Il-21表位和il-21配體的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及IL-21配體(例如抗體)及其用途。
【專(zhuān)利說(shuō)明】IL-21表位和IL-21配體
[0001]本發(fā)明涉及存在于IL-21上的不連續(xù)表位和與該表位結(jié)合的配體。
[0002]IL-21是對(duì)先天性免疫應(yīng)答和獲得性免疫應(yīng)答兩者都發(fā)揮多效作用的I型細(xì)胞因子。它主要由活化⑶4+T細(xì)胞、濾泡T細(xì)胞和天然殺傷細(xì)胞(NKT)產(chǎn)生。另外，最新證據(jù)表明Thl7細(xì)胞可產(chǎn)生大量的IL-21。
[0003]IL-21提高⑶8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性，在抗原存在下可促進(jìn)⑶8+細(xì)胞增殖。IL-21受IL-6(—種已知促進(jìn)Thl7細(xì)胞發(fā)育的細(xì)胞因子)的誘導(dǎo)。IL-21以促進(jìn)其自身產(chǎn)生和支持T輔助細(xì)胞分化成為T(mén)hl7細(xì)胞的自分泌方式作用于T輔助細(xì)胞。與此一致，IL-21缺陷型小鼠顯示Thl7反應(yīng)受損。IL-21還作用于B細(xì)胞，并增加抗體產(chǎn)生；然而，IL-21不是功能性抗體產(chǎn)生所必需的，而IL-21Ra陰性小鼠顯示增殖降低以及CD8+細(xì)胞的細(xì)胞毒性受損兩者。最新的系列研究表明，由CD4+細(xì)胞產(chǎn)生的IL-21對(duì)CD8+T細(xì)胞控制病毒感染的能力至關(guān)重要。[0004]成熟IL-21為133個(gè)氨基酸的多肽(SEQ ID N0.1的殘基30-162，圖2)，其特征在于4個(gè)螺旋區(qū)段，以上-上-下-下的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)排列。IL-21通過(guò)由專(zhuān)用的IL-21受體a鏈(IL-21Ra)和共同的Y鏈(YC) (SEQ ID N0.8的殘基23-369)組成的異二聚體受體復(fù)合物發(fā)出信號(hào)。IL-21包含兩個(gè)結(jié)合部位，結(jié)合部位I(BSl)和2(BS2)，IL-21經(jīng)由其分別與IL-21Ra和YC相互作用。IL-21經(jīng)由BSl以高親和力結(jié)合IL-21R a，但受體激活與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)也需要IL-21和YC之間經(jīng)由BS2的結(jié)構(gòu)性相互作用，從而形成三元復(fù)合物。以高親和力結(jié)合IL-21Ra但缺乏與Y C結(jié)構(gòu)性相互作用的能力的IL-21變體將占據(jù)IL21受體而不誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并因此用作IL-21受體拮抗劑。
[0005]IL-21提高免疫力的能力在IL-21的治療應(yīng)用中激起了極大關(guān)注。最近在針對(duì)轉(zhuǎn)移性黑素瘤類(lèi)型和腎癌的臨床試驗(yàn)中對(duì)其進(jìn)行了評(píng)價(jià)。動(dòng)物研究證實(shí)IL-21和腫瘤特異性抗體之間的協(xié)同效應(yīng)，這可能表明IL-21作為抗腫瘤抗體的增效劑的未來(lái)治療應(yīng)用。此外，IL-21在自身免疫病中起復(fù)雜作用。IL-21減量調(diào)節(jié)IgE產(chǎn)生的能力表明，它可治療性地用于對(duì)抗哮喘和變態(tài)反應(yīng)。動(dòng)物研究結(jié)果支持這個(gè)觀點(diǎn)。另一方面，IL-21促進(jìn)Thl7發(fā)育的能力使之成為促炎細(xì)胞因子，而且目前針對(duì)在治療一系列不同的自身免疫病中的可能應(yīng)用，對(duì)多種不同的IL-21和IL-21Ra拮抗劑/抑制劑進(jìn)行了研究。
[0006]對(duì)IL-21有特異性的單克隆抗體是本領(lǐng)域已知的，例如W02007111714和W02010055366 (Zymo-Genetics, Inc.)的單克隆抗體。具體地說(shuō)，W02010055366 描述了以克隆號(hào)366.328.10.63 (本文稱(chēng)為“mAbl4”)命名的IL-21抗體，其對(duì)其關(guān)聯(lián)抗原具有高親和力并具有其它所需性質(zhì)，對(duì)人和食蟹猴(cynomolgus monkey) IL-21顯示特異性。使用同二聚體IL-21R a -Fe構(gòu)建體或異二聚體IL-21R a /y C-Fc構(gòu)建體，該抗體顯示不與IL-21R a也不與￥(:競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合11-21。
[0007]發(fā)明概述
[0008]我們?cè)诒疚亩x了 IL-21上的新表位。IL-21配體例如抗體與該表位的結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)或干擾Y C經(jīng)由BS2與IL-21的結(jié)合，但不干擾IL-21Ra經(jīng)由BSl與IL-21的結(jié)合。
[0009]我們還描述了 IL-21配體(例如抗體)(其與本發(fā)明的表位特異性結(jié)合，條件是所述配體不是mAbl4和YC)以及制備和使用這類(lèi)配體的方法。我們還描述了 mAb 14與IL-21的結(jié)合如何干擾YC與IL-21的結(jié)合。
[0010]本發(fā)明IL-21配體的獨(dú)特特征是其競(jìng)爭(zhēng)或干擾YC與IL-21結(jié)合的能力，同時(shí)與配體復(fù)合的IL-21將保持有能力結(jié)合IL-21Ra的BS1。因此，本發(fā)明配體將在IL-21存在下形成配體:IL_21復(fù)合物，其具有以高親和力和特異性地結(jié)合存在于細(xì)胞表面的IL-21Ra的能力。
