，不試驗(yàn)這些條件。而是尋求使用H2SO4中的HOAc(或TFA)的條件。由于發(fā)現(xiàn)這些條件對(duì)H進(jìn)行很好，在應(yīng)用于C轉(zhuǎn)化成D時(shí)，預(yù)期類似的成功似乎是合理的。在HOAc(13.0vol.)和H2SO4(7.0vol.)存在下加熱C到90℃經(jīng)歷19小時(shí)后，通過(guò)HPLC確定轉(zhuǎn)化成D完成。然后將混合物倒在冰上，并在萃取整理后，通過(guò)從DCM和庚烷沉淀純化D。這提供D[69%收率，通過(guò)HPLC99%(AUC)]，為棕褐色固體。還探索TFA條件。雖然反應(yīng)可在室溫而不是90℃進(jìn)行，但反應(yīng)未在19小時(shí)內(nèi)進(jìn)行完全。整理后，分離收率良好(82%)，但總純度較低(通過(guò)HPLC92%AUC)。9biv).合成E研究合成E產(chǎn)生D的羧酸衍生物。推測(cè)在叔丁醇中使用E和DPPA的Curtius重排條件可能是用Pb(OAc)4合成F的適合替代。已發(fā)現(xiàn)，在EtOH和6MNaOH存在下在60℃D可容易地轉(zhuǎn)化成E。在水性整理后，定量分離E，為棕褐色固體(99%AUC)?？芍苯邮褂么宋镔|(zhì)，無(wú)需進(jìn)一步純化。9bv).通過(guò)Pb(OAc)合成F通過(guò)使程序適于從I制備2，完成F的合成。制備2的方法包括向75℃叔丁醇(5.0vol.)中I的溶液分批加入Pb(OAc)4。然而，D在75℃叔丁醇(5.0-6.0vol.)中不如I在叔丁醇中易溶。在小規(guī)模(30g)進(jìn)行D至F的轉(zhuǎn)化時(shí)，加入Pb(OAc)4無(wú)重要事件，且在75℃1小時(shí)后斷定反應(yīng)完成(D的較低溶解度不改變反應(yīng)結(jié)果)。在整理和分離后，以85%收率得到F，然而純度不良(92.5%)，有兩種顯著的雜質(zhì)。一種雜質(zhì)鑒定為氨基甲酸異丙酯衍生物F2(5%)，假定為叔丁醇中微量異丙醇的結(jié)果。另一種雜質(zhì)(2.5%)不確定。然后，使這種物質(zhì)直接轉(zhuǎn)化成2’，所得產(chǎn)物通過(guò)硅膠層析純化，以清除F中存在的兩種雜質(zhì)。氨基甲酸異丙酯雜質(zhì)化合物F2然后，將D到F的轉(zhuǎn)化放大到200g，未遇到復(fù)雜情況。通過(guò)在MTBE(1.5vol.)和庚烷(3.0vol.)中再漿化純化后，200g反應(yīng)提供化合物F[178g,67%,92.0%(AUC)]，為白色固體。單一最大的雜質(zhì)是氨基甲酸異丙酯衍生物F2[6.5%(AUC)]。然后濃縮濾液至干，提供另外的F，為棕色固體[48g,18%,72%(AUC)]。為了使雜質(zhì)F2生成最大限度地減少，用HPLC級(jí)叔丁醇(99.8%純度)代替試劑級(jí)叔丁醇。使D(50g)轉(zhuǎn)化成F[38g,57%,96%(AUC)]，發(fā)現(xiàn)只包含3.1%雜質(zhì)F2。然后，為了抑制雜質(zhì)生成，在較低溫度(45℃vs.75℃)評(píng)價(jià)另一種反應(yīng)，然而，在45℃未觀察到D轉(zhuǎn)化成F。平行嘗試研發(fā)一種去除氨基甲酸異丙酯雜質(zhì)F2的方法。從MeOH或EtOH和水重結(jié)晶提供適中純度級(jí)(雜質(zhì)從2%降到1%)。也嘗試使物質(zhì)經(jīng)過(guò)第二次重結(jié)晶，但這種策略不去除殘余F2(剩余~0.6%)。然后，通過(guò)利用Boc-和氨基甲酸異丙酯基之間的反應(yīng)性差異，確定去除這種棘手雜質(zhì)的短期解決方法。在用HCl處理時(shí)，F(xiàn)的Boc基容易斷裂，并生成水溶性HCl鹽。氨基甲酸異丙酯衍生物F2不與HCl反應(yīng)，因此，然后可在水性整理期間洗掉，并且可通過(guò)在pH=11萃取整理回收化合物F游離堿。在5g規(guī)模，以定量收率分離化合物F游離堿，不含化合物F2雜質(zhì)。然后用標(biāo)準(zhǔn)條件(DCM、Boc2O和Et3N)檢驗(yàn)F游離堿的再保護(hù)，發(fā)現(xiàn)很成問(wèn)題。在反應(yīng)過(guò)程期間，隨所需F(80%)生成可觀量(20%,圖3)的不需要的對(duì)稱脲衍生物。然后，通過(guò)向DCM中過(guò)量Boc2O和Et3N緩慢加入化合物F游離堿進(jìn)行另一個(gè)反應(yīng)，然而，這意外地產(chǎn)生甚至更多對(duì)稱脲副產(chǎn)物(45%)。最終確定完全抑制對(duì)稱脲生成的條件。