專利名稱：一種恒pH補(bǔ)料策略發(fā)酵生產(chǎn)銀耳多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種恒PH補(bǔ)料策略發(fā)酵生產(chǎn)銀耳多糖的方法，具體涉及高等真菌發(fā) 酵生產(chǎn)多糖的一種方法，屬于生物發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
銀耳的主要藥用成份是多糖，主要包括酸性多糖、中性雜多糖、酸性低聚糖、胞壁 多糖等。銀耳多糖具有強(qiáng)心、延緩衰老、抗血栓、降血脂、降血糖、抗肝炎、抗突變、抗腫瘤、提 高免疫力、抗輻射等功效。銀耳多糖在醫(yī)藥、美容、保健食品等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。銀耳多 糖可以從銀耳子實(shí)體分離獲得，也可以通過分生孢子深層發(fā)酵法生產(chǎn)。由于發(fā)酵法成本低、 多糖純度高，深層發(fā)酵法正逐步取代組織提取法。目前對分生孢子發(fā)酵法生產(chǎn)銀耳多糖的 研究主要集中于發(fā)酵條件的優(yōu)化，如培養(yǎng)基的優(yōu)化，反應(yīng)器的設(shè)計優(yōu)化以及發(fā)酵參數(shù)優(yōu)化。 本實(shí)驗(yàn)室早前已對PH值的控制方式對銀耳多糖產(chǎn)量的影響進(jìn)行了深入研究。本發(fā)明在此 基礎(chǔ)上進(jìn)行補(bǔ)料分批發(fā)酵調(diào)控，即根據(jù)菌株生長和起始培養(yǎng)基的特點(diǎn)，在分批發(fā)酵的某階 段適當(dāng)補(bǔ)加其他不同于起始培養(yǎng)基的碳源，并同時控制PH，使得菌種保持一定的菌體生長 密度，使其代謝流不斷遷移，促進(jìn)產(chǎn)物多糖的生成，補(bǔ)料分批發(fā)酵是介于分批發(fā)酵與連續(xù)發(fā) 酵之間，兼有兩者的優(yōu)點(diǎn)，又克服了兩者的缺點(diǎn)，因此具有很好的發(fā)展前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種恒pH補(bǔ)料策略發(fā)酵生產(chǎn)銀耳多糖的方法，使菌種保持 一定的菌體生長密度，又促使代謝流遷移，有利于產(chǎn)物多糖的生成。本發(fā)明的技術(shù)方案(1)菌種Tremella fuciformis ACCC50546購于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中 心。(2)培養(yǎng)基以g/L計保藏培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)馬鈴薯200，葡萄糖20，瓊脂15。種子培養(yǎng)基葡萄糖20，蛋白胨2，酵母粉2，MgSO4 · 7H20 0. 5，磷酸二氫鉀0. 46，磷酸氫二鉀1。發(fā)酵培養(yǎng)基葡葡萄糖20，蛋白胨2，酵母粉2，MgSO4 ·7H20 0.5,磷酸二氫鉀0. 46， 磷酸氫二鉀1。(3)制備工藝菌種保藏所用菌種保藏在保藏培養(yǎng)基斜面上，4°C保存，兩月轉(zhuǎn)接一次。種子培養(yǎng)從保藏培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)入種子培養(yǎng)基需活化兩次，每次培養(yǎng)3天。控制pH補(bǔ)料發(fā)酵的過程將活化好的種子以3% 5%的接種量接入到發(fā)酵罐中 (上海保興KLF2000)，發(fā)酵罐裝液量為3. 0-3. 5L，發(fā)酵溫度為，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，流 加10%氫氧化鈉和5%硼酸，控制pH在5. 5-6. 5 ；在碳源葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間 歇流加的方式向發(fā)酵罐中補(bǔ)加20%甘油，培養(yǎng)至120h后結(jié)束發(fā)酵，沉淀多糖。
本發(fā)明的有益效果通過控制發(fā)酵過程的PH值并及時補(bǔ)加碳源，使得發(fā)酵過程能 夠得以保持在最佳環(huán)境下，有利于菌體的生長，且有利于代謝流的遷移，所以最終多糖產(chǎn)量 可以達(dá)到4. 4g/L，工藝簡單、環(huán)境污染小、操作方便、多糖的產(chǎn)量高。
具體實(shí)施例方式對照實(shí)施例本發(fā)明所用的菌種為iTremella fuciformisACCC5(^46，購于中國農(nóng) 業(yè)微生物菌種保藏管理中心，先轉(zhuǎn)PDA斜面培養(yǎng)7天，然后分離出酵母狀分生孢子進(jìn)行 搖瓶發(fā)酵3天，溫度，轉(zhuǎn)速200r/min，最后在5L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵5天，發(fā)酵條件為 PH值自然，攪拌轉(zhuǎn)速200r/min，通氣速率2.0vvm。發(fā)酵培養(yǎng)基為(g/L):葡萄糖20，蛋白胨 2，酵母粉2，MgSO4 · 7H20 0. 5，磷酸二氫鉀0. 46，磷酸氫二鉀1。每隔12小時取樣一次，發(fā) 酵過程中不補(bǔ)加甘油，銀耳多糖產(chǎn)量為1.6g/L。