抗炎性肽及包含其的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及具有抗炎活性的肽，其中，該肽包含SEQ ID NO:2～179中的至少一個(gè)氨基酸序列；該肽與上述序列具有超過80％的氨基酸序列同源性；或該肽為上述肽的片段。本發(fā)明還涉及包含上述肽的抗炎組合物。根據(jù)本發(fā)明，包含SEQ ID NO:2～179中的至少一個(gè)氨基酸序列的肽在抑制炎癥及預(yù)防性手段方面皆具有優(yōu)異的功效。因此，包含本發(fā)明的肽的組合物可用作抗炎藥物組合物或用作化妝品組合物，從而治療或防止多種不同類型的炎性疾病。
【專利說明】抗炎性肽及包含其的組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗炎性肽及包含該抗炎性肽的組合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 炎癥是一種生物防御，作為保護(hù)身體不受到可能由外部物理刺激、化學(xué)刺激（例 如暴露在多種過敏原下）或包括細(xì)菌、真菌及病毒在內(nèi)的微生物的入侵造成的對(duì)生物組織 的損傷的手段。
[0003] 產(chǎn)生前列腺素、血栓素等的環(huán)氧合酶（COX)途徑或脂氧合酶（LOX)途徑可用來進(jìn) 行炎癥信號(hào)傳遞。一旦炎癥信號(hào)被傳遞，身體所發(fā)生的諸多改變之一是血管擴(kuò)張，以增加炎 癥周邊的血液供給，從而集中炎癥應(yīng)答所需的血細(xì)胞，例如嗜中性粒細(xì)胞。然而，當(dāng)異常的 生物防御應(yīng)答過多地發(fā)生時(shí)，可能導(dǎo)致炎性疾病。為了防止這種情況，目前正在開發(fā)通過抑 制炎癥信號(hào)傳導(dǎo)途徑中所用的酶（例如，0?-1、0?-2、5-11?、12-11?等）來抑制過度的炎 癥應(yīng)答的藥物。
[0004] 根據(jù)應(yīng)答時(shí)間，炎癥可分為急性炎癥（即時(shí)應(yīng)答，非特異性應(yīng)答，數(shù)天至數(shù)周）、慢 性炎癥（延遲的應(yīng)答，特異性應(yīng)答，數(shù)周或更久）、亞急性炎癥（急性炎癥與慢性炎癥之間的 中間階段，特征在于單核及多形核的混合產(chǎn)物）。
[0005] 并且，除了肽因子之外，諸如前列腺素、白三烯、脂質(zhì)因子（包括血小板活化因子 (PAF))、炎癥因子的合成酶、自由基（例如NO(-氧化氮））、多種細(xì)胞粘著分子、免疫系統(tǒng)及 凝血因子等因子皆可引起炎癥。
[0006] -旦細(xì)胞因已知的致炎癥物質(zhì)（例如外部生物因子（微生物、病毒、寄生蟲）、物理 因子（機(jī)械刺激、熱、輻射、電）及化學(xué)因子）而受損時(shí)，會(huì)釋放出組胺及激肽。釋出的組胺 及激肽將造成血管擴(kuò)張、毛細(xì)血管通透性增加及炎癥處的巨噬細(xì)胞集中，并引起血液流速 增加、水腫、免疫細(xì)胞及抗體的迀移、疼痛以及發(fā)熱。
[0007] 目前使用的炎癥治療物為合成藥物（例如布洛芬）、抗組胺劑、類固醇、可的松、免 疫抑制劑和免疫激動(dòng)劑；但這些藥物僅暫時(shí)性地緩解炎癥。這些藥物無法從根本上治療炎 癥，且具有諸如超敏反應(yīng)和免疫系統(tǒng)退化等副作用。
[0008] 因此，為了有效緩解炎癥，已進(jìn)行了開發(fā)抑制上述炎癥蛋白的表達(dá)的物質(zhì)的研宄。 然而，先前開發(fā)的抗炎物質(zhì)具有若干問題。已開發(fā)出了包括非類固醇類抗炎藥物（NSAID) 及類固醇類抗炎藥物（SAID)在內(nèi)的多種類型的抗炎藥物；但這些藥物不但時(shí)常在服用時(shí) 產(chǎn)生副作用，而且它們無法從根本上治愈炎癥。因此，目前需要在物質(zhì)上及經(jīng)濟(jì)上皆可行的 抗炎藥物。就急性或慢性炎癥（例如慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）方面的一個(gè)例子而言，非類固 醇類抗炎藥物不僅會(huì)抑制C0X-2酶的活性，已知它們還會(huì)抑制C0X-1的活性，從而引起例如 胃腸道失調(diào)等副作用。
[0009] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，源自端粒酶的肽可具有抗炎性質(zhì)，由此完成了本發(fā)明。
[0010] 因此，本發(fā)明的目的在于提供一種新穎的肽。
[0011] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供編碼該新穎的肽的多核苷酸。
[0012] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種具有抗炎活性的肽。
[0013] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供使用此肽作為活性成分的抗炎組合物。
[0014] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供使用此肽作為活性成分的化妝品組合物。