在雙相條件下，水性1MNaOH、THF和Boc2O(1.5equiv.)以良好收率和高純度[81%,>99%(AUC)]得到所需產(chǎn)物F。化合物F游離堿、F-OMe和對(duì)稱脲9bvi).通過(guò)NaOH/溴合成F也用Hofmann重排條件探索F的合成。使D溶于MeOH，用MeOH(4.3equiv.)中的25%重量NaOMe處理，然后冷卻到5℃。向反應(yīng)混合物滴加Br2(1.0equiv)引起溫和放熱。然后使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度，并攪拌1小時(shí)。在該時(shí)間后，通過(guò)HPLC分析反應(yīng)完成，然后通過(guò)緩慢加入飽和NH4Cl水溶液(40vol.)猝滅反應(yīng)。在猝滅反應(yīng)期間，產(chǎn)物(F-OMe)從反應(yīng)混合物重結(jié)晶，為大的片狀白色固體。分離這些固體并干燥，提供氨基甲酸甲酯衍生物化合物F-OMe[81%,>99%(AUC)]，為白色固體。還探索第二組條件，其中通過(guò)在水和乙腈(產(chǎn)生化合物F游離堿)或在MeOH(產(chǎn)生化合物F-OMe)中Oxone?對(duì)碘苯的作用原位產(chǎn)生碘氧基苯。雖然稍微有效，但這兩種反應(yīng)均需要過(guò)長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間(>41小時(shí))才達(dá)到適度轉(zhuǎn)化。在水和乙腈中，在41小時(shí)后有31%轉(zhuǎn)化(HPLC)成化合物F游離堿。在MeOH中，在46小時(shí)后有73%轉(zhuǎn)化(HPLC)成化合物F-OMe。認(rèn)為這兩種反應(yīng)太慢，以致于不能用于此點(diǎn)，且利用此試劑系統(tǒng)不能進(jìn)行進(jìn)一步工作。雖然有制備化合物F-OMe的極佳路線，但F-OMe轉(zhuǎn)化回到化合物F的方法以前未建立。探索多個(gè)條件(表25)，然而，只有一組條件(HOAc中的HBr)有效。在HOAc中使用HBr的主要缺陷是在去保護(hù)期間生成多種副產(chǎn)物。在這些試驗(yàn)后，由于更有希望的線索，放棄氨基甲酸甲酯路線。表25.F-氨基甲酸甲酯(F-OMe)的去保護(hù)試驗(yàn)溶劑添加劑溫度時(shí)間F-OMe(AUC)F(AUC)AHOAc33%HBr環(huán)境溫度28h6.7%53.7%BMeOH1MNaOH環(huán)境溫度22h94.0%0%C乙二醇6MNaOH55℃19h91.3%3.6%DMeOH6MNaOH55℃19h77.8%4.8%EMeOH6MHCl環(huán)境溫度19h97.6%0.3%FMeOH6MHCl55℃19h96.8%0.3%9bvii).通過(guò)DPPA合成F評(píng)價(jià)在叔丁醇中從E和疊氮磷酸二苯酯(DPPA)合成F。使用DPPA潛在避免與使用Pb(OAc)4相關(guān)的兩個(gè)主要缺陷。首先是Pb(OAc)4難以處理和分批加到反應(yīng)。在暴露于空氣和/或水分時(shí)，這種粘性固體逐漸潮解和變黑。避免Pb(OAc)4的第二個(gè)原因是產(chǎn)生大量隨后需要處理的PbCO3廢物。由于為容易處理的液體，并且產(chǎn)生磷酸二苯酯作為副產(chǎn)物，使用DPPA排除這兩個(gè)問(wèn)題。通過(guò)向75℃叔丁醇(20.0vol.)中E(1.0equiv.)和Et3N(1.1equiv.)的溶液緩慢加入DPPA(1.1equiv.)，進(jìn)行E到F轉(zhuǎn)化的初始嘗試。在75℃16小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析反應(yīng)完成。然而，在嘗試通過(guò)柱層析(5-20%EtOAc,在庚烷中,在硅膠上)純化F期間，只分離較少量F[26%收率,99%(AUC)]。低收率歸因于柱層析期間F的可能結(jié)晶。這一解釋似乎有道理，因?yàn)橐院蟠_定F在EtOAc和正庚烷中具有低溶解度。因此，重復(fù)反應(yīng)，在反應(yīng)完成時(shí)，用水性1MNaOH猝滅混合物，并在環(huán)境溫度攪拌3小時(shí)。在整理后，通過(guò)從EtOH(8.0vol.)和水(6.0vol.)結(jié)晶分離產(chǎn)物。這種方法提供F[55%收率，88.3%(AUC)]，為只包含單一雜質(zhì)[氨基甲酸異丙酯衍生物F2,11.7%(AUC)]的棕褐色固體。有意義的是，DPPA副產(chǎn)物通過(guò)結(jié)晶完全去除。