海藻糖在延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命方面的應(yīng)用、培養(yǎng)基及方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的方法，發(fā)明人通過在液體培養(yǎng)基中添加海藻糖延長了糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命。該方法包括液體培養(yǎng)基的配制→接種→菌絲培養(yǎng)→離心→再懸浮→短期培養(yǎng)→再離心→常溫貯藏→使用前常溫下活化菌種→接種于原種或栽培養(yǎng)種等步驟。本發(fā)明涉及到三種培養(yǎng)基，培養(yǎng)基A用于菌絲培養(yǎng)，培養(yǎng)基B用于菌絲貯藏，培養(yǎng)基C用于菌種使用前的活化。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了常溫貯藏糙皮側(cè)耳，具有占用空間小、節(jié)約電能、節(jié)約了續(xù)代接種的材料與勞動(dòng)力、貨架壽命長和運(yùn)輸方便等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】海藻糖在延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命方面的應(yīng)用、培養(yǎng)基及方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食用菌貯藏領(lǐng)域，尤其涉及一種海藻糖在延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命方面的應(yīng)用、 培養(yǎng)基及方法。
【背景技術(shù)】
[0002]糙皮側(cè)耳(Pleurotus ostreatus)又稱平燕,是世界上第三大人工栽培的食用菌。糙皮側(cè)耳肉質(zhì)肥嫩，營養(yǎng)豐富，每100克干品中含蛋白質(zhì)30.5克、脂肪3.7克、纖維5.3克，含氨基酸達(dá)18種之多，其中有8種是人體所必需的，并含有維生素B、C、D及鐵、磷、鉀、鑰、鋅、鈣等多種礦物質(zhì)。平菇不僅營養(yǎng)豐富，且有較高的藥用價(jià)值，經(jīng)常食用有改善人體新陳代謝、增強(qiáng)人體體質(zhì)和調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)的功能。目前糙皮側(cè)耳菌種的貯藏方式主要以固體為主，其不足之處在于:需4-10°C低溫冷藏，1-2個(gè)月內(nèi)需續(xù)代一次，固體菌種通常是玻璃試管，運(yùn)輸不方便。
[0003]海藻糖(Trehalose)是一種安全、可靠的天然糖類。近年科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，海藻糖對(duì)生物體具有神奇的保護(hù)作用，它在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環(huán)境條件下在細(xì)胞表面能形成獨(dú)特的保護(hù)膜，有效地保護(hù)蛋白質(zhì)分子不變性失活，從而維持生命體的生命過程和生物特征。海藻糖獨(dú)特的功能特性使其除了可以作為天然食用甜味糖外，還作為優(yōu)良活性保護(hù)劑在蛋白質(zhì)藥物、酶、疫苗和其他生物制品上有較多的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種海藻糖在延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命方面的應(yīng)用、培養(yǎng)基及方法，以實(shí)現(xiàn)常溫貯藏糙皮側(cè)耳菌種，減少菌種保存過程中的繼代次數(shù)，方便運(yùn)輸和燕農(nóng)使用及學(xué)校教學(xué)科研。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:海藻糖在延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命方面的應(yīng)用。
[0006]延長糙皮側(cè)耳菌種忙藏壽命的培養(yǎng)基A用于菌絲培養(yǎng),每IOOOml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、蔗糖20g、海藻糖10g，其余為水。
[0007]培養(yǎng)基A按以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至7.0。
[0008]延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的培養(yǎng)基B用于菌絲貯藏，每1000ml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖30g，其余為水。
[0009]培養(yǎng)基B按以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至7.0。[0010]延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的培養(yǎng)基C用于菌種使用前的活化，每IOOOml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖10g、鹿糖15g、麥芽糖5g，其余為水。
[0011]培養(yǎng)基C按以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至7.0。
[0012]延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的方法，包括以下步驟:
[0013](I)將培養(yǎng)基A分裝于250ml三角瓶，每瓶培養(yǎng)液100ml，120°C滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至室溫，接入大約0.5cmX0.5cmX0.5cm大小的固體母種，28°C室溫下震蕩培養(yǎng)，搖床搖速60次/分，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)(5天)；
[0014](2)將步驟(I)得到的培養(yǎng)物在4000轉(zhuǎn)/分下離心5分鐘，去掉上清液，用培養(yǎng)基B再懸浮菌絲體，再懸浮液體積為原培養(yǎng)液體積的1/3 (約33ml)，搖床震蕩培養(yǎng)6小時(shí)，然后4000轉(zhuǎn)/分下離心5分鐘，去掉上清液，獲得的菌絲體沉淀物；
[0015](3)將步驟(2)得到的菌絲體沉淀物平均分為5份，轉(zhuǎn)移至無菌的聚丙烯塑料試管內(nèi)，在低于30°C的室溫下貯藏待用。
[0016]上述延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的方法，還包括以下步驟:
[0017](4)菌種使用之前，將步驟(3)得到的I份貯藏菌種加滅過菌的培養(yǎng)液ClOOml，常溫下震蕩培養(yǎng)4小時(shí)，然后根據(jù)需要，接種于原種或栽培種上。
[0018]針對(duì)現(xiàn)有糙皮側(cè)耳低溫貯藏要求高、續(xù)代次數(shù)多、運(yùn)輸不便等問題，發(fā)明人結(jié)合液體培養(yǎng)基中添加海藻糖可延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的研究成果，據(jù)此配制了相應(yīng)的培養(yǎng)基，并建立了延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的方法，實(shí)現(xiàn)了其常溫貯藏。與現(xiàn)有的固體菌種低溫貯藏技術(shù)相比，本發(fā)明具有 以下突出優(yōu)點(diǎn):
[0019](I)占用空間小
[0020]傳統(tǒng)固體菌種多用18mmX 180mm玻璃試管，占用空間較大，經(jīng)本發(fā)明獲得的菌絲經(jīng)過離體，可以貯藏于5ml體積的塑料容器中，節(jié)省了菌種的存放空間；
[0021](2)節(jié)約電能
[0022]傳統(tǒng)固體菌種需在4-10°C下低溫貯藏，使用者需配置有冰箱，本發(fā)明屬常溫貯藏，省去了設(shè)備成本也節(jié)約了電能；
[0023](3)節(jié)約了續(xù)代接種的材料與勞動(dòng)力
[0024]傳統(tǒng)固體菌種需1-2個(gè)月繼代一次(通常I個(gè)月一次，2個(gè)月是最大極限)，而本發(fā)明無此環(huán)節(jié)，既降低了菌種成本，也方便了使用者；
[0025](4)貨架壽命長，運(yùn)輸方便
[0026]應(yīng)用本發(fā)明，室溫下放置6個(gè)月內(nèi)菌絲始終具有生長活力，塑料品包裝運(yùn)輸使用均十分方便。
【具體實(shí)施方式】
[0027]實(shí)施例1
[0028](I)培養(yǎng)基配制
[0029]培養(yǎng)基A用于菌絲培養(yǎng)，每IOOOml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、蔗糖20g、海藻糖10g，其余為水。培養(yǎng)基A按以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至7.0。
[0030]培養(yǎng)基B用于菌絲貯藏，每IOOOml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖30g，其余為水。培養(yǎng)基B以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至7.0。
[0031]培養(yǎng)基C用于菌種使用前的活化，每IOOOml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖10g、蔗糖15g、麥芽糖5g，其余為水。培養(yǎng)基C按以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至 7.0。
[0032](2)將培養(yǎng)基A分裝于250ml三角瓶，每瓶培養(yǎng)液100ml，120°C滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至室溫，接入大約0.5cmX0.5cmX0.5cm大小的固體母種，28°C室溫下震蕩培養(yǎng)，搖床搖速60次/分，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)(5天)；
[0033](3)將步驟(2)得到的培養(yǎng)物在4000轉(zhuǎn)/分下離心5分鐘，去掉上清液，用培養(yǎng)基B再懸浮菌絲體，再懸浮液體積為原培養(yǎng)液體積的1/3 (約33ml)，搖床震蕩培養(yǎng)6小時(shí)，然后4000轉(zhuǎn)/分下離心5分鐘，去掉上清液，獲得的菌絲體沉淀物；
[0034](4)將步驟(3)得到的菌絲體沉淀物平均分為5份，轉(zhuǎn)移至無菌的聚丙烯塑料試管內(nèi)，在低于30°C的室溫下貯藏待用。
[0035]利用實(shí)施例1所貯藏的菌種制做原種與栽培種`
[0036]取常溫貯藏5個(gè)月的菌種，每份貯藏菌種加滅過菌的培養(yǎng)液ClOOml，常溫下震蕩培養(yǎng)4小時(shí)。根據(jù)需要(按每份接種原種10份或每份接種栽培種5份)，接種于原種培養(yǎng)瓶(750ml罐頭瓶)，25-28天可長滿菌瓶；或?qū)⒃N接入栽培種袋中(袋規(guī)格20-25cmX 45cm), 25-30天可長滿菌袋。所得到的栽培種按常方法接種入出菇菌袋中(袋規(guī)格20-25cmX 45cm)，25-30天左右可長滿菌袋，在15_25°C的溫度下5_10天可形成菇原基，當(dāng)菇長到成熟期采收。一潮菇生物轉(zhuǎn)化率39%，二潮菇生物轉(zhuǎn)化率27%，三潮菇生物轉(zhuǎn)化率19%，共采收三潮，總生物轉(zhuǎn)化率85%。