[0015] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供使用此肽作為活性成分的藥物組合物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，提供了一種具有抗炎活性的肽，其中該肽包含SEQ IDNO:2?179中的至少一個(gè)氨基酸序列，或其中該肽與上述序列具有至少80%的序列同 一性，或者該肽為上述肽的片段。
[0017] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述片段由3個(gè)或更多個(gè)氨基酸組成。舉例而言，所述片段 可由 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25 或 26 個(gè)氨基酸 殘基組成。
[0018] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽由30個(gè)或更少個(gè)氨基酸組成。
[0019]舉例而言，所述肽可由 29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、 13、12、11、10、9或8個(gè)氨基酸殘基組成。
[0020] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽由SEQIDN0:2?179中的任一個(gè)氨基酸序列組成。
[0021] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQIDN0:9、SEQIDN0:10、SEQIDN0:11、SEQIDN0:12、SEQIDN0:13、SEQID NO: 17,SEQIDNO: 18,SEQIDNO: 19,SEQIDN0:20,SEQIDN0:2USEQIDN0:25,SEQID NO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQID NO:36、SEQIDNO:38、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQID NO:46、SEQIDNO:54、SEQIDNO:55、SEQIDNO:56、SEQIDNO:57、SEQIDNO:58、SEQID NO:62、SEQIDNO:63、SEQIDNO:64、SEQIDNO:65、SEQIDNO:66、SEQIDNO:70、SEQID N0:7USEQIDN0:72,SEQIDN0:73,SEQIDN0:74,SEQIDN0:80,SEQIDN0:8USEQID NO:82、SEQIDNO:83、SEQIDNO:84、SEQIDNO:88、SEQIDNO:89、SEQIDNO:90、SEQID N0:91、SEQIDN0:92、SEQIDN0:96、SEQIDN0:97、SEQIDN0:98、SEQIDN0:99、SEQID NO: 100,SEQIDN0:10USEQIDNO: 102,SEQIDNO: 103,SEQIDNO: 104,SEQIDNO: 105,SEQIDNO:108、SEQIDNO:109、SEQIDNO:110、SEQIDNO:111、SEQIDNO:112、SEQID NO:113,SEQIDNO:116,SEQIDNO:117,SEQIDNO:118,SEQIDNO:119,SEQIDNO:124, SEQIDNO:131、SEQIDNO:140、SEQIDNO:141、SEQIDNO:142、SEQIDNO:148、SEQID NO:149、SEQIDNO:150、SEQIDNO:156、SEQIDNO:157、SEQIDNO:158、SEQIDNO:159、 SEQIDNO:164、SEQIDNO:165、SEQIDNO:166、SEQIDNO:167、SEQIDNO:168、SEQID NO:172、SEQIDNO:173、SEQIDNO:174、SEQIDNO:175、SEQIDNO:176、SEQIDNO:177 和SEQIDNO:178。
[0022] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQIDN0:9、SEQIDN0:10、SEQIDN0:11、SEQIDN0:17、SEQIDN0:18、SEQID NO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:33、SEQID NO:34、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:54、SEQIDNO:55、SEQID NO:56、SEQIDNO:62、SEQIDNO:63、SEQIDNO:64、SEQIDNO:65、SEQIDNO:70、SEQID N0:7USEQIDN0:72,SEQIDN0:73,SEQIDN0:80,SEQIDN0:8USEQIDN0:82,SEQID N0:83,SEQIDN0:88,SEQIDN0:89,SEQIDN0:90,SEQIDN0:9USEQIDN0:96,SEQ IDN0:97、SEQIDN0:98、SEQIDN0:99、SEQIDN0:100、SEQIDN0:101、SEQIDN0:102、 SEQIDNO:102、SEQIDNO:103、SEQIDNO:108、SEQIDNO:109、SEQIDNO:110、SEQID NO:116,SEQIDNO:117,SEQIDNO:140,SEQIDNO:148,SEQIDNO:149,SEQIDNO:156, SEQIDNO:157、SEQIDNO:164、SEQIDNO:165、SEQIDNO:166、SEQIDNO:167、SEQID NO:172、SEQIDNO:173 和SEQIDNO:174。