然后進(jìn)行最后試驗(yàn)，以定量測(cè)定粗反應(yīng)混合物中存在的F的量。在水性整理后，定量NMR(CDCl3，使用富馬酸二甲酯)顯示粗混合物中存在的78%F的效力。也存在氨基甲酸異丙酯雜質(zhì)F2[6.8%(AUC)]。雖然此反應(yīng)進(jìn)行很好，但不可避免生成棘手的氨基甲酸異丙酯副產(chǎn)物F2。然后用不同親核體進(jìn)行幾個(gè)另外試驗(yàn)，以捕集DPPA產(chǎn)生的中間體異氰酸酯。這些試驗(yàn)的主要目的是通過(guò)避免使用市售叔丁醇防止生成氨基甲酸異丙酯雜質(zhì)F2。在Et3N(1.1equiv.)存在下，通過(guò)使E(5g,1.0equiv.)經(jīng)過(guò)甲苯或THF(20vol.)中的DPPA(1.1equiv.)，進(jìn)行各反應(yīng)(表26)。表26.通過(guò)DPPA制備F的異氰酸酯猝滅反應(yīng)試驗(yàn)項(xiàng)目溶劑親核體猝滅效力(NMR)1甲苯20%重量KOtBu，在THF中0.1MNaOH33%2THF20%重量KOtBu，在THF中0.1MNaOH35%3甲苯1.0MNaOTMS，在THF中檸檬酸39%4甲苯6MHCl6MHCl*70%*在HCl猝滅后，加熱反應(yīng)到75℃經(jīng)歷14小時(shí)。根據(jù)水性6MHCl猝滅試驗(yàn)(表26)的成功，在較大規(guī)模重復(fù)此反應(yīng)。利用Et3N用甲苯中的DPPA使E(11.9g)轉(zhuǎn)化成異氰酸酯，并用水性6MHCl猝滅反應(yīng)。然而，這一次，通過(guò)HPLC分析定期監(jiān)測(cè)異氰酸酯中間體轉(zhuǎn)化成F-HCl鹽，而不在升高溫度攪拌過(guò)夜。在水性6MHCl存在下在75℃加熱2.5小時(shí)后，HPLC分析顯示沒(méi)有剩余異氰酸酯中間體，斷定反應(yīng)完成。然后，在水性整理期間出現(xiàn)問(wèn)題，并形成嚴(yán)重乳化。在回顧中，乳化可能是由于不在75℃攪拌6MHCl猝滅反應(yīng)混合物過(guò)夜(這是在小規(guī)模試驗(yàn)中進(jìn)行的)。通過(guò)只攪拌2.5小時(shí)，可能DPPA副產(chǎn)物(磷酸二苯酯)不會(huì)完全水解到在75℃加熱過(guò)夜反應(yīng)的程度。通過(guò)HPLC分析監(jiān)測(cè)異氰酸酯中間體消耗的決定可能已導(dǎo)致DPPA副產(chǎn)物非有意的部分水解。將來(lái)也應(yīng)監(jiān)測(cè)反應(yīng)的DPPA副產(chǎn)物消耗。然后，乳化問(wèn)題導(dǎo)致低于正常純度F游離堿被帶到F。因此，這導(dǎo)致從此路線的分離F的低收率和純度[80%,79%(AUC)]。為了應(yīng)對(duì)這些假設(shè)，此方法值得重新研究。9bviii)合成2’最初，在45psi氫氣下，通過(guò)使MeOH(10vol.)中的F(5g)經(jīng)受5%鈀/碳(50%水濕催化劑)進(jìn)行F至2’的轉(zhuǎn)化。在攪拌17小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析反應(yīng)完成，并通過(guò)Celite?墊過(guò)濾混合物。然后濃縮濾液，以大約定量收率(4.6g)提供2’，為黃色油。然后使反應(yīng)放大到29gF。由于在較大規(guī)模的可燃性問(wèn)題，嘗試在EtOH中而不是在MeOH中進(jìn)行反應(yīng)，然而在EtOH中F的溶解性差。作為折衷，研究EtOH(10vol.)中20%MeOH的混合溶劑系統(tǒng)。在攪拌16小時(shí)后，反應(yīng)完全。將濾液濃縮成黃色油(34g)，然后與5g試驗(yàn)混合，用于層析純化(40/60EtOAc/庚烷,硅膠)。得到2’[30.4g,99%收率,97.7%(AUC)]，為黃色油。用MeOH(10vol.)進(jìn)行最后170g規(guī)模反應(yīng)，類似于前面兩個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行反應(yīng)。在通過(guò)Celite?過(guò)濾后，將濾液濃縮成黃色油，黃色油在環(huán)境溫度放置過(guò)夜后固化。這提供2’[154g,100%,98.3%(AUC)]，它只包含單一雜質(zhì)[2’的氨基甲酸異丙酯衍生物(1.7%)]。9bix).合成H這種程序包括在50-85℃向KOH(5.6equiv.)、水(0.77vol.)、甲苯(7.2vol.)、1,3-二溴丙烷(1.1equiv.)和溴化四丁基銨(0.1equiv.)