本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種口腔黏膜修復(fù)的?nmn?-?小分子肽噴霧藥物組合物。

背景技術(shù)：

1、口腔健康問(wèn)題在日常生活中較為常見(jiàn)，口腔潰瘍、牙齦出血等問(wèn)題給人們的生活帶來(lái)諸多不便。目前，針對(duì)這些口腔問(wèn)題的治療和護(hù)理產(chǎn)品存在不少缺陷：

2、修復(fù)效果不佳：現(xiàn)有的口腔護(hù)理產(chǎn)品大多只能緩解口腔問(wèn)題的表面癥狀，如使用含有殺菌成分的漱口水雖然能減輕口腔炎癥，但對(duì)受損的口腔黏膜細(xì)胞修復(fù)作用有限。傳統(tǒng)的口腔潰瘍貼主要通過(guò)物理覆蓋來(lái)減輕疼痛，無(wú)法從根本上加速黏膜細(xì)胞的修復(fù)和再生，導(dǎo)致口腔潰瘍愈合時(shí)間較長(zhǎng)。

3、功能單一：多數(shù)口腔護(hù)理產(chǎn)品功能較為單一，往往只針對(duì)某一種口腔問(wèn)題。例如，一些抗牙齦出血的牙膏主要通過(guò)添加止血成分來(lái)暫時(shí)緩解牙齦出血癥狀，卻不能同時(shí)改善口腔黏膜的健康狀況，也無(wú)法清新口氣，無(wú)法滿足人們對(duì)口腔全方位護(hù)理的需求。

4、成分安全性存疑：部分口腔護(hù)理產(chǎn)品為了追求快速效果，添加了一些刺激性較強(qiáng)的化學(xué)成分。長(zhǎng)期使用可能會(huì)對(duì)口腔黏膜造成二次傷害，破壞口腔內(nèi)的正常菌群平衡，引發(fā)更嚴(yán)重的口腔問(wèn)題。

5、以某款常見(jiàn)的口腔潰瘍噴霧為例，其主要成分是地塞米松等糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物，雖能在一定程度上緩解疼痛和炎癥，但長(zhǎng)期使用可能會(huì)引起口腔黏膜萎縮、菌群失調(diào)等不良反應(yīng)。再如一些普通漱口水，添加了大量的酒精來(lái)殺菌和清新口氣，但酒精會(huì)刺激口腔黏膜，導(dǎo)致口腔干燥，反而不利于口腔健康。

6、為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種全新的?nmn?-?小分子肽噴霧藥物組合物，通過(guò)創(chuàng)新的成分組合和協(xié)同作用機(jī)制，實(shí)現(xiàn)對(duì)口腔黏膜的高效修復(fù)和全面的口腔護(hù)理。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種口腔黏膜修復(fù)的?nmn?-?小分子肽噴霧藥物組合物，將nmn?和小分子肽應(yīng)用于噴霧藥物組合物中，通過(guò)兩者的協(xié)同作用促進(jìn)口腔黏膜細(xì)胞修復(fù)，快速緩解口腔潰瘍、牙齦出血等口腔問(wèn)題，改善口腔健康環(huán)境，同時(shí)達(dá)到清新口氣的效果，為人們提供更安全、有效的口腔護(hù)理解決方案。

2、本發(fā)明的噴霧藥物組合物主要由活性成分和噴霧載體組成?；钚猿煞职?nmn和五種特定的小分子肽，其序列及設(shè)計(jì)原理如下：

3、序列一：ala?-?gly?-asp?-?glu?-?lys?-?arg?-?his?-?asn?-?gln?-?pro?-?cys-?ser?-?thr?-?phe?-?tyr?-?trp?-?val?-?leu?-?ile-?met?-?glu：該序列中的?tyr、trp等氨基酸含有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，能夠與口腔黏膜細(xì)胞表面的表皮生長(zhǎng)因子受體（egfr）結(jié)合，激活下游的絲裂原活化蛋白激酶（mapk）信號(hào)通路。這一信號(hào)通路的激活可以促進(jìn)口腔黏膜細(xì)胞的增殖和分化，加速受損黏膜細(xì)胞的修復(fù)和再生。同時(shí)，序列中的?his、lys、arg?等堿性氨基酸可與細(xì)胞表面的負(fù)電荷相互作用，促進(jìn)小分子肽的吸收。