[0023] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQIDN0:2?SEQIDN0:5、SEQIDN0:7?SEQIDN0:36、SEQIDN0:38?SEQID N0:73、SEQIDN0:75、SEQIDN0:78?SEQIDN0:107*SEQIDN0:109?SEQIDN0:179。
[0024] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQIDN0:2、SEQIDN0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:30、SEQIDN0:41、SEQIDN0:112 和SEQIDNO:113。
[0025] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQ IDNO: 10,SEQIDN0:1USEQIDNO: 13,SEQIDNO: 14,SEQIDNO: 15,SEQIDNO: 16,SEQ IDNO:17、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQ IDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37、SEQ IDNO:38、SEQIDNO:40、SEQIDNO:43、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQ IDN0:48、SEQIDN0:57、SEQIDN0:58、SEQIDN0:61、SEQIDN0:64、SEQIDN0:65、SEQ IDNO:66、SEQIDNO:68、SEQIDNO:70、SEQIDNO:73、SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQ IDN0:82、SEQIDN0:83、SEQIDN0:87、SEQIDN0:88、SEQIDN0:89、SEQIDN0:91、SEQ IDNO:93、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96、SEQIDNO:98、SEQIDNO:102、SEQIDNO:109、 SEQIDNO:110、SEQIDNO:111、SEQIDNO:112、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQID NO:116,SEQIDNO:117,SEQIDNO:118,SEQIDNO:119,SEQIDNO:120,SEQIDN0:12U SEQIDNO:123、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:130、SEQIDNO:132、SEQID NO:133、SEQIDNO:134、SEQIDNO:135、SEQIDNO:136、SEQIDNO:142、SEQIDNO:143、 SEQIDNO:144、SEQIDNO:145、SEQIDNO:147、SEQIDNO:148、SEQIDNO:149、SEQID NO:153、SEQIDNO:154、SEQIDNO:155、SEQIDNO:157、SEQIDNO:158、SEQIDNO:164、 SEQIDNO:165、SEQIDNO:166、SEQIDNO:167、SEQIDNO:170、SEQIDNO:171、SEQID NO:172、SEQIDNO:173、SEQIDNO:175、SEQIDNO:176、SEQIDNO:177、SEQIDNO:178 和SEQIDNO:179。
[0026] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽源自人類端粒酶。
[0027] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，提供了一種編碼具有抗炎活性的肽的多核苷酸，其 中該肽包含SEQIDN0:2?179中的至少一個(gè)氨基酸序列，或該肽與上述序列具有至少 80 %的序列同一性，或該肽為上述肽的片段。
[0028] 在所述多核苷酸的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽由30個(gè)或更少個(gè)氨基酸組成。舉例 而言，上述肽可由 29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9 或8個(gè)氨基酸殘基組成。在所述多核苷酸的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽由SEQIDN0:2? 179中的任一個(gè)氨基酸序列組成。