的雙相混合物緩慢加入甲苯(3vol.)中G(1equiv.)的溶液。在加料期間，反應(yīng)混合物變得很稠，并存在顯著量白色固體(可能為KBr)。在反應(yīng)完成后，使混合物冷卻到室溫，并用庚烷(10.4vol.)稀釋，以沉淀另外的固體。然后過(guò)濾該批料，用水(3vol.,兩次)洗滌濾液，經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾并濃縮。這提供粗H[>90%收率,82-91%(AUC)典型純度]，為紫色油。然后在下一步常規(guī)使用該物質(zhì)，無(wú)需進(jìn)一步純化。存在的主要雜質(zhì)可能是低聚副產(chǎn)物，和來(lái)自經(jīng)歷HBr(H2)消除的未環(huán)化中間體的相應(yīng)烯烴。雜質(zhì)H2引入的第一個(gè)改進(jìn)是用50%水性NaOH代替粉末狀KOH。這避免KOH的放熱溶解，且在較大規(guī)模操作更簡(jiǎn)單。遺憾的是，50%NaOH并不有效，且隨著大量新雜質(zhì)生成只16%轉(zhuǎn)化成H。研究的第二個(gè)改進(jìn)是提高反應(yīng)的稀釋度，以使稠漿變稀。在甲苯和水的體積加倍時(shí)，只觀察到漿料稠度的少量差異。水量加倍的無(wú)意結(jié)果也使回流溫度被抑制至95℃(正常100-105℃)，且G不轉(zhuǎn)化成H。為了達(dá)到100℃，在大氣壓(迪安-斯達(dá)克分水器)蒸餾出水，直至回流溫度達(dá)到100℃。在100℃，反應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)達(dá)到完全，并以平均收率和純度提供H。根據(jù)這一結(jié)果，將程序條件用于放大。這三個(gè)較大規(guī)模批料的結(jié)果匯總于表27中。表27：G至H的較大規(guī)模轉(zhuǎn)化項(xiàng)目投入粗H(粗收率)純度(AUC)1200g201g(83%)91%2225g264g(97%)87%3500g519g(86%)86%9bx).合成I用于制備I的條件與用于制備D的條件相同。雖然HOAc和H2SO4條件作用很好，但這些條件包含加熱混合物到90℃在更大規(guī)模的安全問(wèn)題。為了避免加熱到90℃，評(píng)價(jià)在環(huán)境溫度使用TFA和H2SO4的好評(píng)條件。用TFA(4vol.)和H2SO4(1vol.)在環(huán)境溫度處理H(10g規(guī)模)導(dǎo)致在26小時(shí)后95%轉(zhuǎn)化(通過(guò)HPLC)成I。然后將反應(yīng)混合物倒入冰水，并用DCM萃取。有機(jī)層用飽和NaHCO3洗滌，干燥并濃縮，得到包含顯著量殘余TFA的粗I。由于水性整理不有效去除TFA，不再進(jìn)一步尋求這些條件。用HOAc和H2SO4條件完成四個(gè)中間規(guī)模批料。在一般程序后，在HOAc(4vol.)和H2SO4(2vol.)存在下加熱H到90℃，直至消耗H(<1%AUC,通過(guò)HPLC)。然后使反應(yīng)冷卻到環(huán)境溫度，并通過(guò)倒在冰和水上緩慢猝滅反應(yīng)。在用DCM萃取整理后，通過(guò)硅膠層析純化I。結(jié)果匯總于表28中。表28.I的大規(guī)模生產(chǎn)項(xiàng)目投入(H)收率純度(AUC)方法1200g74%>99.9%80/20EtOAc/庚烷SiO2柱2142g62%>99.9%EtOAc重結(jié)晶3200g51%99.4%MTBESiO2塞柱4604g80%>99.9%80/20EtOAc/庚烷SiO2柱在一個(gè)實(shí)例(表28中的第2個(gè)項(xiàng)目)中，粗I在環(huán)境溫度放置時(shí)固化。然后使這種物質(zhì)從EtOAc重結(jié)晶。這種重結(jié)晶策略也用分離為油的粗I嘗試，但未成功。在裝載到硅膠柱上利用EtOAc/庚烷時(shí)，I也部分結(jié)晶。為了避免這一問(wèn)題，有利使用DCM使粗I預(yù)吸收到硅膠上，然后在裝載到柱上之前濃縮硅膠漿至干。作為EtOAc和庚烷層析的代替，也評(píng)價(jià)MTBE塞柱(表28中的第3個(gè)項(xiàng)目)。遺憾的是，MTBE塞柱只被評(píng)價(jià)一次，且得到低回收率(51%)。這可能是I在硅膠上結(jié)晶，然后不容易重新溶解。9bxi).合成2用Pb(OAc)4完成2的合成。一般在80-85℃90分鐘后完成反應(yīng)。在I轉(zhuǎn)化成2完成時(shí)，使反應(yīng)漿料冷卻到環(huán)境溫度，并用固體Na2CO3(1重量當(dāng)量)處理，隨后用MTBE(7.5vol.)