[0011]保持以高親和力經(jīng)由BSl結(jié)合IL-21Ra的能力但具有缺乏與YC相互作用的能力的BS2的IL-21變體將占據(jù)IL-21Ra受體并用作IL_21Ra受體拮抗劑。損害BS2結(jié)合的一種方式是引入一個(gè)或多個(gè)關(guān)鍵涉及與YC相互作用的IL-21殘基的點(diǎn)突變。另一種方式是通過(guò)使BS2配體與IL-21結(jié)合而阻斷BS2。因此，有效阻斷BS2但保持BSl不受影響的IL-21配體，基本上如對(duì)于本發(fā)明的配體所述，在IL-21存在時(shí)預(yù)期充當(dāng)體內(nèi)IL-21Ra受體拮抗劑。
[0012]通常，在治療上使用單克隆抗體以“中和”可溶的靶，例如自身免疫和慢性炎性疾病中的促炎分子。干擾溶液中IL-21分子上BS2的IL21配體的結(jié)合將導(dǎo)致該特定IL-21分子的“中和”。然而，由于所形成的配體:IL_21復(fù)合物獲得拮抗性質(zhì)，其將額外能夠阻斷和“中和”含IL-21Ra的細(xì)胞上一個(gè)IL_21Ra分子的功能。該雙重作用模式，即可溶IL-21的中和以及膜結(jié)合IL-21Ra的阻斷，與干擾IL-21BS1的配體(其中所形成的配體:IL_21復(fù)合物將不會(huì)獲得IL-21Ra拮抗性質(zhì))相比，將潛在地改進(jìn)這樣的BS2阻斷/干擾性IL-21配體的效能。
[0013]本發(fā)明的配體由于組合的中和以及受體阻斷性質(zhì)因而可具有改進(jìn)的效能。
[0014]一般地，本發(fā)明的配體將結(jié)合IL-21并形成配體:IL_21復(fù)合物，其保持有能力的BSl并從而保持以高親和力結(jié)合IL-21Ra的能力。因此，配體:IL_21復(fù)合物能夠結(jié)合IL-21Ra的可溶片段(例如其胞外域)或細(xì)胞表面上存在的膜結(jié)合IL-21Ra。換言之，本發(fā)明的配體可在IL-21存在時(shí)具有特異性結(jié)合含IL-21Ra的細(xì)胞的能力。
[0015]在配體是包含能夠誘導(dǎo)ADCC和/或⑶C的Fe結(jié)構(gòu)域的抗體的情況下，這樣的配體可由于其與含IL-21Ra的細(xì)胞的高親和力和特異性結(jié)合而具有殺傷所述含IL-21Ra的細(xì)胞的能力。
[0016]因此，在另一方面，本發(fā)明的配體，例如包含具有內(nèi)置效應(yīng)子功能的Fe結(jié)構(gòu)域的抗體，可介導(dǎo)其表面上攜帶IL-21Ra的細(xì)胞的特異性消耗。
[0017]已顯示，克羅恩病(⑶)患者腸道中特異性細(xì)胞亞組例如T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的消耗是⑶的目前抗TNF a療法中作用模式的重要組分(MacDonald, NatureMedicine, 16(2010),第1194-1195頁(yè)和其中的參考文獻(xiàn))。因此，特異性炎性細(xì)胞的消耗在一些炎性疾病的治療中可為有利的。
[0018]抗體的效應(yīng)子功能依賴(lài)于同種型并且可通過(guò)本領(lǐng)域已知的若干方法調(diào)節(jié)，包括在Fe結(jié)構(gòu)域中引入突變，這將改變抗體與Fe受體的結(jié)合。本發(fā)明的配體包括具有改進(jìn)的效應(yīng)子功能的此類(lèi)配體。
[0019]結(jié)合本發(fā)明表位的IL-21配體競(jìng)爭(zhēng)或干擾Y C與IL-21的結(jié)合。使用實(shí)驗(yàn)性和同源性建模方法，我們預(yù)測(cè)了 IL-21和Y C之間結(jié)合界面的位置和IL-21中參與相互作用并且因此是IL-21配體的靶的特定氨基酸殘基，所述IL-21配體經(jīng)設(shè)計(jì)以通過(guò)破壞IL-21和Y C之間相互作用而抑制IL-21活性。
[0020]以下IL-21氨基酸或其亞組(參考SEQ ID N01)被具有與mAbl4 (W02010055366中稱(chēng)為抗體366.328.10.63)的那些類(lèi)似的CDR序列的抗體結(jié)合:Glu65、Asp66、Val67、Glu68、Thr69、Asn70、Glu72、Trp73、Lysll7、Hisll8、Argll9、Leul43、Lysl46、Metl47、Hisl49、Gln150和Hi s 151，如本文通過(guò)X-射線(xiàn)晶體學(xué)數(shù)據(jù)所示。
[0021]發(fā)明詳述
[0022]除非另有說(shuō)明，否則本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。除非另有說(shuō)明，否則本發(fā)明的實(shí)踐采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的化學(xué)、生物化學(xué)、生物物理學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)和藥理學(xué)的常規(guī)方法。
[0023]附圖簡(jiǎn)述 [0024]圖1:本文提及的氨基酸序列。
[0025]圖2:顯示成熟IL-21氨基酸序列(SEQ ID NOl的殘基30-162)，其中螺旋A、B、C和D (分別對(duì)應(yīng)于 SEQ ID NOl 的氨基酸 34-50 (SEQ ID N02)、SEQ ID NOl 的氨基酸 72-82 (SEQID N03)、SEQ ID NOl 的氨基酸 93-103 (SEQ ID N04)和 SEQ ID NOl 的氨基酸 133-152 (SEQID N05))以粗體和加下劃線(xiàn)顯示。屬于BS1、BS2和mAbl4及mAb5的表位(分別為表位14和表位5)的殘基在氨基酸序列下面通過(guò)“X”標(biāo)記。在圖中Mab5表位指示為“表位5”。在圖中Mab 14表位指示為“表位14”。
[0026]圖3:通過(guò)質(zhì)譜法監(jiān)測(cè)的HX鑒定出參與mAb結(jié)合的hIL-21的區(qū)域。對(duì)于所有的圖，上面的波譜顯示非氘化對(duì)照，下面的圖顯示氘化對(duì)照，即在不存在mAb下在D2O中孵育30秒后的hIL-21。中間的圖顯示如所示在存在mAb下交換30秒后的肽。
[0027](A)對(duì)應(yīng)于位于螺旋A的肽片段29-44即MQGQDRHMIRMRQLID的質(zhì)/荷譜(Mass/charge spectra) (m/z=676.68, z=3)。mAb5 導(dǎo)致在該區(qū)域的交換保護(hù)。
