本發(fā)明屬于藥物分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，本發(fā)明涉及一種利用hplc(高效液相色譜法)測定鹽酸阿考替胺原料藥及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
：鹽酸阿考替胺(acotiamidehydrochloridehydrate)是全球首個功能性消化不良(functionaldyspepsia，fd)治療藥，是由日本安斯泰來制藥公司和日本澤里新藥株式會社聯(lián)合開發(fā)的一種新型的促進(jìn)胃蠕動的毒蕈堿m1和m2受體阻斷劑，其在消化道主要是通過抑制乙酰膽堿酯酶的機制起作用，可促進(jìn)胃動力、改善胃容納障礙、增強胃底擴張。鹽酸阿考替胺口服片劑(商品名為acofide，規(guī)格為100mg)，于2013年6月6日在日本被批準(zhǔn)用于治療功能性消化不良，臨床上用于餐后飽脹、上腹脹痛、早期腹脹等功能性消化不良疾病的治療，具有良好的療效，無耐藥性并顯示高安全性。與一般促胃腸動力藥(伊托必利、莫沙比利)不同，鹽酸阿考替胺能夠通過促進(jìn)腸內(nèi)膽堿神經(jīng)末梢乙酰膽堿的釋放來提高胃腸蠕動而改善受損的胃動力與滯后的胃的排空，為第一個胃腸蠕動改善藥物。然而，目前分析鹽酸阿考替胺原料藥及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的方法仍有待改進(jìn)。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提供一種快速分析分離鹽酸阿考替胺降解產(chǎn)物、工藝副反應(yīng)雜質(zhì)和中間體的高效液相色譜法，從而實現(xiàn)了鹽酸阿考替胺原料藥及其制劑中有關(guān)物質(zhì)在同一色譜條件下的分離測定。鹽酸阿考替胺的化學(xué)名稱為n-[2-(二異丙基氨基)乙基]-2-[(2-羥基-4,5-二甲氧基苯甲?；?氨基]-1,3-噻唑-4-羧酰胺的鹽酸鹽三水化合物，其結(jié)構(gòu)式為：鹽酸阿考替胺合成采用路線：鹽酸阿考替胺原料藥及其制劑中有關(guān)物質(zhì)有以下三個來源：一為本品合成過程中帶入的原料、中間體、降解產(chǎn)物；二為合成反應(yīng)中生成的副產(chǎn)物；三為貯存過程中由于環(huán)境的影響產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，主要有：雜質(zhì)1為原料：(4s)-3-[(5s)-5-(4-氟苯基)-5-羥基-1-氧代戊基]-4-苯基-2-噁唑烷酮；雜質(zhì)2為原料：2-氨基噻唑-4-甲酸甲酯；雜質(zhì)3為中間體：(s)-3-((2r,5r)-5-(4-氟苯基)-2-((s)-(4-氟苯基氨基)(4-羥基苯基)甲基)-5-羥基苯基)-4-苯基-2-噁唑烷酮；雜質(zhì)4為副反應(yīng)產(chǎn)物：2-(2,4,5-三甲氧基-苯甲酰胺基)-噻唑-4-羧酸-(2-二異丙基氨基-乙基)-酰胺；雜質(zhì)5為副反應(yīng)產(chǎn)物、降解產(chǎn)物：n-[2-(二異丙基氨基)乙基]-2-羥基-4,5-二甲氧基苯甲酰胺；雜質(zhì)6為副反應(yīng)產(chǎn)物、降解產(chǎn)物：2-氨基-n-[2-(二異丙基氨基)乙基]噻唑-4-羧酰胺；雜質(zhì)7為副反應(yīng)產(chǎn)物、降解產(chǎn)物：2-[(2-羥基-4,5-二甲氧基苯甲?；?氨基]-1,3-噻唑-4-羧酸。對于合成、生產(chǎn)、貯存鹽酸阿考替胺原料藥及制備、貯存鹽酸阿考替胺制劑的過程中都可能產(chǎn)生的以上雜質(zhì)，均需進(jìn)行嚴(yán)格控制，以保證產(chǎn)品質(zhì)量。因此，實現(xiàn)鹽酸阿考替胺及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的快速分離和分析在合成和制劑過程的質(zhì)量控制方面都具有重要的現(xiàn)實意義。在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供了一種利用hplc測定鹽酸阿考替胺原料藥及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的方法。所述方法的色譜條件為：色譜柱為辛烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相為磷酸鹽緩沖液與第一有機溶劑的混合溶液。由此，可以將鹽酸阿考替胺原料藥及其制劑中有關(guān)物質(zhì)在同一色譜條件下進(jìn)行快速高效的分離，可有效控制原料藥和制劑的質(zhì)量。