[0029] 在所述多核苷酸的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽源自人類端粒酶。
[0030] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，提供了一種包含肽作為活性成分的抗炎組合物，其 中，該肽包含SEQIDNO:2?179中的至少一個(gè)氨基酸序列，該肽的氨基酸序列與上述序列 的同源性超過80%，或該肽為上述肽的片段。
[0031] 在所述組合物的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽由30個(gè)或更少個(gè)氨基酸組成，參照上 文。
[0032] 在所述組合物的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽由SEQIDNO:2?179中的任一個(gè)氨 基酸序列組成。
[0033] 在所述組合物的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述肽源自人類端粒酶。
[0034] 在所述組合物的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述組合物用于治療或預(yù)防炎性疾病。
[0035] 在所述組合物的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述組合物為用于改善或防止皮膚炎癥的化 妝品組合物。
[0036] 在所述組合物的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述組合物為用于治療或預(yù)防炎性疾病的藥 物組合物。
[0037] 在所述組合物的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述組合物為用于治療或預(yù)防炎癥的食品組 合物。
[0038] 在所述組合物的另一個(gè)實(shí)施方式中，上述炎性疾病的特征在于其選自由下列疾病 組成的組：（1)普遍的或局部的炎性疾?。ɡ?，過敏癥；免疫復(fù)合物??；枯草熱；超敏性 休克；內(nèi)毒素性休克；惡病質(zhì)，過熱；肉芽腫??；或結(jié)節(jié)?。唬?)胃腸相關(guān)疾?。ɡ纾@尾 炎；胃潰瘍；十二指腸潰瘍；腹膜炎；胰腺炎；潰瘍性結(jié)腸炎、急性結(jié)腸炎或缺血性結(jié)腸炎； 膽管炎；膽囊炎、脂肪瀉、肝炎、克羅恩氏?。–rone'sdisease);或惠普爾氏?。╓hipple's Disease)) ; (3)皮膚相關(guān)疾?。ɡ?，牛皮癬；燒傷；曬傷；皮膚炎；蕁麻瘆性疣或風(fēng)團(tuán)）； (4) 血管相關(guān)疾?。ɡ纾}管炎（angiitis);血管炎（vasculitis);心內(nèi)膜炎；動(dòng)脈炎； 動(dòng)脈硬化；血栓性靜脈炎；心包炎；充血性心力衰竭；心肌炎；心肌缺血；結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍 炎；周期性狹窄（recurrentstenosis);柏格氏?。˙uerger'sdisease);或風(fēng)濕熱）； (5) 呼吸道疾病（例如，哮喘；會(huì)厭炎；支氣管炎；肺氣腫；鼻炎；囊性纖維化；間質(zhì)性肺炎； C0PD(慢性阻塞性肺?。?；成人呼吸窘迫綜合征；粉塵??；肺泡炎；細(xì)支氣管炎；咽炎；肋膜 炎；或鼻竇炎）；(6)骨胳、關(guān)節(jié)、肌肉及結(jié)締組織相關(guān)疾病（例如，嗜伊紅性肉芽腫；關(guān)節(jié) 炎；關(guān)節(jié)痛；骨髓炎；皮肌炎；筋膜炎；佩吉特氏?。≒aget'sdisease);痛風(fēng)；牙周??；類風(fēng) 濕性關(guān)節(jié)炎；重癥肌無力；強(qiáng)直性脊柱炎；或滑膜炎）；（7)泌尿生殖系統(tǒng)失調(diào)（例如，附睪 炎；陰道炎；前列腺炎；或尿道炎）；(8)中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾?。ɡ?，阿爾茨海默 氏病；腦膜炎；腦炎；多發(fā)性硬化癥；腦梗死；腦栓塞；格-巴二氏綜合征（Guillain-Barre syndrome);神經(jīng)炎；神經(jīng)痛；脊柱損傷；麻痹；或葡萄膜炎）；(9)病毒（例如，流行性感冒； 呼吸道合胞病毒；HIV;乙型肝炎；丙型肝炎；或皰瘆病毒）、感染性疾?。ɡ?，登革熱；或 敗血癥）、真菌感染（例如，念珠菌?。?；或細(xì)菌、寄生蟲及類似微生物感染（例如，彌散性菌 血癥；瘧疾；盤尾絲蟲??；或阿米巴?。唬?0)自身免疫?。ɡ纾谞钕傺?；紅斑狼瘡；古 德帕斯丘綜合征（Goodpasture'ssyndrome);同種異體移植排斥；移植物抗宿主??；或糖 尿?。?；及（11)癌癥或腫瘤疾?。ɡ?，霍奇金?。?。
[0039] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，提供了一種通過施用所述抗炎組合物來治療或防止 炎性疾病的方法。
