利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，包括以下步驟：(1)取家蠶血淋巴進行提取，獲得供試樣品溶液；(2)測定阿苯達唑及其代謝物標準品的標準分析數(shù)據(jù)；(3)按步驟(2)方法，取步驟(1)中的供試樣品溶液注入超快速液相色譜儀，進行分離分析，并用三重四級桿質(zhì)譜儀檢測物質(zhì)信號，獲得供試樣品的分析數(shù)據(jù)；(4)將步驟(3)獲得的供試樣品的分析數(shù)據(jù)與阿苯達唑及其代謝物的色譜分析數(shù)據(jù)進行比對，即可對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物進行快速定性、定量測定。
【專利說明】利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及阿苯達唑及其代謝物的含量的測定方法，尤其涉及一種利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜(UFLC-MS/MS)測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中國是蠶桑的原產(chǎn)地，具有5 000多年的歷史，素有“東方絲國”的美稱。蠶絲及其絲綢制品是我國主要的出口創(chuàng)匯產(chǎn)品，其產(chǎn)銷量約占世界總量的70%，是我國唯一可壟斷世界貿(mào)易市場的出口商品。
[0003]蠶種生產(chǎn)是蠶桑產(chǎn)業(yè)的基礎(chǔ)。家蠶微粒子病是對蠶種生產(chǎn)具毀滅性的傳染性疫病，因其具有胚種傳染能力成為了世界產(chǎn)絲國的檢疫對象。近二十余年來，家蠶微粒子病在我國呈全國流行趨勢，淘汰超毒蠶種量達數(shù)百萬張，經(jīng)濟損失慘重。藥物治療是目前家蠶微粒子病的最有效的防治手段之一。在家蠶微粒子病的藥物治療方面，國內(nèi)學者開展了大量研究，其中在生產(chǎn)上大面積推廣應用的是我所研制的多菌靈粉。為了獲得更高效、低毒的家蠶微粒子病治療藥物材料，我們經(jīng)篩選獲得了治療效果理想的藥物材料阿苯達唑(也稱丙硫苯咪唑)。
[0004]阿苯達唑(albendazole, ABZ)是苯并咪唑類藥物中驅(qū)蟲譜較廣，殺蟲作用最強的一種驅(qū)蟲高效低毒藥物，已被廣泛應用于人體醫(yī)學、畜禽養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖等多個領(lǐng)域。其在體內(nèi)代謝為亞砜類或砜類后，抑制寄生蟲對葡萄糖的吸收，導致蟲體糖原耗竭，或抑制延胡索酸還原酶系統(tǒng)，阻礙ATP產(chǎn)生，使寄生蟲無法存活和繁殖。阿苯達唑在體內(nèi)迅速代謝為阿苯達唑亞砜(albendazole sulphoxide, ABZSO),其為主要代謝產(chǎn)物，也是藥效的主要活性成分；進而轉(zhuǎn)化為阿苯達唑砜(albendazole sulphone, ABZSO2),最終生成阿苯達唑_2_氨基諷(albendazole amino sulphone, ABZSO2-NH2)。早在 20 世紀 80 年代初，國外已有對不同生物材料中阿苯達唑及其代謝物殘留量測定方法的研究報道，Alvinerie和Galtier(1984)利用正向高效液相色譜實現(xiàn)了綿羊血漿中阿苯達唑及其兩種代謝物的同時測定，但其未能檢測到ABZSO2-NH2,且使用的UV檢測器靈敏度較低，僅達十萬分之一級別。同樣利用高效液相色譜，Lanchote等(1998)僅對ABZSO及其對應體和ABZSO2做了檢測，所采用地熒光檢測器的靈敏度比前者高了一個數(shù)量級。到了 21世紀初，國內(nèi)外在人體醫(yī)學、畜禽養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖等多領(lǐng)域?qū)Ω鞣N生物組織材料中丙硫咪唑或苯并咪唑類物質(zhì)測定方法的研究報道也逐漸豐富起來。如免疫分析法、毛細管電泳法、氣-質(zhì)聯(lián)用法，液-質(zhì)聯(lián)用法等。Prochazkova等(2000)利用非水性的毛細管電泳法和普通的HPLC兩種方法對比測定人體血液中的阿苯達唑含量，發(fā)現(xiàn)二者的檢測效果相當。Kitzman等(2002)利用C18固相萃取柱對含阿苯達唑的人體血樣在HPLC上機前進行萃取，能有效祛除雜質(zhì)、排除干擾。Mottier等(2003)也利用固相萃取柱、反向HPLC技術(shù)同時對綿羊、牛等絳蟲寄主體內(nèi)的苯并咪唑類藥物含量進行了測定。Batzias和Delis (2004)利用反向液相色譜，熒光檢測器實現(xiàn)了對綿羊血漿阿苯達唑代謝物含量準確測定。高效液相色譜法雖然應用較為廣泛，但也存在明顯不足，樣品處理過程比較繁瑣，耗時長，易受雜質(zhì)干擾。