該檢測方法靈敏度高、專屬性強、精密度高、準(zhǔn)確性強、操作方便，可有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。根據(jù)本發(fā)明實施例的測定鹽酸阿考替胺原料藥及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的方法，還可以具有以下附加技術(shù)特征：根據(jù)本發(fā)明的實施例，梯度洗脫的條件為：0分鐘時，所述磷酸鹽緩沖液與所述第一有機溶劑的體積比為85％:15％；20分鐘時，所述磷酸鹽緩沖液與所述第一有機溶劑的體積比為65％:35％；25-30分鐘時，所述磷酸鹽緩沖液與所述第一有機溶劑的體積比為50％:50％；30.01－35分鐘時，所述磷酸鹽緩沖液與所述第一有機溶劑的體積比為(50－85)％:(50－15)％；由此得到的分離效果最佳，峰形最好。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述梯度洗脫的條件為：時間/min磷酸鹽緩沖液/％第一有機溶劑/％0851520653525505030505030.018515358515根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述磷酸鹽緩沖液為選自磷酸二氫鉀緩沖液、磷酸二氫鈉緩沖液、磷酸氫二鉀緩沖液、磷酸氫二鈉緩沖液中的至少一種，優(yōu)選為磷酸二氫鉀緩沖液或磷酸二氫鈉緩沖液，最優(yōu)選為磷酸二氫鉀緩沖液。由此，可以進(jìn)一步改善色譜峰的峰形。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述磷酸鹽緩沖液中含有0.1體積％～0.3體積％的二乙胺，優(yōu)選含有0.2體積％的二乙胺。由此，可以進(jìn)一步改善色譜峰的峰形。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述磷酸鹽緩沖液的ph值為5.0～6.0，優(yōu)選為6.0。根據(jù)本發(fā)明的實施例，采用磷酸調(diào)節(jié)所述磷酸鹽緩沖液的ph值至5.0～6.0。由此，可以進(jìn)一步改善主峰與雜質(zhì)峰之間的分離度，降低主峰的拖尾因子，提高主峰的理論塔板數(shù)。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.001mol/l～0.10mol/l，優(yōu)選為0.01mol/l～0.05mol/l，最優(yōu)選為0.02mol/l。由此，可以在保證分離效果的情況下將對儀器和色譜柱的損害減小至最低。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述第一有機溶劑為甲醇和/或乙腈，優(yōu)選為乙腈。由此，可以進(jìn)一步提高分離效率。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的分析方法包括：采用第二有機溶劑和水的混合溶液將待檢測樣品配制成樣品溶液，將樣品溶液注入高效液相色譜儀，完成鹽酸阿考替胺及制劑中有關(guān)物質(zhì)的測定。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述第二有機溶劑為甲醇和/或乙腈，優(yōu)選為乙腈。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述第二有機溶劑和水的混合比為(80體積％：20體積％)～(20體積％：80體積％)，優(yōu)選為30體積％：70體積％。根據(jù)本發(fā)明的實施例，注入高效液相色譜儀的樣品溶液為2～20μl，優(yōu)選為10μl。根據(jù)本發(fā)明的實施例，高效液相色譜儀的檢測波長為215nm～225nm，優(yōu)選為220nm。由此，可以顯著提高檢測靈敏度。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述流動相的流速為0.8～1.2ml/min，優(yōu)選為1.0ml/min。由此，可以進(jìn)一步提高分離度。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述色譜柱的柱溫為25℃～35℃，優(yōu)選為30℃。由此，可以顯著改善相鄰色譜峰之間的分離度。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述制劑包括藥學(xué)上可接受的給藥劑型，任選地，所述制劑包括片劑、膠囊劑、顆粒劑。