[0037]利用實(shí)施例1所貯藏的菌種直接制做栽培種
[0038]取常溫貯藏5個(gè)月的菌種，每份貯藏菌種加滅過菌的培養(yǎng)液ClOOml，常溫下震蕩培養(yǎng)4小時(shí)。根據(jù)需要(按每份接種栽培種5份)，接種于栽培種袋中(袋規(guī)格20-25cmX 45cm), 25-30天可長滿菌袋。所得到的栽培種按常方法接種入出菇菌袋中(袋規(guī)格20-25cmX 45cm)，25-30天左右可長滿菌袋，在15_25°C的溫度下5_10天可形成菇原基，當(dāng)菇長到成熟期采收。一潮菇生物轉(zhuǎn)化率40%，二潮菇生物轉(zhuǎn)化率28%，三潮菇生物轉(zhuǎn)化率17%，共采收三潮，總生物轉(zhuǎn)化率84%。
[0039]實(shí)施例2
[0040]將傳統(tǒng)低溫貯藏菌種與本發(fā)明菌種的生長、出菇性狀進(jìn)行比較試驗(yàn)，結(jié)果如下:
[0041](一)兩種貯藏方式的菌種接入原種后對(duì)原種菌絲生長的影響
[0042]將傳統(tǒng)固體培養(yǎng)基方式制做，并在低溫下貯藏了不同時(shí)間的菌接(CK)，與本發(fā)明常溫下貯藏制做的菌種同時(shí)接入原種培養(yǎng)基中(原種培養(yǎng)基配方為:棉子殼86%，米糠13%，石膏1%，過磷酸鈣1% ；)中，觀察菌絲生長情況，結(jié)果見表I。
[0043]表I兩種貯藏方式的菌種對(duì)原種菌絲生長的影響比較
【權(quán)利要求】
1.海藻糖在延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命方面的應(yīng)用。
2.一種延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的培養(yǎng)基A，其特征在于每IOOOml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、蔗糖20g、海藻糖10g，其余為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的培養(yǎng)基A，其特征在于按以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至7.0。
4.一種延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的培養(yǎng)基B，其特征在于每IOOOml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖30g，其余為水。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的培養(yǎng)基B，其特征在于按以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至7.0。
6.一種延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的培養(yǎng)基C，其特征在于每1000ml培養(yǎng)基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖10g、蔗糖15g、麥芽糖5g，其余為水。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的培養(yǎng)基C，其特征在于按以下步驟配制:按質(zhì)量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調(diào)至7.0。
8.一種延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將培養(yǎng)基A分裝于250ml三角瓶，每瓶培養(yǎng)液100ml，120°C滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至室溫，接入大約0.5cmX0.5cmX0.5cm大小的固體母種，28°C室溫下震蕩培養(yǎng)，搖床搖速60次/分，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)； (2)將步驟(I)得到的培養(yǎng)物在4000轉(zhuǎn)/分下離心5分鐘，去掉上清液，用培養(yǎng)基B再懸浮菌絲體，再懸浮液體積為原培養(yǎng)液體積的1/3，搖床震蕩培養(yǎng)6小時(shí)，然后4000轉(zhuǎn)/分下離心5分鐘，去掉上清液，獲得的菌絲體沉淀物； (3)將步驟(2)得到的菌絲體沉淀物平均分為5份，轉(zhuǎn)移至無菌的聚丙烯塑料試管內(nèi)，在低于30°C的室溫下貯藏待用。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的延長糙皮側(cè)耳菌種貯藏壽命的方法，其特征在于還包括以下步驟: (4)菌種使用之前，將步驟(3)得到的I份貯藏菌種加滅過菌的培養(yǎng)液ClOOml，常溫下震蕩培養(yǎng)4小時(shí)，然后根據(jù)需要，接種于原種或栽培種上。
【文檔編號(hào)】C05G3/00GK103449914SQ201310378524
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月27日
【發(fā)明者】陸榮生, 韓美麗, 廖燕芬, 馬躍峰, 覃建林, 楊玉霞, 馬永林 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所, 賓陽縣陽光食用菌種場(chǎng)