最近幾年，隨著現(xiàn)代色譜技術(shù)的快速發(fā)展，國內(nèi)外陸續(xù)報道了利用超高效液相、質(zhì)譜以及超快速液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等測定生物組織中農(nóng)藥殘留的研究，很大程度地使得該方法在生物材料農(nóng)藥含量的測定上發(fā)揮了其針對性強，靈敏度高和檢測速率快的優(yōu)越性。然而，相對于人或畜禽動物而言，家蠶體積較小，血淋巴采樣相對困難，而且取樣量受限制、藥物濃度低，加上無機鹽、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、自身代謝物等內(nèi)源性物質(zhì)干擾，對家蠶組織材料的檢測提出更高要求，以上方法均不適用于家蠶組織中藥物的檢測。目前，尚未見針對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物含量同時進行準確定性、定量研究的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜(UFLC-MS/MS)測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，該方法可以對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物進行同時快速定性、定量測定。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:一種利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜(UFLC-MS/MS)測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，包括以下步驟:
(1)取家蠶血淋巴進行提取，獲得供試樣品溶液；
(2)配制一系列不同濃度的阿苯達唑及其代謝物的混合標準溶液，分別注入超快速液相色譜儀，進行分離分析，并用三重四級桿質(zhì)譜儀檢測物質(zhì)離子信號，獲得阿苯達唑及其代謝物的標準分析數(shù)據(jù)；
(3)按步驟(2)方法，取步驟(1)中的供試樣品溶液注入超快速液相色譜儀，進行分離分析，并用三重四級桿質(zhì)譜儀檢測物質(zhì)信號，獲得供試樣品的分析數(shù)據(jù)； (4)將步驟(3)獲得的供試樣品的分析數(shù)據(jù)與阿苯達唑及其代謝物的色譜分析數(shù)據(jù)進行比對，即可對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物進行定性和定量。
[0007]所述步驟(1)的具體操作為:取家蠶血淋巴在提取前進行渦旋振蕩處理，在渦旋振蕩處理后，以乙腈和乙酸乙酯的混合液為提取液，按家蠶血淋巴與提取液體積比為1:5^1: 8進行混合，渦旋振蕩:TlO min，然后通過離心分離上清液，對殘渣重復提取一次，合并上清液，離心、膜濾，獲得供試樣品溶液。
[0008]本發(fā)明所述步驟⑵和(3)中超快速液相色譜儀的色譜條件為:色譜柱=AgilentZORBAX C18 (4.6X100 mm，3.0 u m);柱溫 40°C ;流動相:乙腈:0.005 mol/L 甲酸(V:V) =80%: 20%~90%: 10%，等梯度洗脫；進樣量 10 ii L ;流速 0.1000~0.2 000 mL/min。
[0009]本發(fā)明所述步驟⑵和(3)中三重四級桿質(zhì)譜儀檢測條件為:電離方式:ESI( + );多重反應監(jiān)測質(zhì)譜掃描模式(MRM);霧化氣(NEB):6.00^8.00 psi，氣簾氣(CUR)
23.00~26.00 psi，碰撞氣(CAD):3.00~6.00 psi，離子化溫度(TEM):500.00~600.00。。，噴霧電壓(IS):5000.00^6000.00 V，射入電壓(EP):8.0(Tl2.00 V，碰撞室射出電壓(CXP):
8.00~12.00 V。
[0010]作為本發(fā)明的一個實施方式，所述步驟(2)的一系列不同濃度的阿苯達唑及其代謝物混合標準溶液分別為阿苯達唑及其代謝物濃度為5 iig/L、62.5 ii g/L、125 y g/L、250U g/L>625 y g/L和I 250 U g/L的阿苯達唑及其代謝物混合標準溶液。
[0011]本發(fā)明所述的分析數(shù)據(jù)包括阿苯達唑及其代謝物的保留時間、峰面積以及離子碎片質(zhì)譜檢測結(jié)果等。在所述步驟(2)中，以獲得的峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標來繪制阿苯達唑及其代謝物相應的標準曲線，并得到阿苯達唑及其代謝物相應的回歸方程:ABZ:PAR=3.7242X 106C+3.4938X 104，R2=0.9927 ;ABZS0:PAR= 6.4613X 105C —