[0028](B)對(duì)應(yīng)于位于環(huán)和螺旋B的肽片段67-76即VETNCEWSAF的質(zhì)/荷譜(m/z=l 185.49, z=l)。mAbl4導(dǎo)致在該區(qū)域的交換保護(hù)。
[0029](C)對(duì)應(yīng)于位于螺旋C的肽片段93-98即ERIINV的質(zhì)/荷譜(m/z=743.47，z=l)。mAb5導(dǎo)致在該區(qū)域的交換保護(hù)。
[0030](D)對(duì)應(yīng)于位于螺旋 D 的肽片段 138-162 即 ERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 的質(zhì) /荷譜(m/z=738.63，z=4)。mAbl4導(dǎo)致在該區(qū)域的交換保護(hù)。
[0031]圖4:在mAb5或mAbl4不存在或存在時(shí)hIL-21的代表性肽的氫交換時(shí)間曲線(xiàn)。在不存在(黑色菱形，?)或存在mAb5(白色三角，A)或mAbl4(白色圓圈，〇)時(shí)，hIL-21肽的氘摻入(Da)以對(duì)數(shù)標(biāo)度針對(duì)時(shí)間作圖。
[0032]圖5:在mAbl4存在和不存在時(shí)hIL-21的HX分析的肽的序列覆蓋(sequencecoverage)。在HX分析的肽(表示為水平棒)上方顯示原始序列。在mAbl4存在和不存在兩種情況下顯示類(lèi)似交換模式的肽以白色顯示，而在mAbl4結(jié)合時(shí)顯示氘摻入減少的肽著黑色。用框標(biāo)出的序列區(qū)界定表位。
[0033]圖6:不同hIL-21/Fab復(fù)合物的X射線(xiàn)結(jié)構(gòu)中建模的hIL-21殘基。加入Fab35(來(lái)自實(shí)施例1)用于比較。
[0034]圖7:通過(guò)運(yùn)行CCP4程序套件的CONTACT軟件(Bailey, 1994)鑒定的hIL_21上Fab56、Fab57、Fab59和Fab60hIL_21表位的概述?！?’表示Fab片段與hIL_21分子之間的4.0 A的截?cái)嗑嚯x。表示Fab片段與hIL-21分子之間4.0和5.0人之間的距離。[0035]定義
[0036]除非另外明確說(shuō)明，否則IL-21是指人IL-21。IL-21氨基酸序列，包括其信號(hào)序列，示于圖1 (SEQ ID N01)。成熟IL-21多肽對(duì)應(yīng)于SEQ ID NOl的殘基30-162。IL-21的特征在于4個(gè)螺旋區(qū)段，以對(duì)I類(lèi)細(xì)胞因子具有代表性的上-上-下-下的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)排列。IL-21通過(guò)由專(zhuān)用鏈IL-21Ra和YC(后者為IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15共有)組成的異二聚體受體復(fù)合物發(fā)出信號(hào)。IL-21Ra經(jīng)由IL-21上的結(jié)合部位I(BSl)以高親和力結(jié)合IL-21。另一方面，IL-21和Y C之間的相互作用具有相對(duì)低的親和力。IL-21經(jīng)由其結(jié)合部位2(BS2)結(jié)合Y C。需要IL-21與IL-21Ra和Y C兩者結(jié)合用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。因此，對(duì)IL-21Ra具有高親和力并且對(duì)YC沒(méi)有或具有強(qiáng)烈降低的親和力的IL-21變體預(yù)期結(jié)合表達(dá)IL-21R的細(xì)胞表面上的IL-21Ra，從而阻斷胞內(nèi)IL21誘導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
[0037]先前已通過(guò)NMR波譜法測(cè)定了人IL-21的結(jié)構(gòu)(Bondensgaard等J.Biol.Chem.(2007)，282，23326-23336)。游離或與受體鏈復(fù)合的IL-21的晶體結(jié)構(gòu)尚未公布但通過(guò)x射線(xiàn)晶體學(xué)測(cè)定的與其3個(gè)受體鏈復(fù)合的結(jié)構(gòu)相關(guān)IL-2分子(IL-2:1L2Ra:1L-2R^: y C)已經(jīng)公布，并且其坐標(biāo)已儲(chǔ)存在公眾可獲得的數(shù)據(jù)庫(kù)中(蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(Protein DataBank))。
[0038]干擾Y C與IL-21結(jié)合的配體:具有干擾YC與IL-21結(jié)合的能力的本發(fā)明配體在本文中是指結(jié)合IL-21的配體，并且在這種情況下，或直接與Y C競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合IL-21或降低其結(jié)合IL-21的能力/其對(duì)IL-21的親和力。另外所述配體將不會(huì)干擾IL-21Ra與IL-21的結(jié)合。這意味著本發(fā)明的配體可結(jié)合與BS2重疊的表位或位于與BS2足夠近，以提供YC結(jié)合的位阻，從而降低其結(jié)合IL-21的能力至少25%、優(yōu)選至少50%、優(yōu)選至少60%、優(yōu)選至少70%、優(yōu)選至少75%、優(yōu)選至少80%、優(yōu)選至少90%和最優(yōu)選至少95%。繼而可得出，本發(fā)明配體的IL-21上的表位與BSl良好分離，因?yàn)楸景l(fā)明配體的結(jié)合不顯著干擾IL-21R a與IL-21的結(jié)合。干擾Y C結(jié)合可通過(guò)例如實(shí)施例所示的表面等離振子共振(SPR)檢測(cè)。
[0039]本文所用術(shù)語(yǔ)“治療”是指對(duì)有需要的任何人或其它動(dòng)物受試者的醫(yī)學(xué)治療。預(yù)期所述受試者已由醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)從業(yè)人員進(jìn)行了身體檢查，醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)從業(yè)人員已做出了可表明采用所述具體治療有益于所述人或其它動(dòng)物受試者健康的試驗(yàn)性或確定性診斷。根據(jù)受試者的健康現(xiàn)狀，所述治療的時(shí)機(jī)和目的可在個(gè)體與個(gè)體間不同。因此，所述治療可為預(yù)防性、治標(biāo)性的、針對(duì)癥狀的和/或治愈性的。