根據(jù)本發(fā)明的具體實施例，測定鹽酸阿考替胺及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的方法，可以依照以下步驟實現(xiàn)：取鹽酸阿考替胺原料藥約25mg或鹽酸阿考替胺制劑適量(約相當(dāng)于鹽酸阿考替胺25mg)，精密稱定，置50ml量瓶中，加乙腈-水(30:70)超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成每1ml中約含鹽酸阿考替胺0.5g的溶液，作為供試品溶液；精密量取0.1ml，置100ml量瓶中，用乙腈-水(30:70)稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。依照高效液相色譜法(中國藥典2015年版四部通則0512)試驗，用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液為流動相a，以第一有機溶劑為流動相b；流速為0.8～1.2ml/min，優(yōu)選為1.0ml/min；柱溫25℃～35℃，優(yōu)選為30℃；檢測波長為220nm。精密量取對照溶液與供試品溶液各2～20μl，優(yōu)選為10μl，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。按加校正因子的主成分自身對照法或不加校正因子的主成分自身對照法或外標(biāo)法計算鹽酸阿考替胺中有關(guān)物質(zhì)的含量。本發(fā)明的所述方法可將鹽酸阿考替胺及其制劑中有關(guān)物質(zhì)各成分分離徹底，主峰前后雜質(zhì)峰與主峰分離度良好，可操作性強，分析方法專屬性強、檢測靈敏度高、精密度高、準(zhǔn)確性強、操作方便，可有效控制原料藥及其制劑的質(zhì)量。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。附圖說明圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明實施例1，系統(tǒng)適用性溶液檢測的高效液相色譜圖；圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明實施例2，鹽酸阿考替胺原料藥的0.1％對照溶液的高效液相色譜圖；圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明實施例2，鹽酸阿考替胺原料藥的供試品溶液的高效液相色譜圖；圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明實施例4，系統(tǒng)適用性溶液檢測的高效液相色譜圖；圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明實施例5，系統(tǒng)適用性溶液檢測的高效液相色譜圖；圖6顯示了根據(jù)本發(fā)明實施例6，系統(tǒng)適用性溶液檢測的高效液相色譜圖。具體實施方式提供以下實施例以進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明及其實施方式。在實施例中給出的具體詳細(xì)內(nèi)容僅是出于舉例說明的目的，而不是應(yīng)將其解釋為限制本發(fā)明。實施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。本發(fā)明實施例中所用的鹽酸阿考替胺原料藥為申請人按上述合成路線自制。所用的鹽酸阿考替胺制劑為申請人所在單位自制。鹽酸阿考替胺對照品(自制，批號：rs-aco20140501)鹽酸阿考替胺原料藥(自制，批號：ws0267-075-01)鹽酸阿考替胺片(自制，規(guī)格：100mg，批號：20140526)實施例1儀器：agilent1260高效液相色譜儀，1260infinity二極管陣列檢測器色譜柱：hypersilbdsc8(250*4.6mm，5μm)流動相a：0.02mol/l磷酸二氫鉀緩沖液(含0.2體積％三乙胺，用濃磷酸調(diào)ph至6.0)流動相b：乙腈梯度洗脫見下表：時間/min磷酸鹽緩沖液/％第一有機溶劑/％0851520653525505030505030.018515358515流速：1.0ml/min檢測波長：220nm柱溫：30℃進(jìn)樣體積：10μl溶劑：乙腈-水(30:70)運行時間：35分鐘1、色譜條件的確定采用紫外-可見分光光度計對鹽酸阿考替胺及其所含雜質(zhì)1～雜質(zhì)7在200～400nm之間進(jìn)行了紫外光譜掃描，結(jié)果顯示阿考替胺和各雜質(zhì)均在220nm波長下有較強吸收，故選擇220nm作為檢測波長。