4.8495 X 103，R2 = 0.9905 ；ABZSO2:PAR=1.0269 X 106C+89.1365，R2=0.9972 ；ABZSO2-NH2:PAR=L 5396 X IO6C — 8.4586 X IO3, R2=0.9966。在所述步驟(4)中，比對供試樣品與標準品的保留時間和離子碎片質(zhì)譜檢測結(jié)果，對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物進行定性，將阿苯達唑及其代謝物的峰面積數(shù)據(jù)代入各自相應的回歸方程中以計算物質(zhì)含量，即可對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物進行定量。
[0012]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
本發(fā)明采用超快速液相色譜分析樣品，8 min之內(nèi)即可完成一個供試品溶液分析；同時采用串聯(lián)四級桿質(zhì)譜MRM監(jiān)測方式，選擇性好、靈敏度高，且能排除復雜本底中其它成分的干擾，避免了前處理帶來的誤差，兩者結(jié)合輕易實現(xiàn)了家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物的快速定性、定量檢測，且明顯優(yōu)于HPLC法及液相色譜-離子阱質(zhì)譜法。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1-1是混合標準品(A)中ABZ離子色譜圖；
圖1-2是2供試樣品(A')中ABZ離子色譜圖；
圖2-1是混合標準品(B)中ABZSO離子色譜圖；
圖2-2是供試樣品(B')中ABZSO離子色譜圖；
圖3-1是混合標準品 (C)中ABZSO2離子色譜圖；
圖3-2是供試樣品(C')中ABZSO2離子色譜圖；
圖4-1是混合標準品(D)中ABZSO2-NH2離子色譜圖；
圖4-2是供試樣品(D')中ABZSO2-NH2離子色譜圖；
圖5是混合標準液的質(zhì)譜掃描圖。
【具體實施方式】
[0014]材料和方法
1.1儀器和試劑
超快速液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(UFLC-MS/MS)(日本島津、美國AB SCIEX公司)、超聲波清洗機(SB-5200 DT)，Mill1-Q超純水設(shè)備(美國Millipore公司)，Sigma 3k15離心機，電子分析天平，渦漩混合器(德國IKA公司)，0.22 Pm微孔PTFE濾膜(天津市津騰實驗設(shè)備有限公司)，醫(yī)用一次性無菌注射器等。
[0015]ABZ (99.0%)和 ABZSO2 (98.3%)標準品均購自 Dr.Ehrenstorfer GmbH,Germany ;ABZSO (≤ 98%)和 ABZSO2-NH2 (98%)分別購自 Sigma-Aldrich, USA 和 Alfa Aesar, USA。乙臆、甲醇等為色譜純，分別購自Thermo Fisher Scientific和Oceanpak alexativechemical.，Ltd,其余試劑為分析純級別。
[0016]標樣和供試樣品準備1.2.1試驗處理
試驗設(shè)3個重復的試驗區(qū)和I個空白區(qū)，每區(qū)250頭，五齡起蠶餉食喂食用2000 mg/L阿苯達唑溶液浸泡過的桑葉一次之后續(xù)以正常桑，空白區(qū)喂食正常桑。添食藥桑后2小時起，每次每區(qū)隨機取30頭蠶，從尾角處取血淋巴混合為一個供試樣品，共取樣5次，每次取樣后立即置于一 20 °C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br> [0017]1.2.2樣品制備
供試樣品溶液制備:家蠶血淋巴樣品在提取之前渦旋振蕩I min，提取液采用乙腈:乙酸乙酯=5: I的混合液。取I mL家蠶血淋巴樣品,加入5 mL提取液,潤旋振蕩10 min ；分離出殘渣加入2 mL提取液再重復提取一次；合并上清液，在10 000 r/min條件下高速離心5 min，濾液上機前過0.22 y m微孔PTFE濾膜，得到供試樣品溶液。
[0018]陰性樣品溶液的制備:將空白試驗區(qū)家蠶取得的血淋巴按上述方法制備。
[0019]1.2.3標準儲備液制備
試驗以外標法進行定性定量。精確稱取ABZ、ABZSO、ABZSO2、ABZSO2-NH2標準品各0.01g，用乙腈避光振蕩溶解，制成20 mg/L的混合標準儲備液，置于4°C冰箱備用。測定時以不同濃度梯度的阿苯達唑、阿苯達唑亞砜、阿苯達唑砜、阿苯達唑-2-氨基砜標準品繪制標準曲線。
[0020]條件參數(shù)
1.3.1液相色譜條件