[0040]就本發(fā)明而言，預(yù)防性、治標(biāo)性、針對(duì)癥狀的和/或治愈性治療可代表本發(fā)明的各個(gè)方面。
[0041]本發(fā)明涉及已在人IL-21上發(fā)現(xiàn)的表位。因此具有該表位的多肽是共有人IL-21的三維結(jié)構(gòu)的至少部分的多肽。多肽的丑段是這樣的多肽，其在C或N端截短，或其具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸從其序列除去。在本發(fā)明的背景下，片段應(yīng)保持足夠的三維結(jié)構(gòu)以限定本發(fā)明表位或互補(bǔ)位。
[0042]根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法針對(duì)結(jié)合活性(或任何其它所需活性)進(jìn)行_，所述方法例如SPR(表面等離振子共振)、FACS、ELISA等。篩選允許根據(jù)所需特性選擇庫(kù)(repertoire)成員。[0043]本文所用“分離的”化合物是從其天然環(huán)境移出的化合物。
[0044]IL-21變體:本發(fā)明的IL-21模擬物/變體包含不連續(xù)表位，所述不連續(xù)表位包含來(lái)自以下IL-21肽區(qū)段的至少2個(gè)的至少一個(gè)氨基酸殘基:SEQ ID Nol中所示的Glu65至Phe73、Lysll7至Argll9和Leul43至Hisl51。所述模擬物/變體可以多種方式產(chǎn)生，其中一種方式是通過(guò)氨基酸插入、取代或缺失對(duì)天然IL-21的突變。插入、取代或缺失可在大小和程度上變化，主要隨著其在分子中的位置而變化。例如，可容忍大的N或C端插入而不改變本發(fā)明的表位，C端缺失亦是如此。在別處，可更好地容忍較小的插入、缺失或取代。
[0045]抗體:本文所稱(chēng)的術(shù)語(yǔ)“抗體”，指源自種系免疫球蛋白序列的多肽。該術(shù)語(yǔ)包括全長(zhǎng)抗體和其任何抗原結(jié)合片段例如Fab片段和其它單價(jià)抗體。本文所用術(shù)語(yǔ)“抗體”、“單克隆抗體”和“mAb”意指有能力與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白分子和其片段。藥學(xué)上特別感興趣的免疫球蛋白亞類(lèi)是屬于IgG家族的那些，其可再細(xì)分成同種型IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。IgG分子由通過(guò)兩個(gè)或若干個(gè)二硫鍵互連的兩個(gè)重鏈與兩個(gè)輕鏈(每個(gè)通過(guò)二硫鍵與每個(gè)重鏈連接)組成。IgG重鏈由四個(gè)Ig-結(jié)構(gòu)域組成，包括可變結(jié)構(gòu)域(VH)和三個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2和CH3)。每個(gè)輕鏈由輕鏈可變區(qū)(VL)和輕鏈恒定區(qū)(CL)組成。重鏈和輕鏈可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。VH和VL區(qū)可再細(xì)分成被稱(chēng)為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的高變區(qū)，其中散布著更加保守的被稱(chēng)為架構(gòu)區(qū)(FR)的區(qū)。每個(gè)VH和VL由三個(gè)⑶R和四個(gè)FR組成，按下列順序從氨基-端至羧基-端排列:FRl、OTRl、FR2、raR2、FR3、CDR3、FR4。
[0046]抗原-結(jié)合片段的實(shí)例包括Fab、Fab’、F (ab) 2、F (ab’)2、F (ab) S、Fv (典型地抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域)、單鏈Fv(scFv ;參見(jiàn)例如Bird等，Sciencel988 ;242:42S_426 ;和Huston 等 PNAS1988 ；85:5879-5883)、dsFv、Fd(典型地 VH 和 CHI 結(jié)構(gòu)域)和 dAb(典型地 VH結(jié)構(gòu)域)片段；VH、VL、VhH和V-NAR結(jié)構(gòu)域；包含單個(gè)VH和單個(gè)VL鏈的單價(jià)分子；小抗體(minibodies)、二抗體(diabodies)、三抗體(triabodies)、四抗體(tetrabodies)和 k 體(kappa body)(參見(jiàn)例如 Ill 等，Protein Engl997 ；10:949-57);胳馬它 IgG ；IgNAR ;以及一種或多種分離的CDR或功能性互補(bǔ)位，其中分離的CDR或抗原結(jié)合殘基或多肽可締合或連接在一起以形成功能性抗體片段。各種類(lèi)型的抗體片段已經(jīng)描述或綜述于，例如Holliger和 Hudson，Nat Biotechnol2005 ；2S, 1126-1136 ;TO2005040219，以及公布的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)20050238646 和 20020161201 中。