2、方法學(xué)專屬性空白溶液：乙腈-水(30:70)系統(tǒng)適用性溶液：分別精密稱取雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、雜質(zhì)7各約10mg置同一20ml容量瓶中，加乙腈-水(30:70)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溶液a。精密稱取鹽酸阿考替胺對照品約10mg，置20ml容量瓶中，精密移取0.2ml溶液a于該量瓶中，加乙腈-水(30:70)稀釋至刻度，搖勻。精密量取空白溶液、系統(tǒng)適用性溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，空白溶液對各峰檢測無干擾。系統(tǒng)適用性溶液(見圖1)中保留時間為4.242min、5.472min、8.564min、11.106min、13.998min、18.668min、19.153min、33.013min的色譜峰依次為雜質(zhì)6、雜質(zhì)2、雜質(zhì)7、雜質(zhì)5、阿考替胺、雜質(zhì)4、雜質(zhì)3和雜質(zhì)1的色譜峰，其中阿考替胺與雜質(zhì)4的分離度為21.55，雜質(zhì)3與雜質(zhì)4的分離度為2.23，阿考替胺峰的拖尾因子為1.17，理論塔板數(shù)為85007。結(jié)果表明，該分析方法的專屬性強。3、檢測限和定量限取鹽酸阿考替胺、雜質(zhì)1～雜質(zhì)7對照品適量，加乙腈-水(30:70)溶解并逐級稀釋，精密量取待測溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄峰高，取信噪比為10的濃度作為定量限，取信噪比為3的濃度作為檢測限。測定結(jié)果為：鹽酸阿考替胺的檢測限為0.03μg/ml，定量限為0.1μg/ml；雜質(zhì)1的檢測限為0.06μg/ml，定量限為0.2μg/ml；雜質(zhì)2的檢測限為0.06μg/ml，定量限為0.2μg/ml；雜質(zhì)3的檢測限為0.03μg/ml，定量限為0.1μg/ml；雜質(zhì)4的檢測限為0.06μg/ml，定量限為0.2μg/ml；雜質(zhì)5的檢測限為0.06μg/ml，定量限為0.2μg/ml；雜質(zhì)6的檢測限為0.06μg/ml，定量限為0.2μg/ml；雜質(zhì)7的檢測限為0.03μg/ml，定量限為0.1μg/ml。結(jié)果表明，該分析方法的檢測靈敏度高。4、精密度試驗(重復(fù)性試驗)精密稱取鹽酸阿考替胺原料藥約25mg，置50ml量瓶中，加乙腈-水(30:70)超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液(平行配制6份)。精密量取6份供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定主峰面積歸一化含量，記錄色譜圖，結(jié)果見表1。從表1可以看出，重復(fù)性測定結(jié)果的rsd為0.01％，說明本有關(guān)物質(zhì)的檢測方法的重復(fù)性良好。表1重復(fù)性試驗結(jié)果供試品溶液123456平均值rsd(％)主峰面積歸一化含量99.9499.9499.9499.9399.9399.9499.940.01實施例2儀器：agilent1260高效液相色譜儀，1260infinity二極管陣列檢測器色譜柱：hypersilbdsc8(250*4.6mm，5μm)流動相a：0.02mol/l磷酸二氫鉀緩沖液(含0.2體積％三乙胺，用濃磷酸調(diào)ph至6.0)流動相b：乙腈梯度洗脫見下表：時間/min磷酸鹽緩沖液/％第一有機溶劑/％0851520653525505030505030.018515358515流速：1.0ml/min檢測波長：220nm柱溫：30℃進(jìn)樣體積：10μl溶劑：乙腈-水(30:70)運行時間：35分鐘實驗步驟：供試品溶液：精密稱取鹽酸阿考替胺原料藥約25mg，置50ml量瓶中，加乙腈-水(30:70)超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻。0.1％對照溶液：精密量取供試品溶液0.1ml，置100ml量瓶中，用乙腈-水(30:70)稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.1％對照溶液、供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，具體見圖2～圖3。