液相色譜儀為島津 Prominence UFLC (ULTRA FAST LIQUID CHROMATOGRAPH)，色譜柱:Agilent ZORBAX C18 (4.6X100 mm，3.0 U m);柱溫 40°C ;流動相:乙腈:0.005 mol/L 甲酸(V: V)= (85%: 15%)，等梯度洗脫；進樣量 10 y L ;流速 0.2 000 mL/min。
[0021]質(zhì)譜條件
質(zhì)譜儀為API 4000 MS/MS (AB SCIEX，USA)，三重四極桿質(zhì)譜；電離方式:ESI ( + );多重反應監(jiān)測質(zhì)譜掃描模式(MRM);霧化氣(NEB):7.00 psi，氣簾氣(CUR) 25.00 psi，碰撞氣(CAD):5.00 psi，離子化溫度(TEM):550.00 °C，噴霧電壓(IS):5500.00 V，射入電壓(EP):10.00 V，碰撞室射出電壓(CXP): 10.00 V。阿苯達唑及其代謝物在ESI ( + ) [M+H]+的MRM模式下的質(zhì)譜參數(shù)見表1。
表1阿苯達?及其代謝物的質(zhì)譜參數(shù)
II去簇電壓a撞能聚焦電壓
組分名稱.定量離子對HI++Z DP CE FP __幽紙___(V) (eV) (Y)
n—i I 266J00—191.10045
達唑 -266.100一234.100 13L00 - 190
266.100^234.1002S
丄丨~~~ii~^
阿苯達唑亞砜-2S2J00—2mJ00 128J0 - 170
2S2.200—20S—100____34__
~ZT~7~ 298J00^324A€038 185~
阿苯達唑砜 -298.200^159.100 14100--
298.200^159.10052230

'43~"
p j華[土 —土 -- 24ci200^133j00 1S0M0 -1M
諷240—200—WSJOO271.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
利用Analyst分析軟件對液質(zhì)譜信號數(shù)據(jù)進行分析、物質(zhì)峰面積的自動積分、色譜質(zhì)譜圖的生成；利用Microsoft Office Excel 2003對數(shù)據(jù)進行物質(zhì)含量計算、線性回歸分析、標準相對偏差的計算等統(tǒng)計分析。
[0023]方法驗證
2.1定性分析 125 u g/L混合標準溶液、家蠶血淋巴供試樣品溶液分別進樣10 u L，所得UFLC-MS/MS定量離子重構(gòu)離子質(zhì)量色譜圖見圖1-1~圖4-2，混合標準溶液離子掃描質(zhì)譜見圖5。在選定的色譜條件下，待測物ABZ、ABZS0、ABZS02、ABZS02_NH2的色譜峰保留時間分別為2.45、
2.01,2.02,2.27 min，供試樣品中的各待測物與混合標準品的保留時間基本一致。峰形良好，周圍雜質(zhì)峰干擾可忽略。待測物的定性離子對的重構(gòu)離子色譜峰的信噪比S/N > 3，定量離子對的重構(gòu)離子色譜峰的信噪比S/N ^ 10 ;此外，各定性離子對的相對離子豐度值符合歐盟有關(guān)質(zhì)譜定性的要求(表2)(歐洲共同體委員會，2002)，至此可判斷供試樣品中含有阿苯達唑及其代謝物；反之，則樣品不含此化學物質(zhì)。
[0024]定量分析
對家蠶血淋巴供試樣品中含有的阿苯達唑及其代謝物，分別按其定量離子對(參見表1)的峰面積進行含量計算。方法學研究如下:
2.2.1線性關(guān)系
將20 mg/L的混合標準儲備液配置成濃度分別為5 iig/L、62.5 U g/LU25 u g/L、250 V- g/L>625 U g/L>I 250 U g/L的標準曲線樣品，將所測得的峰面積(peak arearatio, PAR)和濃度(C，u g/L)進行線性回歸分析，得到 ABZ、ABZSO、ABZSO2' ABZSO2-NH2標準溶液回歸方程分別為-MZ:PAR=3.7242X 106C+3.4938 X IO4, R2=0.9927 ；ABZSO:PAR= 6.4613 X IO5C — 4.8495 X IO3, R2 = 0.9905 ；ABZS02:PAR=1.0269 X 106C+89.1365,R2=0.9972 ；ABZSO2-NH2:PAR=1.5396X IO6C — 8.4586X IO3, R2=0.9966，均呈良好的線性關(guān)系。
[0025]2.2.2檢測限(LOD)和定量限(LOQ)
當進樣量為 10 u L, S/N=3 時，ABZ、ABZS0、ABZSO2、ABZSO2-NH2 的 LOD 分別為 0.39 ng/mL、5.00 ng/mL、0.23 ng/mLU.78 ng/mL ;當進樣量為 10 y L, S/N= 10 時，LOQ 分別為 1.32ng/mL>16.67 ng/mL、0.76 ng/mL、5.94 ng/mL。