[0047]本發(fā)明抗體的Fe結(jié)構(gòu)域可經(jīng)修飾以調(diào)節(jié)某些效應(yīng)子功能例如補(bǔ)體結(jié)合和/或與某些Fe Y受體結(jié)合。Fe結(jié)構(gòu)域可另外經(jīng)調(diào)節(jié)以增加對(duì)新生兒Fe受體(FcRn)的親和力。IgGlFc結(jié)構(gòu)域中位置234、235和237 (根據(jù)EU索引的殘基編號(hào))的突變將通常導(dǎo)致與Fe y RI受體的結(jié)合降低并且可能還導(dǎo)致與Fe Y RIIa和Fe Y RIII受體的結(jié)合降低。這些突變不改變與FcRn受體的結(jié)合，其通過(guò)胞吞再循環(huán)途徑促進(jìn)長(zhǎng)的循環(huán)半衰期。優(yōu)選本發(fā)明抗體的修飾的IgGlFc結(jié)構(gòu)域包含一個(gè)或多個(gè)以下突變，其將分別導(dǎo)致與某些Fe Y受體的親和力降低(L234A、L235E和G237A)和導(dǎo)致Clq-介導(dǎo)的補(bǔ)體結(jié)合降低(A330S和P331S)(根據(jù)EU索引的殘基編號(hào))。或者，F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域可為任選包含S241P/S228P突變的IgG4Fc結(jié)構(gòu)域(S241P表示根據(jù)Kabat的殘基編號(hào)，S228P表示根據(jù)EU編號(hào)系統(tǒng)的殘基編號(hào)(EdelmanG.M.等，Proc.Natl.Acad.USA63, 78-85 (1969)。
[0048]本文所用術(shù)語(yǔ)“ 人抗體”意指具有來(lái)源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可包括例如在CDR中、特別是在CDR3中不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過(guò)體外隨機(jī)誘變或位點(diǎn)特異性誘變或通過(guò)體內(nèi)體細(xì)胞突變引入的突變)。然而，本文所用術(shù)語(yǔ)“人抗體”，并不意指包括這樣的抗體:其中，源自另外的哺乳動(dòng)物物種(例如鼠)的種系的CDR序列已被移植到人構(gòu)架序列上，例如所謂的“人源化抗體”或人/小鼠嵌合抗體。
[0049]術(shù)語(yǔ)“嵌合抗體”或“多個(gè)嵌合抗體”，指這樣的抗體:它的輕鏈和重鏈基因已通常通過(guò)基因工程，由屬于不同物種的免疫球蛋白可變和恒定區(qū)基因而構(gòu)建。例如，可將來(lái)自小鼠單克隆抗體的基因的可變區(qū)段與人恒定區(qū)段連接。
[0050]延長(zhǎng)半衰期的部分:本發(fā)明的配體可經(jīng)修飾以增加其血清半衰期，例如通過(guò)添加分子-例如脂肪酸或脂肪酸衍生物、PEG(聚乙二醇)或其它水溶性聚合物(包括多糖聚合物)以增加循環(huán)半衰期。本文中“延長(zhǎng)基團(tuán)”/ “延長(zhǎng)半衰期的部分”應(yīng)理解為連接到一個(gè)或多個(gè)氨基酸側(cè)鏈官能團(tuán)例如-SH、-0H、-C00H、-C0NH2、-NH2的一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)，或者一個(gè)或多個(gè)N-和/或0-聚糖結(jié)構(gòu)，并且當(dāng)其綴合到這些蛋白質(zhì)/肽時(shí)可增加多種治療性蛋白質(zhì)/肽的體內(nèi)循環(huán)半衰期。延長(zhǎng)基團(tuán)/延長(zhǎng)半衰期的部分的實(shí)例包括但不限于:生物相容性脂肪酸及其衍生物、羥基烷基淀粉(HAS)例如羥基乙基淀粉(HES)、聚乙二醇(PEG)、聚(Glyx-Sery) n (HAP)、透明質(zhì)酸(HA)、Heparosan聚合物(HEP)、基于磷酸膽堿的聚合物(PC聚合物)、Fleximer、葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、Fc結(jié)構(gòu)域、轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白、彈性蛋白樣肽、XTEN聚合物、白蛋白結(jié)合肽、CTP肽及其任何組合。
[0051]分箱/競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合:關(guān)于抗體與其共同抗原同時(shí)結(jié)合的能力，可表征與相同抗原結(jié)合的抗體?？蓪?duì)抗體進(jìn)行“分箱(binning)”，本文中該術(shù)語(yǔ)是指對(duì)與相同抗原結(jié)合的抗體歸類(lèi)的方法?？贵w的“分箱”可基于在根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)例如表面等離振子共振(SPR)、ELISA或流式細(xì)胞術(shù)的測(cè)定法中兩種抗體與其共同抗原的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。
[0052]通過(guò)參比抗體來(lái)定義“箱(bin) ”。如果第二抗體不能在與參比抗體相同的時(shí)間與抗原結(jié)合，則第二抗體被稱(chēng)為屬于與參比抗體相同的“箱”。在這種情況下，參比抗體和第二抗體對(duì)于與抗原結(jié)合是競(jìng)爭(zhēng)性的，因此該對(duì)抗體被稱(chēng)為“競(jìng)爭(zhēng)性抗體”。如果第二抗體能夠在與參比抗體相同的時(shí)間與抗原結(jié)合，則第二抗體被稱(chēng)為屬于單獨(dú)的“箱”。在這種情況下參比抗體和第二抗體對(duì)于與抗原結(jié)合不是競(jìng)爭(zhēng)性的，因此該對(duì)抗體被稱(chēng)為“非競(jìng)爭(zhēng)性抗體”。
[0053]抗體“分箱”不提供有關(guān)表位的直接信息。競(jìng)爭(zhēng)性抗體，即屬于相同“箱”的抗體，可具有相同的表位、重疊表位或甚至各自的表位。后者是這樣的情況:如果與抗原上的其表位結(jié)合的參比抗體占據(jù)第二抗體與其抗原上的表位接觸所需要的空間(“位阻”)。非競(jìng)爭(zhēng)性抗體具有單獨(dú)的表位。
[0054]表位、互補(bǔ)位和抗原:本文所用術(shù)語(yǔ)“表位”，在“抗原結(jié)合分子”，例如抗體(Ab)，與其對(duì)應(yīng)的“抗原”(Ag)之間的分子相互作用的背景下定義。術(shù)語(yǔ)抗原(Ag)可指用于免疫接種具有免疫能力的脊椎動(dòng)物以生產(chǎn)識(shí)別該Ag的抗體(Ab)的分子實(shí)體。本文中，Ag被更廣泛地定義，且通常意指包括被Ab特異性識(shí)別的靶分子，因此包括在免疫接種過(guò)程中用于引發(fā)Ab的分子的片段或模擬物。通常，“表位”指在Ag上的與Ab特異性結(jié)合的區(qū)域或區(qū)，即與Ab物理接觸的區(qū)域或區(qū)。物理接觸可通過(guò)Ab和Ag分子中原子的距離標(biāo)準(zhǔn)(例如4