采用主成分自身對照法計算鹽酸阿考替胺原料藥中各雜質(zhì)的含量，結(jié)果顯示雜質(zhì)1～雜質(zhì)7均未檢出，其他單個雜質(zhì)均≤0.1％，總雜質(zhì)≤0.5％，原料藥的有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。實施例3儀器：agilent1260高效液相色譜儀，1260infinity二極管陣列檢測器色譜柱：hypersilbdsc8(250*4.6mm，5μm)流動相a：0.02mol/l磷酸二氫鉀緩沖液(含0.2體積％三乙胺，用濃磷酸調(diào)ph至6.0)流動相b：乙腈梯度洗脫見下表：時間/min磷酸鹽緩沖液/％第一有機溶劑/％0851520653525505030505030.018515358515流速：1.0ml/min檢測波長：220nm柱溫：30℃進(jìn)樣體積：10μl溶劑：乙腈-水(30:70)運行時間：35分鐘實驗步驟：供試品溶液：精密稱取鹽酸阿考替胺片細(xì)粉適量(相當(dāng)于鹽酸阿考替胺約25mg)，置50ml量瓶中，加乙腈-水(30:70)超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻。0.1％對照溶液：精密量取供試品溶液0.1ml，置100ml量瓶中，用乙腈-水(30:70)稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.1％對照溶液、供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。采用主成分自身對照法計算鹽酸阿考替胺片中各雜質(zhì)的含量，結(jié)果顯示雜質(zhì)1～雜質(zhì)7均未檢出，其他單個雜質(zhì)均≤0.1％，總雜質(zhì)≤0.5％，原料藥的有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。實施例4儀器：agilent1260高效液相色譜儀，1260infinity二極管陣列檢測器色譜柱：hypersilbdsc8(250*4.6mm，5μm)流動相a：0.05mol/l磷酸二氫鉀緩沖液(含0.3％三乙胺，用濃磷酸調(diào)ph至5.5)流動相b：乙腈梯度洗脫見下表：時間/min磷酸鹽緩沖液/％第一有機溶劑/％0851520653525505030505030.018515358515流速：1.0ml/min檢測波長：220nm柱溫：30℃進(jìn)樣體積：10μl溶劑：乙腈-水(20:80)運行時間：35分鐘實驗步驟：系統(tǒng)適用性溶液：分別精密稱取雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、雜質(zhì)7各約10mg置同一20ml容量瓶中，加乙腈-水(20:80)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溶液a。精密稱取鹽酸阿考替胺對照品約10mg，置20ml容量瓶中，精密移取0.2ml溶液a于該量瓶中，加乙腈-水(20:80)稀釋至刻度，搖勻。取系統(tǒng)適用性溶液10μl，在上述色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。系統(tǒng)適用性溶液(見圖4)中保留時間為4.183min、5.468min、9.179min、11.035min、16.077min、18.158min、21.562min、32.938min的色譜峰依次為雜質(zhì)6、雜質(zhì)2、雜質(zhì)7、雜質(zhì)5、阿考替胺、雜質(zhì)4、雜質(zhì)3和雜質(zhì)1的色譜峰，其中阿考替胺與雜質(zhì)4的分離度為9.50，阿考替胺峰的拖尾因子為1.44，理論塔板數(shù)為81754。結(jié)果表明鹽酸阿考替胺中有關(guān)物質(zhì)可以在同一色譜條件下達(dá)到良好的分離。實施例5儀器：agilent1260高效液相色譜儀，1260infinity二極管陣列檢測器色譜柱：hypersilbdsc8(250*4.6mm，5μm)流動相a：0.01mol/l磷酸二氫鉀緩沖液(含0.1體積％三乙胺，用濃磷酸調(diào)ph至5.0)流動相b：乙腈梯度洗脫見下表：時間/min磷酸鹽緩沖液/％第一有機溶劑/％0851520653525505030505030.018515358515流速：1.0ml/min檢測波長：220nm柱溫：30℃進(jìn)樣體積：10μl溶劑：乙腈-水(80:20)運行時間：35分鐘實驗步驟：系統(tǒng)適用性溶液：分別精密稱取雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、雜質(zhì)7各約10mg置同一20ml容量瓶中，加乙腈-水(80:20)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溶液a。