處理。在攪拌30分鐘后，通過(guò)過(guò)濾去除固體(PbCO3)，并用水性NaHCO3洗滌濾液。在水性整理、干燥并濃縮后，通過(guò)在環(huán)境溫度在10/90MTBE/庚烷(5vol.)中再漿化純化粗2。這種方法一般提供2[64-86%收率,94-97%(AUC)]，為灰白色固體。在此階段存在的唯一顯著雜質(zhì)為2的氨基甲酸異丙酯衍生物(2A)。雜質(zhì)2A這種不需要的副產(chǎn)物類似于2’化學(xué)組成，推測(cè)為異氰酸酯中間體與市售叔丁醇中存在的微量異丙醇反應(yīng)的結(jié)果。在10/90MTBE/庚烷再漿化后，雜質(zhì)2A一般以3-4%(AUC)存在于2中。表29匯總化合物2的較大規(guī)模制備的結(jié)果。表29.2的大規(guī)模生產(chǎn)試驗(yàn)投入(I)%收率純度(AUC)雜質(zhì)2A(AUC)雜質(zhì)RRT=0.751165g64%95%4%--2118g86%97%3%--3250g84%94%3%--4217g69%80%5%20%在最后試驗(yàn)(表29,試驗(yàn)4)期間，出現(xiàn)新的主要雜質(zhì)(RRT=0.75)。由于在各試驗(yàn)中使用相同批叔丁醇和Pb(OAc)4，這種新雜質(zhì)的來(lái)源不清楚。檢驗(yàn)前面反應(yīng)證明，這種雜質(zhì)一般存在，但不在高于3-5%的水平上。幸運(yùn)的是，這種新雜質(zhì)(RRT=0.75)可通過(guò)柱層析(1/99MeOH/DCM,在硅膠上)去除，以提供包含2A(2.8%AUC)作為唯一雜質(zhì)的2。作為Pb(OAc)4條件的替代，探討Hofmann重排和原位碘氧基苯條件兩者。使用標(biāo)準(zhǔn)Hofmann重排條件，使I(1equiv.)在水性NaOH中漿化，并用溴(1equiv.)滴加處理。在加溴后，將反應(yīng)混合物加熱到60℃，初始稀漿轉(zhuǎn)化成難以攪拌的油性固體球。兩小時(shí)后，通過(guò)HPLC分析反應(yīng)(在樣品用HCl猝滅后)，顯示多個(gè)峰的復(fù)雜混合物。也有顯著量(25%)未反應(yīng)的I存在，放棄反應(yīng)。也用原位產(chǎn)生的碘氧基苯通過(guò)Oxone?對(duì)碘苯作用評(píng)價(jià)第二組條件。發(fā)現(xiàn)這個(gè)反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)很慢，通過(guò)HPLC產(chǎn)生多種物類。因此，未進(jìn)一步尋求這些條件。9bxii).純化2然后研究幾個(gè)策略純化2，以去除氨基甲酸異丙酯雜質(zhì)(2A)。第一組試驗(yàn)是使粗2[95%純度,含4%2A(AUC)]在乙腈和水的混合物中在環(huán)境溫度再漿化(表30)。根據(jù)表13中的結(jié)果，乙腈中25-50%水的混合物在回收率和純度之間得到最佳平衡。表30.化合物2再漿化結(jié)果溶劑%回收率HPLC純度雜質(zhì)2A5%水，在乙腈中溶解的固體--10%水，在乙腈中35%99.2%0.8%15%水，在乙腈中50%98.8%1.2%25%水，在乙腈中75%98.6%1.4%50%水，在乙腈中99%97.7%2.3%下一個(gè)試驗(yàn)是評(píng)價(jià)2從乙腈和水重結(jié)晶(表30)。在此研究中使用2(97.3%純度,2.7%雜質(zhì)2A)。與表31中的再漿化結(jié)果比較，沒(méi)有來(lái)自這些重結(jié)晶的顯著純度提高。表31.化合物2重結(jié)晶結(jié)果溶劑%回收率HPLC純度雜質(zhì)2A100%乙腈52%98.8%1.2%33%水，在乙腈中71%98.1%1.9%40%水，在乙腈中86%97.9%2.1%然后用2-PrOH和庚烷評(píng)價(jià)第二再漿化溶劑系統(tǒng)。雖然觀察到中等純度提高(表31)，但回收率低于表30和31中相應(yīng)的水和乙腈試驗(yàn)。表32.對(duì)化合物2的另外再漿化試驗(yàn)溶劑%回收率HPLC純度雜質(zhì)2A10%2-PrOH，在庚烷中50%98.1%1.9%25%2-PrOH，在庚烷中63%98.4%1.6%50%2-PrOH，在庚烷中38%98.9%1.1%由于很多雜質(zhì)(除雜質(zhì)2A外)比化合物2更有極性，可用硅膠塞柱作為初步純化方法。為了運(yùn)行這種塞柱，使粗2溶于1/99MeOH/DCM，然后裝載到用相同溶劑系統(tǒng)填充的硅膠柱上。