A的距離截止值)來(lái)定義。[0055]“不連續(xù)表位”是由多肽的兩個(gè)或更多個(gè)區(qū)形成的表位，所述區(qū)在線(xiàn)性肽序列中彼此不相鄰，但在多肽的三維結(jié)構(gòu)中排列形成結(jié)構(gòu)表位。其它形式的表位包括:線(xiàn)性肽表位、構(gòu)象表位(其由兩個(gè)或更多個(gè)在抗原的三維結(jié)構(gòu)中彼此臨近定位的非相鄰氨基酸組成)和翻譯后表位(其整體或部分由與抗原共價(jià)連接的分子結(jié)構(gòu)，例如碳水化合物基團(tuán)組成)。
[0056]對(duì)于給定的抗體(Ab) /抗原(Ag)對(duì)的表位，可使用多種實(shí)驗(yàn)性和計(jì)算性的表位作圖法在不同級(jí)別的細(xì)節(jié)上進(jìn)行定義和表征。實(shí)驗(yàn)性方法包括:誘變、X射線(xiàn)晶體分析法、核磁共振(NMR)波譜法、氫氘交換質(zhì)譜(HX-MS)和本領(lǐng)域已知的方法。因?yàn)槊糠N方法依賴(lài)于獨(dú)特的原理，表位的描述最終與測(cè)定其的方法緊密相關(guān)。因此，取決于采用的表位作圖方法，對(duì)于給定的Ab/Ag對(duì)的表位將進(jìn)行不同描述。
[0057]在其最詳細(xì)的級(jí)別上，用于Ab和Ag間相互作用的表位，可通過(guò)定義存在于Ag-Ab相互作用中的原子接觸的空間坐標(biāo)，以及關(guān)于它們對(duì)結(jié)合熱力學(xué)的相對(duì)貢獻(xiàn)的信息，進(jìn)行描述。在不太詳細(xì)的級(jí)別上，表位可通過(guò)定義Ag和Ab之間的原子接觸的空間坐標(biāo)進(jìn)行描述。在更不詳細(xì)的級(jí)別上，表位可通過(guò)其包含的氨基酸殘基(如通過(guò)特定標(biāo)準(zhǔn)，例如Ab和Ag中的原子間的距離定義)進(jìn)行描述。在更加不詳細(xì)的級(jí)別上，Ag-Ab相互作用可通過(guò)功能，例如通過(guò)與其它Ab的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合和“分箱”，進(jìn)行表征，盡管競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合不提供有關(guān)表位的任何結(jié)構(gòu)信息。
[0058]在通過(guò)Ab (例如Fab片段)和它的Ag之間的復(fù)合物的空間坐標(biāo)定義的X射線(xiàn)衍生的晶體結(jié)構(gòu)的背景下，本文的術(shù)語(yǔ)表位，除非另外指定或上下文矛盾，明確地定義為IL-21殘基，其特征為具有與Ab中的重原子(即非氫原子)的距離在約3.5至約5.0 A例如
4 A之內(nèi)的重原子。
[0059]從在不同級(jí)別的細(xì)節(jié)上獲得表位的描述和定義(依賴(lài)于使用的表位作圖法)這樣的事實(shí)，可得出結(jié)論，即在相同Ag上對(duì)于不同Ab的表位的比較，可類(lèi)似地在不同級(jí)別的細(xì)節(jié)上進(jìn)行。
[0060]在氨基酸級(jí)別上描述的表位，例如由X射線(xiàn)結(jié)構(gòu)測(cè)定的，如果它們包含同一組的氨基酸殘基，則認(rèn)為它們是相同的。如果表位共有至少一個(gè)氨基酸，則認(rèn)為表位是重疊的。如果表位沒(méi)有共有氨基酸殘基，則認(rèn)為表位是單獨(dú)的(唯一的)。
[0061]術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)位”的定義以反向的角度衍生自上文“表位”的定義。因此，術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)位”指在Ab上的與Ag特異性結(jié)合的區(qū)域或區(qū)，即抗體通過(guò)其與Ag物理接觸。
[0062]在通過(guò)Ab (例如Fab片段)和它的Ag之間的復(fù)合物的空間坐標(biāo)定義的X射線(xiàn)衍生的晶體結(jié)構(gòu)的背景下，本文的術(shù)語(yǔ)互補(bǔ)位，除非另外指定或上下文矛盾，明確定義為Ab殘基，其特征為具有與IL-21中的重原子(即非氫原子)距離在約4人(3.5-5.0 A)之內(nèi)的重原子。
[0063]對(duì)于給定的抗體(Ab)/抗原(Ag)對(duì)的表位和互補(bǔ)位可通過(guò)常規(guī)方法描述。例如，可通過(guò)評(píng)價(jià)抗體結(jié)合IL-21不同片段或變體的能力測(cè)定表位的總體位置。使用常規(guī)的方法，還可測(cè)定IL-21內(nèi)與抗體接觸的特異性氨基酸(表位)，和抗體中與IL-21接觸的特異性氨基酸(互補(bǔ)位)。例如，可使Ab和Ag分子組合，并使Ab/Ag復(fù)合物結(jié)晶?？蓽y(cè)定復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，并用于鑒定Ab和Ag之間相互作用的特異性位點(diǎn)。
[0064]經(jīng)由單價(jià)相互作用的兩個(gè)分子(例如，抗體或其片段，和抗原)之間的結(jié)合親和ii，可通過(guò)測(cè)定平衡解離常數(shù)(kd)來(lái)定量測(cè)定。反過(guò)來(lái)，可通過(guò)對(duì)復(fù)合物形成和解離動(dòng)力學(xué)的測(cè)量，例如通過(guò)SPR方法，來(lái)測(cè)定Kd。對(duì)應(yīng)于單價(jià)復(fù)合物締合和解離的速率常數(shù)，被分別稱(chēng)為締合速率常數(shù)ka (或km)和解離速率常數(shù)kd (或kf)。Kd通過(guò)等式KD=kd/ka與ka和kd相聯(lián)系。根據(jù)以上定義，與不同分子相互作用相關(guān)的結(jié)合親和力，例如不同抗體對(duì)于給定的抗原的結(jié)合親和力的比較，可通過(guò)比較各個(gè)抗體/抗原復(fù)合物的Kd值進(jìn)行比較。