精密稱取鹽酸阿考替胺對照品約10mg，置20ml容量瓶中，精密移取0.2ml溶液a于該量瓶中，加乙腈-水(80:20)稀釋至刻度，搖勻。取系統(tǒng)適用性溶液10μl，在上述色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。系統(tǒng)適用性溶液(見圖5)中保留時間為4.168min、5.456min、9.866min、11.053min、17.320min、17.960min、22.940min、32.943min的色譜峰依次為雜質(zhì)6、雜質(zhì)2、雜質(zhì)7、雜質(zhì)5、阿考替胺、雜質(zhì)4、雜質(zhì)3和雜質(zhì)1的色譜峰，其中阿考替胺與雜質(zhì)4的分離度為2.54，阿考替胺峰的拖尾因子為1.66，理論塔板數(shù)為76344。結(jié)果表明鹽酸阿考替胺中有關(guān)物質(zhì)可以在同一色譜條件下達(dá)到良好的分離。實施例6儀器：agilent1260高效液相色譜儀，1260infinity二極管陣列檢測器色譜柱：hypersilbdsc8(250*4.6mm，5μm)流動相a：0.02mol/l磷酸二氫鉀緩沖液(含0.2體積％三乙胺，用濃磷酸調(diào)ph至4.0)流動相b：乙腈梯度洗脫見下表：時間/min磷酸鹽緩沖液/％第一有機溶劑/％0851520653525505030505030.018515358515流速：1.0ml/min檢測波長：220nm柱溫：30℃進(jìn)樣體積：10μl溶劑：乙腈-水(30:70)運行時間：35分鐘實驗步驟：系統(tǒng)適用性溶液：分別精密稱取雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、雜質(zhì)7各約10mg置同一20ml容量瓶中，加乙腈-水(30:70)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溶液a。精密稱取鹽酸阿考替胺對照品約10mg，置20ml容量瓶中，精密移取0.2ml溶液a于該量瓶中，加乙腈-水(30:70)稀釋至刻度，搖勻。取系統(tǒng)適用性溶液10μl，在上述色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。系統(tǒng)適用性溶液(見圖6)中保留時間為4.098min、5.051min、11.066min、16.749min、18.038min、23.658min、33.018min的色譜峰依次為雜質(zhì)6、雜質(zhì)2、雜質(zhì)5、雜質(zhì)7、阿考替胺(含雜質(zhì)4)、雜質(zhì)3和雜質(zhì)1的色譜峰，其中阿考替胺與雜質(zhì)7的分離度為5.40，阿考替胺與雜質(zhì)4未分離，阿考替胺峰的拖尾因子為1.86，理論塔板數(shù)為68779。結(jié)果表明色譜條件與實施例1條件類似，僅改變磷酸鹽緩沖液ph值為4.0時，鹽酸阿考替胺中有關(guān)物質(zhì)不能在同一色譜條件下達(dá)到良好的分離。此外，術(shù)語“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括至少一個該特征。在本發(fā)明的描述中，“多個”的含義是至少兩個，例如兩個，三個等，除非另有明確具體的限定。在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實施例”、“一些實施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點包含于本發(fā)明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不必須針對的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點可以在任一個或多個實施例或示例中以合適的方式結(jié)合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以將本說明書中描述的不同實施例或示例以及不同實施例或示例的特征進(jìn)行結(jié)合和組合。盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。當(dāng)前第1頁12