[0040] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，提供了一種用于預(yù)防或治療炎性疾病的試劑盒，其 包含：具有抗炎活性的肽或包含所述肽的組合物，其中，該肽包含SEQIDNO:2?179中的 至少一個(gè)氨基酸序列，該肽與上述序列具有超過80%的同源性，或該肽為上述肽的片段； 以及包括該肽或組合物的施用劑量、施用途徑、施用頻率及適應(yīng)證中的至少一種的使用說 明書。
[0041] 產(chǎn)業(yè)實(shí)用性
[0042] 根據(jù)本發(fā)明，序列為SEQIDNO:2?179的肽在抑制炎癥及預(yù)防性手段方面皆具 有優(yōu)異的功效。因此，包含本發(fā)明的肽的組合物可用作抗炎藥物組合物或用作化妝品組合 物，進(jìn)而可治療或防止多種不同類型的炎性疾病。
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【專利附圖】

【附圖說明】
[0051] 圖1為顯示出用源自PBMC的單核細(xì)胞的培養(yǎng)物進(jìn)行TNF-aELISA的結(jié)果的圖。以 LPS(10ng/ml)刺激單核細(xì)胞2小時(shí)，接著分別與肽FITC、FITC-TAT、PEP1-FITC及FITC-肽 反應(yīng)2小時(shí)（#P〈0. 01，相較于陰性對(duì)照組（FITC及FITC-TAT))。
[0052] 圖2為顯示出以NF-kB螢光素酶轉(zhuǎn)染HEK293/空白及HEK293/TLR2細(xì)胞系、接著 與脂蛋白（l〇ng/ml)和FITC及FITC-PEPl(4yM)反應(yīng)、并溫育18小時(shí)后進(jìn)行螢光素酶分 析的結(jié)果的圖。螢光素酶的結(jié)果使用海腎熒光素酶校正而獲得（林P〈0. 01，相較于陰性對(duì)照 組（未處理）且將較于脂蛋白處理樣品）。
[0053] 圖3?圖23是對(duì)單核細(xì)胞的TNF-a抑制效果的篩選結(jié)果。
[0054] 圖24?圖46是對(duì)細(xì)胞系THP-1的TNF-a抑制效果的篩選結(jié)果。
[0055] 圖47呈現(xiàn)了經(jīng)0、2. 5、5. 0、10、20及40yM的淀粉樣-0蛋白處理的神經(jīng)干細(xì)胞 的存活力。
[0056] 圖48呈現(xiàn)了經(jīng)0、2. 5、5. 0、10、20及40yM的淀粉樣-0蛋白處理的神經(jīng)干細(xì)胞 的增殖。
[0057] 圖49呈現(xiàn)了經(jīng)0、1、10、50、100及200yM的PEP1處理的神經(jīng)干細(xì)胞的存活力。
[0058] 圖50呈現(xiàn)了經(jīng)0、1、10、50、100及200yM的PEP1處理的神經(jīng)干細(xì)胞的增殖。
[0059] 圖51呈現(xiàn)了經(jīng)1、10、50及100yM的PEP1處理的神經(jīng)干細(xì)胞的存活力；使神經(jīng) 干細(xì)胞受到20yM的淀粉樣0蛋白的損傷，隨后，在用不同濃度的PEP-1處理后測(cè)量細(xì)胞 的存活力（對(duì)照組未用淀粉樣0蛋白及端粒酶系肽處理）。
[0060] 圖52呈現(xiàn)了經(jīng)1、10、50及100yM的PEP1處理的神經(jīng)干細(xì)胞的毒性；使神經(jīng)干 細(xì)胞受到20yM的淀粉樣0蛋白的損傷，隨后，在用不同濃度的PEP-1處理后測(cè)量細(xì)胞毒 性（對(duì)照組未用淀粉樣0蛋白及端粒酶系肽處理）。
[0061] 圖53呈現(xiàn)了經(jīng)1、10、50及100yM的PEP1處理的神經(jīng)干細(xì)胞的增殖；使神經(jīng)干 細(xì)胞受到20yM的淀粉樣0蛋白的損傷，隨后，在用不同濃度的PEP-1處理后測(cè)量細(xì)胞增 殖（對(duì)照組未用淀粉樣0蛋白及端粒酶系肽處理）。
[0062] 圖54呈現(xiàn)了經(jīng)1、10、50及100yM的PEP1處理的神經(jīng)干細(xì)胞的迀移；使神經(jīng)干 細(xì)胞受到20yM的淀粉樣0蛋白的損傷，隨后，在用不同濃度的PEP-1處理后測(cè)量細(xì)胞迀 移（對(duì)照組未用淀粉樣0蛋白及PEP-1處理）。
[0063] 圖55呈現(xiàn)了經(jīng)1、10、50及100yM的PEP1處理的神經(jīng)干細(xì)胞的凋亡；使神經(jīng)干 細(xì)胞受到20yM的淀粉樣0蛋白的損傷，隨后，在用不同濃度的PEP-1處理后測(cè)量細(xì)胞凋 亡（對(duì)照組未用淀粉樣0蛋白及端粒酶系肽處理）。
[0064] 圖56呈現(xiàn)了PEP-1在受到淀粉樣0蛋白損傷的神經(jīng)干細(xì)胞中的ROS(活性 氧）抑制效果；使神經(jīng)干細(xì)胞受到20yM的淀粉樣0蛋白的損傷，隨后，在用不同濃度的 PEP-1 (1、10、50及100yM)處理后測(cè)量對(duì)ROS的抑制（對(duì)照組未用淀粉樣0蛋白及PEP-1 處理）。