然后快速洗脫化合物2(RF=0.9-1.0)，留下更極性的雜質(zhì)。然后濃縮富級(jí)分至干，并通過(guò)在環(huán)境溫度在MTBE(2vol.)和庚烷(6vol.)中重新漿化混合，以得到均勻批料?？捎眠@種方法制備500g批料2。這提供2[97.2%(AUC)]，它包含化合物2A(2.8%AUC)作為唯一存在的雜質(zhì)。9c).2’方法轉(zhuǎn)移到生產(chǎn)基于研發(fā)生產(chǎn)2’的方法，尋求制備總共2kg的2'。由于得到純B的整理和蒸餾，有一些關(guān)于在規(guī)模上制備B的放大性問(wèn)題。從甲苯切換到DMSO，且雖然反應(yīng)更均勻，但仍觀察到生成B2，并需要柱層析。用這種程序制備900gB，向前進(jìn)行，以提供材料用于熟悉，并制備初始~500gAPI，以提供GLP毒性研究。剩下步驟的熟悉進(jìn)展順利，意外地沒(méi)有氨基甲酸異丙酯雜質(zhì)(F2)的問(wèn)題，這一問(wèn)題困擾研發(fā)，并在500g2的合成中觀察到。大規(guī)模制造商可從不含任何可能反應(yīng)形成F2的2-PrOH的不同源得到它們的叔丁醇。合成的900gB提供477g的2’，通過(guò)HPLC確定99.5%雜質(zhì)。確定B的市售來(lái)源，然后用購(gòu)買的B制備1.61kg的2’。用于大規(guī)模合成2’的試驗(yàn)程序可見于實(shí)施例部分。實(shí)施例10：關(guān)于純化具有高Pd含量的6和7的試驗(yàn)由通過(guò)交叉偶聯(lián)反應(yīng)制備的3產(chǎn)生的6批料的等分試樣制備少量7游離堿。在分離游離堿后，鈀含量從281ppm減至206ppm。評(píng)價(jià)五種廉價(jià)市售清除劑和活性炭。為了加速篩選過(guò)程，用至少4倍計(jì)算量的所選清除劑提高短期成功的可能性。為了比較，也檢驗(yàn)兩個(gè)增大負(fù)載量(20倍和40倍)試驗(yàn)。表33：6利用清除劑的處理結(jié)果項(xiàng)目清除劑清除劑wt(mg)回收的6(mg)Pd(ppm)------------2811QuadraSilTA36490.31952QuadraSilMTU41488.81313QuadraSilAP29493.52044QuadraSilMP32500.92075Smopex11130503.12246活性炭101458.91237QuadraSilTA146441.5538QuadraSilTA286369.5329QuadraSilMTU143451.81910QuadraSilMTU288411.926在典型試驗(yàn)中，向DCM(5mL)中6(或7,500mg)的溶液加入清除劑(>28mg,>計(jì)算所需的4倍)。在35℃攪拌混合物2.5小時(shí)，冷卻到環(huán)境溫度，并通過(guò)0.45uM盤過(guò)濾到預(yù)稱重瓶。然后濃縮濾液，記錄回收率，并分析鈀含量(表33和34)。表34：7(游離堿)利用清除劑的處理結(jié)果項(xiàng)目清除劑清除劑wt(mg)回收的化合物7(mg)Pd(ppm)------------2061QuadraSilTA36513762QuadraSilMTU41510.6393QuadraSilAP29505.4974QuadraSilMP36502.1195Smopex11130507.7956活性炭102487.5497QuadraSilTA142474.8178QuadraSilTA286463.189QuadraSilMTU140491.81110QuadraSilMTU282457.84這些數(shù)據(jù)顯示，清除劑在7游離堿的情況下比在6的情況下更有效。如所預(yù)料的那樣，所用清除劑的量越大，基質(zhì)的回收率越低。最佳的清除劑是QuadraSilMP，這也是處理7游離堿的最廉價(jià)清除劑。實(shí)施例11.篩選制備6的供選氧化劑在初始過(guò)程中，用空氣作為制備6的氧化劑。雖然中間體6’芳香化成6需要空氣作為氧化劑，但由于芳香化步驟遲緩，也觀察到最終產(chǎn)物6緩慢過(guò)氧化成(M+16)N-氧化物。在達(dá)到反應(yīng)完成的過(guò)程中，注意到(M+16)N-氧化物生成，并在反應(yīng)中增加。這種具體雜質(zhì)不能在此步驟或進(jìn)一步在下游清除，并由過(guò)程友好的結(jié)晶/重結(jié)晶程序在此過(guò)程造成主要問(wèn)題。為了達(dá)到對(duì)此步驟氧化階段的更多控制，考慮空氣氧化的替代方法。目的是使環(huán)化的中間體6’選擇性芳香化成6，而不使6過(guò)氧化成(M+16)N-氧化物。