實(shí)施例1 從PDA培養(yǎng)基上挑取菌種，在種子培養(yǎng)基中活化兩代后，以3%的接種量 接入5L的發(fā)酵罐中，裝液量為3L，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，在下培養(yǎng)，流加10%氫氧化鈉 和5%硼酸，控制pH在5. 5 ；當(dāng)葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發(fā)酵罐中 補(bǔ)加20%甘油，培養(yǎng)至120h后結(jié)束發(fā)酵，銀耳多糖產(chǎn)量為3. 4g/L。實(shí)施例2 從PDA培養(yǎng)基上挑取菌種，在種子培養(yǎng)基中活化兩代后，以3%的接種量 接入5L的發(fā)酵罐中，裝液量為3L，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，在下培養(yǎng)，流加10%氫氧化鈉 和5%硼酸，控制pH在6.0;當(dāng)葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發(fā)酵罐中 補(bǔ)加20%甘油，培養(yǎng)至120h后結(jié)束發(fā)酵，銀耳多糖產(chǎn)量為3. 7g/L。實(shí)施例3 從PDA培養(yǎng)基上挑取菌種，在種子培養(yǎng)基中活化兩代后，以5%的接種量 接入5L的發(fā)酵罐中，裝液量為3. 5L，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，在下培養(yǎng)，流加10%氫氧化 鈉和5%硼酸，控制pH在6.0;當(dāng)葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發(fā)酵罐 中補(bǔ)加20%甘油，培養(yǎng)至120h后結(jié)束發(fā)酵，銀耳多糖產(chǎn)量為4. 4g/L。實(shí)施例4 從PDA培養(yǎng)基上挑取菌種，在種子培養(yǎng)基中活化兩代后，以5%的接種量 接入5L的發(fā)酵罐中，裝液量為3. 5L，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，在下培養(yǎng)，流加10%氫氧化 鈉和5%硼酸，控制pH在6.5 ；當(dāng)葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發(fā)酵罐 中補(bǔ)加20%甘油，培養(yǎng)至120h后結(jié)束發(fā)酵，銀耳多糖產(chǎn)量為4. Og/L。
權(quán)利要求
1. 一種恒PH補(bǔ)料策略發(fā)酵生產(chǎn)銀耳多糖的方法，其特征在于以Tremella fucif0rmisACCC5(^46(購于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心)為出發(fā)菌株，先轉(zhuǎn)PDA斜 面培養(yǎng)基培養(yǎng)7天，然后分離出酵母狀分生孢子進(jìn)行搖瓶發(fā)酵3天，溫度^°C，轉(zhuǎn)速 200r/min，再以5%的接種量接種于5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐裝液量為3. 5L，發(fā)酵溫度為^°C， 攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，流加10%氫氧化鈉和5%硼酸，控制pH在6. 0 ；在碳源葡萄糖消耗完畢 時(84h)，利用間歇流加的方式向發(fā)酵罐中補(bǔ)加20%甘油，培養(yǎng)至120h后結(jié)束發(fā)酵，沉淀多 糖。
全文摘要
一種恒pH補(bǔ)料策略發(fā)酵生產(chǎn)銀耳多糖的方法，屬于生物發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明用銀耳酵母狀分生孢子作為菌種，接種于發(fā)酵罐中，裝液量為3.5L，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，流加10％氫氧化鈉和5％硼酸，控制pH在6.0；在碳源葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發(fā)酵罐中補(bǔ)加20％甘油，培養(yǎng)至120h后結(jié)束發(fā)酵，沉淀多糖。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是通過控制發(fā)酵環(huán)境的pH，并補(bǔ)加不同的碳源，既補(bǔ)充了營養(yǎng)物質(zhì)，又變遷了代謝途徑，使得菌體能夠在適宜的環(huán)境下生長，促進(jìn)了目的代謝產(chǎn)物的合成。發(fā)酵結(jié)束后，多糖產(chǎn)量達(dá)到4.4g/L，工藝簡單、環(huán)境污染小、操作方便、多糖的產(chǎn)量高。
文檔編號C12R1/645GK102041285SQ200910019460
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月20日
發(fā)明者張帥帥, 朱虎 申請人:中國石油大學(xué)(華東)