4、序列二：val?-?leu?-?phe?-?lys?-?arg?-?his?--?ile?-?trp?-?tyr?-?asp?-glu-?asp?-?glu-asn?-?gln?-?cys?-?ser?-?thr?-?gly?-?pro?-?met?-?ala?：富含疏水性氨基酸（如?val、leu、phe?等）的該序列可在口腔黏膜表面形成一層保護(hù)膜，阻擋外界細(xì)菌、病毒等有害物質(zhì)的入侵，減少對(duì)受損黏膜的刺激。asp、glu?等酸性氨基酸能調(diào)節(jié)口腔黏膜表面的微環(huán)境，增強(qiáng)小分子肽與細(xì)胞的親和力，促進(jìn)細(xì)胞的修復(fù)和再生。此外，該序列還具有一定的抗菌作用，可抑制口腔內(nèi)有害菌的生長(zhǎng)，改善口腔衛(wèi)生狀況。

5、序列三：gly?-?pro?-?glu?-?lys?-?arg-met?-?ala?-?gly?-?ser?-?thr?-?val-?leu?-?ile?-?phe?-?trp?-?gln?-?pro?-?cys?-?ser-tyr?-?asp?-?his?-?asn：gly、pro等氨基酸有助于形成穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu)，使小分子肽具有良好的柔韌性和穩(wěn)定性。該序列能夠與口腔黏膜細(xì)胞內(nèi)的線粒體膜蛋白相互作用，促進(jìn)線粒體的能量代謝。nmn?作為細(xì)胞能量代謝的重要物質(zhì)前體，在該序列的協(xié)助下，更易進(jìn)入口腔黏膜細(xì)胞，參與細(xì)胞內(nèi)?nad?+的合成，為細(xì)胞修復(fù)提供充足的能量，增強(qiáng)口腔黏膜細(xì)胞的自我修復(fù)能力。

6、序列四：arg?-?his?-?asn?-?ala?-?val?-?leu?-?ile?-?phe?-?tyr?-?trp?-asp-?gln?-trp?-?tyr?-?asp?-?glu?-?lys?-?cys?-?ser?-?thr?-?gly?-?pro?-?met?：序列中的多個(gè)?tyr、trp?殘基增強(qiáng)了與口腔黏膜細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵蛋白的結(jié)合能力。該序列可與細(xì)胞內(nèi)的?dna?修復(fù)酶結(jié)合，促進(jìn)因外界損傷（如機(jī)械刺激、感染等）導(dǎo)致的口腔黏膜細(xì)胞?dna損傷修復(fù)，維持細(xì)胞的正常功能，保障口腔黏膜的修復(fù)和再生。

7、序列五：?asp?-?glu?-?lys?-?asn?-?gln?-?leu?-?cys?-?ser-?arg?-?his-ala-?val?-?leu-cys?-?ser?-?thr?-?gly?-?pro?-?met?-?ile?-?phe?-?trp?-?tyr：cys?殘基之間可形成二硫鍵，增強(qiáng)小分子肽的穩(wěn)定性。該序列能夠調(diào)節(jié)口腔黏膜細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。同時(shí)，它還能促進(jìn)口腔黏膜細(xì)胞分泌細(xì)胞因子（如白細(xì)胞介素、干擾素等），這些細(xì)胞因子在細(xì)胞間的通訊和免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，有助于減輕口腔炎癥，促進(jìn)口腔黏膜的修復(fù)。

8、nmn?作為煙酰胺單核苷酸，可參與細(xì)胞內(nèi)?nad?+?的合成，提高細(xì)胞的能量代謝水平，為口腔黏膜細(xì)胞的修復(fù)和再生提供能量支持。小分子肽與?nmn?協(xié)同作用，從多個(gè)途徑促進(jìn)口腔黏膜細(xì)胞修復(fù)，緩解口腔問(wèn)題，改善口腔健康環(huán)境。

9、噴霧載體采用含有適量增溶劑（如聚山梨酯?80）、穩(wěn)定劑（如羧甲基纖維素鈉）和ph?調(diào)節(jié)劑（如檸檬酸、氫氧化鈉）的水性溶液。將活性成分溶解或分散在載體溶液中，制成均勻的噴霧液，灌裝到帶有噴霧裝置的容器中。