用不同的基于金屬和非金屬的氧化劑催化/促進(jìn)6’氧化成6，包括乙酸銅(Cu(OAc)2?H2O)、過(guò)硼酸鈉(NaBO3?4H2O)、氯化鐵(FeCl3?6H2O)、鈀/碳(10%Pd/C)。在有封蓋的4打蘭瓶中在室溫進(jìn)行反應(yīng)。用磁性攪拌棒混合反應(yīng)。不用外部空氣鼓泡或氮?dú)夥?。相?duì)于4選擇反應(yīng)規(guī)模在100mg。來(lái)自此研究的結(jié)果詳細(xì)顯示在表1中。表35.用外部氧化劑制備6反應(yīng)條件：1equiv.的4，1.05equiv.的5，10vol.的AcOH/MeOH(9:1比率)溶液，利用不同氧化劑(1equiv.)在室溫?cái)嚢?。反?yīng)一般在12-15h內(nèi)完成(與空氣氧化條件下35-40h相比)。通過(guò)加水(10vol.)從反應(yīng)混合物沉淀產(chǎn)物6(97-98%AUC純度)。觀察到在分離的產(chǎn)物中0.1-0.5%AUC的M+16N-氧化物。為了進(jìn)一步精簡(jiǎn)此方法，現(xiàn)在合并方法的步驟2和步驟3(步驟2’)。一旦3轉(zhuǎn)化成4完成，就使4的所得THF溶液溶劑交換到MeOH，以調(diào)節(jié)用過(guò)硼酸鈉作為氧化劑使4轉(zhuǎn)化成6的優(yōu)化條件。以下描述當(dāng)前的詳細(xì)過(guò)程：步驟1，合成3：在加熱套中設(shè)置22L反應(yīng)燒瓶，并在加入1’(1.20kg)、2’(1.48kg)、碳酸鈉(1.09kg)和二甲基乙酰胺(7.3kg)之前用氮吹洗。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂良s91℃，并在此溫度在氮下攪拌。在20小時(shí)后對(duì)混合物取樣，用于HPLC分析，結(jié)果顯示約2%AUC(相對(duì)于產(chǎn)物)剩余的1’。在24小時(shí)后分析樣品顯示相對(duì)于產(chǎn)物約1.5%AUC剩余的1’。在加熱約26小時(shí)后關(guān)閉加熱，并使反應(yīng)混合物冷卻過(guò)夜(HPLC分析:1.1%AUC的1’)。冷卻后，將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到100L反應(yīng)器。用20.6kg的2-MeTHF清洗反應(yīng)燒瓶進(jìn)入100L反應(yīng)器，該批料用5%水性氯化鈉(22.1kg)洗滌。使層分離，并用14.7kg2-MeTHF返萃取水層。使層分離后，在反應(yīng)器中剩余有顯著量鹽/碳酸鈉。將水層加到反應(yīng)器，并溫?zé)嶂?0℃。加入另外5.0kg水，以溶解大部分鹽(混濁溶液)，并用15.0kg的2-MeTHF萃取水層。在經(jīng)周末儲(chǔ)存后，顯著量產(chǎn)物已從第一和第二有機(jī)層結(jié)晶。將有機(jī)層加到反應(yīng)器，使剩余固體溶于5.0kg2-MeTHF，并與有機(jī)層在反應(yīng)器中合并。合并的有機(jī)物用5%水性氯化鈉(每次洗滌12.0kg)洗滌兩次。通過(guò)1H-NMR分析有機(jī)層顯示剩余0.1%mol二甲基乙酰胺。在蒸餾有機(jī)層到18L后，分析樣品顯示水分含量為0.15%。該批料用2-MeTHF(25.5kg)稀釋，并在通過(guò)0.22微米濾器精密過(guò)濾之前冷卻到28℃。在過(guò)濾的批料重新加入之前，用精密過(guò)濾的2-MeTHF清洗100L反應(yīng)器。然后使該批料真空蒸餾到10.8L，并溫?zé)嶂?2℃。經(jīng)75分鐘加入庚烷(7.4kg)，保持溫度在66-72℃。在66℃攪拌16分鐘后，使該批料經(jīng)2小時(shí)45分冷卻到25℃。取樣前，在此溫度攪拌該批料15.5小時(shí)。過(guò)濾樣品，通過(guò)HPLC分析濾液，顯示在濾液中有4mg/mL產(chǎn)物。過(guò)濾該批料，用庚烷中2-MeTHF的1:3(v/v)混合物(每次洗滌4.4kg)洗滌兩次，并用4.1kg庚烷洗滌一次。在氮下在濾器上干燥產(chǎn)物1小時(shí)18分，并轉(zhuǎn)移到干燥盤(2.31kg濕重)。在25-30℃干燥過(guò)夜后重量恒定，將產(chǎn)物包裹，得到2.17kg的3(92%收率,99.8%AUC)。步驟2’，合成6：在進(jìn)行壓力檢查和用氮惰化后，向10加侖反應(yīng)器加入1.89kg的3，隨后加入95g10%Pd/C(50%濕)。然后，在加入10.3kg四氫呋喃(THF)之前，用氮清洗反應(yīng)器三次。密封反應(yīng)器，并在用氫加壓到30psi之前抽空到-20英寸汞柱。