[0026]2.2.3重復性-精密度試驗
將125 iig/L、625 ug/LU 250 U g/L三種濃度的混合標準溶液和供試樣品各重復進樣6次，各自保留時間和峰面積的RSDs見表3。試驗結(jié)果表明，本方法具有良好的重現(xiàn)性。
【權(quán)利要求】
1.一種利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取家蠶血淋巴進行提取，獲得供試樣品溶液； (2)配制一系列不同濃度的阿苯達唑及其代謝物的混合標準溶液，分別注入超快速液相色譜儀，進行分離分析，并用三重四級桿質(zhì)譜儀檢測物質(zhì)離子信號，獲得阿苯達唑及其代謝物的標準分析數(shù)據(jù)； (3)按步驟(2)方法，取步驟(1)中的供試樣品溶液注入超快速液相色譜儀，進行分離分析，并用三重四級桿質(zhì)譜儀檢測物質(zhì)信號，獲得供試樣品的分析數(shù)據(jù)； (4)將步驟(3)獲得的供試樣品的分析數(shù)據(jù)與阿苯達唑及代謝物的色譜分析數(shù)據(jù)進行比對，即可對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物進行定性和定量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，其特征在于，所述步驟(1)的具體操作為:取家蠶血淋巴在提取前進行渦旋振蕩處理，在渦旋振蕩處理后，以乙腈和乙酸乙酯的混合液為提取液，按家蠶血淋巴與提取液體積比為1: 5~1: 8進行混合，渦旋振蕩:TlO min，然后通過離心分離上清液，采用上述方法對殘渣重復提取一次，合并上清液，離心、過濾，獲得供試樣品溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，其特征在于，所述步驟(2)和(3)中超快速液相色譜儀的色譜條件為:色譜柱:Agilent ZORBAX C18，4.6X100 mm, 3.0 y m ;柱溫40°C ;流動相:乙腈:0.005 mol/L甲酸=80%: 20%~90%: 10%，等梯度洗脫；進樣量10 y L ;流速0.1000~0.2 000 mL/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，其特征在于，所述步驟(2)和(3)中三重四級桿質(zhì)譜儀檢測條件為:電離方式:ESI ( + );多重反應監(jiān)測質(zhì)譜掃描模式；霧化氣:6.0(T8.00 psi，氣簾氣23.00^26.00 psi，碰撞氣:3.00~6.00 psi，離子化溫度:500.00~600.00°C，噴霧電壓:5000.00~6000.00 V，射入電壓:8.00~12.00 V，碰撞室射出電壓:8.00~12.00 V。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，其特征在于，所述步驟(2)的一系列不同濃度的阿苯達唑及其代謝物混合標準溶液分別為阿苯達唑及其代謝物濃度為5 u g/L、62.5 u g/L、125 iig/L、250 iig/L、625 y g/L和I 250 U g/L的阿苯達唑及其代謝物混合標準溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用超快速液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定家蠶血淋巴中阿苯達唑及代謝物的含量的方法，其特征在于，所述步驟(2)和步驟(3)中的分析數(shù)據(jù)包括阿苯達唑及其代謝物的保留時間、峰面積以及離子碎片質(zhì)譜檢測結(jié)果；在所述步驟(2)中，以獲得的峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標來制作阿苯達唑及其代謝物相應的標準曲線，并得到阿苯達唑及其代謝物相應的回歸方程；在所述步驟(4)中，比對供試樣品與標準品的保留時間和離子碎片質(zhì)譜檢測結(jié)果，對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物進行定性，將阿苯達唑及其代謝物的峰面積數(shù)據(jù)代入各自相應的回歸方程中以計算物質(zhì)含量，對家蠶血淋巴中阿苯達唑及其代謝物進行定量。
【文檔編號】G01N30/88GK103487539SQ201310317195
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年7月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月26日
【發(fā)明者】李麗, 楊瓊, 邢東旭, 李慶榮, 肖陽, 葉明強 申請人:廣東省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所