[0065] 圖57呈現(xiàn)了利用（A) 2D電泳及（B)抗體陣列所分析的蛋白表達(dá)水平的結(jié)果；使神 經(jīng)干細(xì)胞受到20yM的淀粉樣0蛋白的損傷，隨后，在用不同濃度的PEP-1(1、10及50yM) 處理后測(cè)量蛋白表達(dá)水平（對(duì)照組未用淀粉樣0蛋白及PEP-1處理）。
[0066] 圖58呈現(xiàn)了蛋白質(zhì)印跡的結(jié)果，其顯示了炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平：使神經(jīng)干細(xì) 胞受到20yM的淀粉樣0蛋白的損傷，隨后，用不同濃度的PEP-1(1、10及50yM)處理細(xì) 胞。
[0067] 圖59呈現(xiàn)了PEP1對(duì)淀粉樣0蛋白聚集的抑制效果；(A)顯示出當(dāng)用1yM的淀 粉樣0蛋白和PEP1(0. 1、1及10yM)共同處理時(shí)淀粉樣0蛋白的寡聚化減少；(B)顯示 了用PEP-1處理已被誘導(dǎo)聚集的淀粉樣蛋白的情況。
[0068] 圖60呈現(xiàn)了PI3K抑制劑LY294002對(duì)經(jīng)PEP1處理的細(xì)胞的存活力的影響。用 PEP1處理后所增加的細(xì)胞存活力在用LY294002處理后減少。
[0069] 圖61?圖159是對(duì)所選擇的肽的蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果，其顯示出了HMGB1在細(xì)胞 中的積累。

【具體實(shí)施方式】
[0070] 由于本發(fā)明可適應(yīng)各種轉(zhuǎn)化形式及實(shí)際應(yīng)用實(shí)例，以下是對(duì)本發(fā)明的更詳細(xì)描 述。然而，這不意味著對(duì)實(shí)際應(yīng)用形式的限制；應(yīng)理解的是，本發(fā)明的意圖在于包括所有轉(zhuǎn) 化形式、等價(jià)形式及替代形式中的技術(shù)概念及外延。在描述本發(fā)明時(shí)，若有關(guān)現(xiàn)有技術(shù)的任 何詳細(xì)描述被認(rèn)為會(huì)破壞本發(fā)明的基本原理，則將略去該描述。
[0071] 已知端粒為染色體末端的遺傳物質(zhì)重復(fù)序列，其防止染色體受損或與其它染色體 融合。端粒的長(zhǎng)度會(huì)在每次細(xì)胞分裂時(shí)縮短，在細(xì)胞分裂一定次數(shù)后，端粒的長(zhǎng)度會(huì)縮得非 常短以使細(xì)胞停止分裂并死亡。另一方面，已知端粒的延長(zhǎng)可延長(zhǎng)細(xì)胞的壽命。舉例而言， 癌細(xì)胞分泌一種稱為端粒酶的酶，其防止端粒縮短，因而導(dǎo)致癌細(xì)胞的增殖。本發(fā)明是基于 發(fā)現(xiàn)具有抗炎效果的源自端粒酶的肽而完成的。
[0072] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，提供了一種具有抗炎活性的肽。所述肽包含SEQID NO:2?179中的至少一個(gè)氨基酸序列，所述肽與上述序列具有超過80%的同源性，或所述 肽為上述肽的片段。
[0073] SEQIDNO: 2?179中描述的肽如下表1所示。SEQIDNO: 180列出了人類端粒酶 蛋白的全長(zhǎng)序列。SEQIDNO: 1列出了由16個(gè)氨基酸的序列構(gòu)成的源自端粒酶的肽。SEQ IDNO:2?179中提及的肽如下表1所示。SEQIDNO: 180列出了人類端粒酶蛋白的全長(zhǎng) 序列。SEQIDNO: 1列出了由16個(gè)氨基酸的序列構(gòu)成的源自端粒酶的肽。SEQIDN0:2? 77中的肽是包含SEQIDNO: 1的肽。SEQIDNO:78?179中的肽是SEQIDNO: 1肽的片 段。
[0074] 下表1中的"名稱"用于區(qū)分這些肽。在本發(fā)明的另一個(gè)【具體實(shí)施方式】中，SEQID N0:2?179中所述的肽中有多于一種肽包括"合成肽"，即端粒酶的選定區(qū)域的合成肽。在 本說明書中，術(shù)語"pep"是指：具有SEQIDNO: 2?179中任一個(gè)的肽、或包含與上述序列 的同源性超過80%的氨基酸序列的肽、或上述肽的肽片段。
[0075]表1
[0076]

【權(quán)利要求】
1. 一種具有抗炎活性的肽，其中，所述肽包含： (a) 選自SEQ ID NO:2?179中的至少一個(gè)氨基酸序列，或 (b) 與（a)中定義的氨基酸序列具有至少80%的序列同一性的至少一個(gè)氨基酸序列， 或 (c) (a)或（b)中定義的氨基酸序列的片段。
2. 如權(quán)利要求1所述的肽，其中，所述片段由至少3個(gè)氨基酸組成。
3. 如權(quán)利要求1所述的肽，所述肽由至多30個(gè)氨基酸組成。
4. 如權(quán)利要求1所述的肽，所述肽由SEQ ID N0:2?179中的任一個(gè)氨基酸序列組成。