初始反應(yīng)溫度為15℃，隨著反應(yīng)進(jìn)展，該批料自加熱到30℃。3.75小時(shí)反應(yīng)時(shí)間后，對(duì)該批料取樣用于HPLC分析(在分析期間在30psi繼續(xù)氫化)。在此時(shí)間分析顯示剩余0.43%AUC原料(3)，在5小時(shí)總反應(yīng)時(shí)間后，對(duì)反應(yīng)器放氣，并用氮清洗。在過(guò)濾催化劑后分析顯示剩余0.23%AUC原料(3)。用8.0kgTHF清洗反應(yīng)器，也用這種洗液清洗濾器進(jìn)入該批料。將該批料加到100L夾套反應(yīng)器，并用1.6kgTHF清洗瓶，進(jìn)入100L夾套反應(yīng)器。在加6.4kg甲醇之前，使該批料(~34L)在25℃真空蒸餾至9L。繼續(xù)真空蒸餾至8L，加入6.6kg甲醇，蒸餾繼續(xù)至8L。通過(guò)1H-NMR分析顯示，相對(duì)于甲醇剩余4.5%molTHF，因此，利用甲醇進(jìn)行兩次另外的追加(6.6kg和6.4kg)，隨后，相對(duì)于甲醇THF的%mol為0.1%mol。向該批料加入527g的5和632g四水合過(guò)硼酸鈉。使該批料溫?zé)嶂?0℃，并在取樣用于第一次IPC之前攪拌2小時(shí)。HPLC分析顯示，5.6%AUC的4未反應(yīng)，并在40℃繼續(xù)攪拌過(guò)夜。在19小時(shí)和22小時(shí)后取樣分析顯示沒(méi)有峰(1.6%AUC的6’)變化，保留時(shí)間類似于中間體6’。用水(29.8kg)猝滅反應(yīng)，并在35-40℃攪拌1小時(shí)。使該批料經(jīng)2小時(shí)冷卻到24℃，并在15-25℃攪拌過(guò)夜(17小時(shí))。過(guò)濾產(chǎn)物，用水洗滌兩次(每次洗滌13.6kg)，隨后用庚烷(9.3kg)洗滌。在45℃干燥粗中間體至恒重需要47小時(shí)。分析中間體顯示純度為97.2%AUC。該物質(zhì)(1.84kg)隨乙酸異丙酯(IPAc,12.8kg)在氮下加到100L夾套反應(yīng)器。將混合物加熱到70℃(需要1小時(shí)12分)，攪拌1小時(shí)，然后經(jīng)10小時(shí)冷卻到20℃。過(guò)濾前，在20℃攪拌漿料54小時(shí)。用1.6kgIPAc洗滌產(chǎn)物，隨后用50%(v/v)IPAc/庚烷(1.8L)洗滌。在40-45℃干燥產(chǎn)物18小時(shí)，得到1.33kg的6(61%收率,99.3%AUC)。步驟3’，合成7：在氮下，將來(lái)自前面步驟的中間體(6,1.33kg)加到100L夾套反應(yīng)器，隨后加入二氯甲烷(18.6kg)。經(jīng)34分鐘向20℃的此溶液加入甲磺酸(1.27kg)，所得溫度升高到24℃。在20-23℃攪拌混合物，并通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)。在4.5小時(shí)后分析樣品顯示0.3%AUC原料。向反應(yīng)加水(1.4kg)，并在20℃攪拌過(guò)夜。在加6N氫氧化鈉(3.0kg)調(diào)節(jié)pH至13之前，由于產(chǎn)物沉淀，加入另外的二氯甲烷(9.1kg)。在攪拌15分鐘后，使混合物沉降，并排掉下部有機(jī)層。用二氯甲烷(15.0kg)萃取水層。用水(8.0kg)洗滌合并的有機(jī)層。有機(jī)層的KarlFisher分析顯示，水含量為0.2%水分，因此不需要用硫酸鈉另外干燥。向100L夾套反應(yīng)器中的有機(jī)層加入QuadrasilMP(191g)，溫?zé)嶂?0℃，并在此溫度攪拌15.5小時(shí)。過(guò)濾清除劑，用二氯甲烷(2x1.9kg)洗滌兩次，并返回到潔凈的100L反應(yīng)器。將該批料在加入乙酸異丙酯(8.6kg)之前真空蒸餾至約4L，隨后繼續(xù)蒸餾至約5L。在用乙酸異丙酯調(diào)節(jié)體積到所需水平(~10L)后，對(duì)混合物取樣，用于1H-NMR。由1H-NMR測(cè)定，二氯甲烷的含量為2.3%mol。加入乙酸異丙酯(4.7kg)，并繼續(xù)真空蒸餾到9L最終體積。1H-NMR分析顯示剩余0.5%mol二氯甲烷(規(guī)格<1%)。加入乙酸異丙酯(1.6kg)，并在20-25℃攪拌混合物16小時(shí)。然后過(guò)濾混合物，用乙酸異丙酯(2.3kg和2.5kg)在濾器上洗滌固體兩次。在42℃干燥固體1天，得到805g的7(70%收率,99.5%AUC)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3