[0065]非抗體配體:特異性針對(duì)本發(fā)明表位的配體還可包括抗體模擬物，其包含在分子骨架(例如蛋白質(zhì)或碳水化合物骨架)上構(gòu)建的特異性針對(duì)本文所述表位的一個(gè)或多個(gè)IL-21結(jié)合部分。具有相對(duì)限定的三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)(通常稱(chēng)為蛋白質(zhì)骨架)可用作設(shè)計(jì)抗體模擬物的模板。這些骨架通常含有一個(gè)或多個(gè)適于特異性或隨機(jī)序列變化的區(qū)，并且常常進(jìn)行這樣的序列隨機(jī)化以產(chǎn)生蛋白質(zhì)文庫(kù)，從中可選擇所需產(chǎn)物。例如，抗體模擬物可包含嵌合非-免疫球蛋白結(jié)合多肽，其具有包含免疫球蛋白-樣結(jié)構(gòu)域的骨架并且對(duì)于被母體抗體結(jié)合的配體展示選擇性結(jié)合活性，所述骨架含有具有兩個(gè)或更多個(gè)溶劑暴露的環(huán)，所述環(huán)含有插入每一個(gè)環(huán)中的與母體抗體不同的CDR。已提出非-免疫球蛋白蛋白質(zhì)骨架用于獲得具有新的結(jié)合性質(zhì)的蛋白質(zhì)。
[0066]配體的結(jié)構(gòu):如上所述，本文提及的配體可以是抗體(例如IgG、IgM、IgA、IgE)或其片段(例如Fab、Fv、二硫鍵連接的Fv、scFv、二抗體)，所述片段包含彼此互補(bǔ)并因此可彼此締合形成VH/VL對(duì)的至少一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。它可來(lái)源于天然產(chǎn)生抗體的任何物種，或通過(guò)重組DNA技術(shù)產(chǎn)生；不論分離自血清、B細(xì)胞、雜交瘤、轉(zhuǎn)染瘤、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母還是細(xì)菌。
[0067]治療應(yīng)用:IL_21參與T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，并且已表明促進(jìn)多種炎性細(xì)胞因子。因此，本發(fā)明的配體可用于治療涉及不當(dāng)或不需要的免疫應(yīng)答的疾病(免疫病癥)，例如炎癥、自身免疫、涉及這類(lèi)機(jī)制的病況以及移植物抗宿主病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是自身免疫病和/或炎性疾病。所述自身免疫病和/或炎性疾病的實(shí)例為系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和炎性腸病(IBD)(包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(Crohn’s disease，CD))、多發(fā)性硬化(MS)、硬皮病和I型糖尿病(TlD)及其它疾病和病癥，例如PV(尋常性天皰瘡)、銀屑病、特應(yīng)性皮炎、乳糜瀉、kol、橋本氏甲狀腺炎(hashimoto's thyroiditis)、格雷`夫斯病(graves’ disease)(甲狀腺)、斯耶格倫綜合征(Sjogren’s syndrome)、格-巴綜合征(guillain-barre syndrome)、古德帕斯徹綜合征(goodpasture，s syndrome)、艾迪生病(additon，s disease)、韋格納肉芽腫病(Wegener，sgranulomatosis)、原發(fā)性膽管硬化癥、硬化性膽管炎、自身免疫性肝炎、風(fēng)濕性多肌痛、雷諾現(xiàn)象(paynaud’ s phenomenon)、顳動(dòng)脈炎、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、自身免疫性溶血性貧血、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、貝切特病(behcet’s disease)、原發(fā)性膽汁性肝硬化、眼色素層炎(uveitis)、心肌炎、風(fēng)濕熱、關(guān)節(jié)強(qiáng)硬性脊椎炎、腎小球性腎炎(glomerulenephritis)、結(jié)節(jié)病、皮肌炎、重癥肌無(wú)力、多肌炎、斑禿、I型糖尿病、結(jié)腸炎相關(guān)性腫瘤發(fā)生和白癜風(fēng)(vitilgo)。
[0068]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是SLE、RA或IBD。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是MS。
[0069]本發(fā)明的IL-21配體可與本領(lǐng)域已知的其它藥物組合給予。
[0070]本發(fā)明還包括包含藥學(xué)上可接受的載體和本發(fā)明的多肽/配體/抗體的藥物組合物/制劑以及包含所述組合物的藥盒。本發(fā)明的藥物組合物可呈含水制劑或無(wú)水制劑的形式，所述無(wú)水制劑在給予前在水/水性緩沖液中復(fù)溶。
[0071]包含本發(fā)明的配體/抗體/多肽的藥物組合物可以藍(lán)盒供應(yīng)，藥盒包括裝有本發(fā)明的化合物的容器。治療性多肽可以單劑量或多劑量注射溶液劑的形式或作為將在注射前復(fù)溶的無(wú)菌散劑的形式提供。包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物可適于皮下和/或IV給藥。
[0072]組合治療:本發(fā)明杭體可與一種或多種其它治療劑或制劑共同給予。所述其它劑可意在治療患者的其它癥狀或病況。例如，所述其它劑可為止痛劑、免疫抑制劑或抗炎劑。
[0073]組合給予兩種或更多種藥劑可用多種不同方式實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)實(shí)施方案，抗體和其它藥劑可在單一組合物中一起給予。在另一個(gè)實(shí)施方案，抗體和其它藥劑可在作為組合療法的一部分的各自的組合物中給予。例如，調(diào)節(jié)劑可在其它藥劑給予之前、之后給予或與其它藥劑同時(shí)給予。