5. 如權(quán)利要求1所述的肽，所述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11、SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13、SEQ ID NO: 17,SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID N0:20,SEQ ID N0:2USEQ ID N0:25,SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:70、SEQ ID N0:7USEQ ID N0:72,SEQ ID N0:73,SEQ ID N0:74,SEQ ID N0:80,SEQ ID N0:8USEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID N0:91、SEQ ID N0:92、SEQ ID N0:96、SEQ ID N0:97、SEQ ID N0:98、SEQ ID N0:99、SEQ ID NO: 100,SEQ ID N0:10USEQ ID NO: 102,SEQ ID NO: 103,SEQ ID NO: 104,SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:117,SEQ ID NO:118,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、 SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:174、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176、SEQ ID NO:177 和 SEQ ID NO:178。
6. 如權(quán)利要求5所述的肽，所述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11、SEQ ID N0:17、SEQ ID N0:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:70、SEQ ID N0:7USEQ ID N0:72,SEQ ID N0:73,SEQ ID N0:80,SEQ ID N0:8USEQ ID N0:82,SEQ ID N0:83, SEQ ID N0:88, SEQ ID N0:89, SEQ ID N0:90, SEQ ID N0:9U SEQ ID N0:96, SEQ ID N0:97、SEQ ID N0:98、SEQ ID N0:99、SEQ ID N0:100、SEQ ID N0:101、SEQ ID N0:102、 SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117,SEQ ID NO:140,SEQ ID NO:148,SEQ ID NO:149,SEQ ID NO:156,SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173 和 SEQ ID NO:174。
7. 如權(quán)利要求1所述的肽，所述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQ ID N0:2 ?SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:7 ?SEQ ID N0:36、SEQ ID N0:38 ?SEQ ID 恥：73、5￡〇10勵(lì)：75、5￡〇10恥：78?5￡〇10勵(lì)：107和5￡〇10恥：109?5￡〇10勵(lì)：179。
8. 如權(quán)利要求7所述的肽，所述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：3￡〇10勵(lì)：2、5￡〇10勵(lì)：3、5￡〇10勵(lì)：30、5￡〇10勵(lì)：41、5￡〇10勵(lì)：112和5￡〇10 N0:113。
9. 如權(quán)利要求1所述的肽，所述肽包含選自由以下序列組成的組的任一個(gè)氨基酸序 列：SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10,SEQ ID N0:1USEQ ID NO: 13,SEQ ID NO: 14,SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID N0:48、SEQ ID N0:57、SEQ ID N0:58、SEQ ID N0:61、SEQ ID N0:64、SEQ ID N0:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID N0:82、SEQ ID N0:83、SEQ ID N0:87、SEQ ID N0:88、SEQ ID N0:89、SEQ ID N0:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:109、 SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:117,SEQ ID NO:118,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:120,SEQ ID N0:12U SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、 SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、 SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176、SEQ ID NO:177、SEQ ID NO:178 和 SEQ ID NO:179。