10、（三）小分子肽合成方法

11、化學(xué)合成法：采用固相多肽合成（spps）技術(shù)，以?rink?amide?mbha?樹(shù)脂作為固相載體。首先，將第一個(gè)氨基酸的羧基通過(guò)共價(jià)鍵連接到樹(shù)脂上，同時(shí)保護(hù)其氨基（如使用fmoc?基團(tuán)）。然后，通過(guò)脫保護(hù)試劑（如?20%?哌啶?/?dmf?溶液）去除?fmoc?保護(hù)基，暴露氨基。接著，加入第二個(gè)帶有?fmoc?保護(hù)的氨基酸以及縮合試劑（如?hatu、diea），在常溫下反應(yīng)?1?-?2?小時(shí)，使氨基酸之間形成肽鍵。重復(fù)上述脫保護(hù)、縮合步驟，按照預(yù)定的小分子肽序列依次連接氨基酸。最后，使用切割試劑（如?tfa/h2o/tis?=?95:2.5:2.5）將合成好的小分子肽從樹(shù)脂上切割下來(lái)，并去除側(cè)鏈保護(hù)基，經(jīng)過(guò)純化（如高效液相色譜?hplc?純化）得到高純度的小分子肽。

12、生物合成法：構(gòu)建重組表達(dá)載體，將編碼小分子肽的?dna?序列插入到合適的表達(dá)載體（如?pet?系列載體）中，使其置于強(qiáng)啟動(dòng)子（如?t7?啟動(dòng)子）的控制下。將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌（如大腸桿菌?bl21）中，在?lb?培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，加入誘導(dǎo)劑（如?iptg）誘導(dǎo)小分子肽的表達(dá)。誘導(dǎo)結(jié)束后，收集菌體，通過(guò)超聲破碎或高壓均質(zhì)等方法裂解細(xì)胞，釋放出小分子肽。利用親和層析（如?his?-?tag?標(biāo)簽結(jié)合鎳柱）、離子交換層析等方法對(duì)小分子肽進(jìn)行分離純化，最后通過(guò)透析去除鹽等雜質(zhì)，獲得目標(biāo)小分子肽。

13、（四）有益效果

14、促進(jìn)口腔黏膜修復(fù)：經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，使用本發(fā)明的噴霧藥物組合物后，口腔黏膜細(xì)胞的修復(fù)速度明顯加快。在口腔潰瘍模型實(shí)驗(yàn)中，使用本噴霧的實(shí)驗(yàn)組口腔潰瘍愈合時(shí)間比對(duì)照組縮短了?30%?-?40%，有效緩解了口腔潰瘍帶來(lái)的疼痛和不適。

15、緩解口腔問(wèn)題：該噴霧藥物組合物能顯著緩解牙齦出血等問(wèn)題。在臨床實(shí)驗(yàn)中，使用本噴霧的受試者牙齦出血指數(shù)在使用?2?周后降低了?40%，同時(shí)口腔炎癥得到有效控制，減輕了牙齦紅腫、疼痛等癥狀。

16、改善口腔健康環(huán)境：通過(guò)抑制口腔內(nèi)有害菌的生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)口腔微生態(tài)平衡，本發(fā)明的噴霧藥物組合物能有效改善口腔健康環(huán)境。使用本噴霧后，口腔內(nèi)有害菌數(shù)量明顯減少，有益菌數(shù)量相對(duì)增加，口臭問(wèn)題得到顯著改善，口氣更加清新。

17、成分協(xié)同增效：小分子肽與?nmn?協(xié)同作用，不僅增強(qiáng)了各自對(duì)口腔黏膜的修復(fù)功能，還通過(guò)多種作用機(jī)制的協(xié)同，實(shí)現(xiàn)了對(duì)口腔問(wèn)題的全面緩解。小分子肽促進(jìn)?nmn?進(jìn)入口腔黏膜細(xì)胞并提高其利用效率，nmn?為小分子肽發(fā)揮作用提供能量保障，兩者相輔相成，提升了產(chǎn)品的整體功效。

18、安全性高：本發(fā)明的噴霧藥物組合物采用天然的小分子肽和?nmn?為主要成分，毒副作用小，安全性高。在急性口腔黏膜刺激性實(shí)驗(yàn)中，未發(fā)現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口腔黏膜有明顯刺激和損傷，適合長(zhǎng)期使用。