10. 如權(quán)利要求1所述的肽，所述肽源自人類端粒酶。
11. 一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的肽。
12. -種抗炎組合物，所述抗炎組合物包含作為活性成分的權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng) 所述的肽。
13. 如權(quán)利要求12所述的抗炎組合物，用于治療或預(yù)防炎性疾病。
14. 如權(quán)利要求12所述的抗炎組合物，所述抗炎組合物為用于改善或防止皮膚炎癥的 化妝品組合物。
15. 如權(quán)利要求12所述的抗炎組合物，所述抗炎組合物為用于治療或預(yù)防炎性疾病的 藥物組合物。
16. 如權(quán)利要求12所述的抗炎組合物，所述抗炎組合物為用于治療或預(yù)防炎癥的食品 組合物。
17. 如權(quán)利要求13或15所述的抗炎組合物，其中，所述炎性疾病選自由以下疾病組成 的組：（1)普遍的或局部的炎性疾?。ɡ纾^敏癥；免疫復(fù)合物?。豢莶轃?；超敏性休克； 內(nèi)毒素性休克；惡病質(zhì)，過熱；肉芽腫?。换蚪Y(jié)節(jié)?。唬?)胃腸相關(guān)疾?。ɡ纾@尾炎；胃 潰瘍；十二指腸潰瘍；腹膜炎；胰腺炎；潰瘍性結(jié)腸炎、急性結(jié)腸炎或缺血性結(jié)腸炎；膽管 炎；膽囊炎、脂肪瀉、肝炎、克羅恩氏??；或惠普爾氏?。?；（3)皮膚相關(guān)疾?。ɡ?，牛皮癬； 燒傷；曬傷；皮膚炎；蕁麻瘆性疣或風(fēng)團(tuán)）；⑷血管相關(guān)疾病（例如，脈管炎；血管炎；心內(nèi) 膜炎；動(dòng)脈炎；動(dòng)脈硬化；血栓性靜脈炎；心包炎；充血性心力衰竭；心肌炎；心肌缺血；結(jié) 節(jié)性動(dòng)脈周圍炎；周期性狹窄；柏格氏?。换蝻L(fēng)濕熱）；（5)呼吸道疾?。ɡ纾?；會(huì)厭 炎；支氣管炎；肺氣腫；鼻炎；囊性纖維化；間質(zhì)性肺炎；COPD(慢性阻塞性肺?。怀扇撕?吸窘迫綜合征；粉塵病；肺泡炎；細(xì)支氣管炎；咽炎；肋膜炎；或鼻竇炎）；(6)骨胳、關(guān)節(jié)、 肌肉及結(jié)締組織相關(guān)疾?。ɡ纾纫良t性肉芽腫；關(guān)節(jié)炎；關(guān)節(jié)痛；骨髓炎；皮肌炎；筋膜 炎；佩吉特氏??；痛風(fēng)；牙周??；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；重癥肌無力；強(qiáng)直性脊柱炎；或滑膜炎）； (7)泌尿生殖系統(tǒng)失調(diào)（例如，附睪炎；陰道炎；前列腺炎；或尿道炎）；(8)中樞或周圍神 經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病（例如，阿爾茨海默氏??；腦膜炎；腦炎；多發(fā)性硬化癥；腦梗死；腦栓塞； 格-巴二氏綜合征；神經(jīng)炎；神經(jīng)痛；脊柱損傷；麻痹；或葡萄膜炎）；(9)病毒（例如，流行 性感冒；呼吸道合胞病毒；HIV;乙型肝炎；丙型肝炎；或皰瘆病毒）、感染性疾?。ɡ?，登 革熱；或敗血癥）、真菌感染（例如，念珠菌?。?；或細(xì)菌、寄生蟲及類似微生物感染（例如， 彌散性菌血癥；瘧疾；盤尾絲蟲?。换虬⒚装筒。唬?0)自身免疫?。ɡ?，甲狀腺炎；紅斑 狼瘡；古德帕斯丘綜合征；同種異體移植排斥；移植物抗宿主??；或糖尿?。?；及（11)癌癥 或腫瘤疾?。ɡ?，霍奇金病）。
18. -種通過施用權(quán)利要求12至17中任一項(xiàng)所述的抗炎組合物來治療或防止炎性疾 病的方法。
19. 一種用于預(yù)防或治療炎性疾病的試劑盒，所述試劑盒包含：權(quán)利要求1至10中任 一項(xiàng)所述的肽；以及包括所述肽或所述組合物的施用劑量、施用途徑、施用頻率和適應(yīng)證中 的至少一種的使用說明書。
20. 如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的肽，用作藥物。
21. 如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的肽，用于權(quán)利要求18所述的方法中。
【文檔編號(hào)】C07K14/435GK104507961SQ201380036618
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月11日
【發(fā)明者】金商在, 金京姫, 李圭庸, 高成昊, 樸賢喜, 許成珍, 李宇珍, 金范埈 申請(qǐng)人:凱爾杰姆維克斯有限公司, 金商在