[0074]本發(fā)明的抗體/蛋白質(zhì)可連同其它藥物(例如甲氨蝶呤、地塞米松和潑尼松)和/或其它生物藥物一起給予。已經(jīng)在自身免疫中使用的藥劑包括免疫調(diào)節(jié)劑，例如IFNP、Orencia(CTLA4_Ig)、Humira(抗-TNF)、Cimzia(抗-TNF, PEGFab)、Tysabri(A4-整合蛋白 mAb)、Simpon1、Rituxan/MabThera、Actemra/RoActemra、Kineret ;非留體抗炎藥(NSAIDS)，像阿司匹林、布洛芬等；糖皮質(zhì)激素；緩解疾病的抗風(fēng)濕性藥物(DMARD)，像Plaquenil、柳氮磺胺吡唳、甲氨蝶呤等，Copaxone (醋酸glatirimer) ；Gilneya(芬戈莫德(fingolimod));抗 生素,像滅滴靈(Flagyl)、環(huán)丙沙星(Cipro);局部用(皮膚施用)藥物包括局部用皮質(zhì)類(lèi)固醇激素、維生素D類(lèi)似物霜?jiǎng)?Dovonex)、局部用類(lèi)視色素(Tazorac)、保濕劑、局部用免疫調(diào)節(jié)劑(他克莫司和吡美莫司)、煤焦油、地蒽酚等等；Raptiva;Ustekimumab ;光療法，像PUVA、UVB ;CellC印(麥考酚酸嗎乙酯)。
[0075]實(shí)施方案
[0076]以下實(shí)施方案列表代表本發(fā)明實(shí)施方案的實(shí)例，因此不應(yīng)理解為限制本發(fā)明。
[0077]1.1L-21模擬物，包含含有SEQ ID N0.1中所示的以下氨基酸的表位:Glu65、Asp66、Val67 和 Hisl49。
[0078]2.實(shí)施方案I的模擬物，其中所述模擬物的表位還包含SEQ ID NOl中所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Arg40、Lys50、Glul29、Glul35、Glul38、Argl39、Lysl41、Serl42和 Glnl45。
[0079]3.實(shí)施方案I的模擬物，其中所述模擬物的表位還包含以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu68、Thr69、Asn70、Glu72、Trp73、Lysll7、Hisll8、Argll9、Leul43、Lysl46、Metl47、Glnl50 和 Hisl51。
[0080]4.實(shí)施方案1-3中任一個(gè)的模擬物，其中所述模擬物的表位還包含以下氨基酸:Glu68、Thr69、Asn70、Glu72、Trp73、Lysll7、Hisll8、Argll9、Leul43、Lysl46、Metl47、Glnl50 和 Hisl51。
[0081]5.用于選擇結(jié)合IL-21的配體的方法，包括用實(shí)施方案1-4中任一個(gè)的IL-21模擬物篩選一個(gè)或多個(gè)配體文庫(kù)，和分離一種或多種結(jié)合所述表位的配體。
[0082]6.實(shí)施方案1-4中任一個(gè)的IL-21模擬物在選擇與IL-21選擇性結(jié)合的配體中的用途。[0083]7.一種配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，該配體特異性結(jié)合實(shí)施方案1-4中任一個(gè)的IL-21模擬物的表位，條件是所述配體不是:(i)天然存在的共有YC(SEQ ID N0.8)，和不是(ii)單克隆抗體mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。如果所述配體為抗體，則抗體不是單克隆mAbl4抗體。
[0084]8.一種配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，該配體結(jié)合IL-21上的表位，其中所述表位包含SEQ ID N0.1中所示的Arg40-Val67氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)以及Glul29-Hisl49氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，條件是所述配體不是:(i)天然存在的共有Y鏈(SEQ ID N0.8)，和不是(ii)mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。所述配體優(yōu)選包含Glu65-Val67氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)和Glul29_Hisl49氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)。如果配體是抗體，則抗體不是單克隆mAbl4抗體。
[0085]9.結(jié)合IL-21的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體與SEQ ID NOl中所示以下氨基酸中的至少一個(gè)結(jié)合:Arg40、Lys50、Glu65、Asp66、Val67、Glul29、Glul35、Glul38、Argl39、Lysl41、Serl42、Glnl45和Hisl49，條件是所述配體不是:(i)天然存在的共有Y C(SEQ ID N0.8)，和不是(ii)mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ IDN0.7所示。
[0086]10.實(shí)施方案9的配體，其中所述配體與SEQ ID NOl中所示的Arg40、Lys50、Glu65、Asp66、Val67、Glul29、Glul35、Glul38、Argl39、Lysl41、Serl42、Glnl45 和 Hisl49
氨基酸結(jié)合。
[0087]11.結(jié)合IL-21的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體結(jié)合IL_21(SEQID N01)中氨基酸Glu7 2-Ala82的至少一個(gè)，條件是所述配體不是mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。優(yōu)選所述配體結(jié)合氨基酸Glu65_Trp73中的至少一個(gè)，條件是所述配體不是天然存在的共有YC(SEQ ID N0.8)并且不是mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。如果后者配體是抗體，則抗體不是單克隆mAbl4抗體。
[0088]12.實(shí)施方案7-11中任一個(gè)的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體結(jié)合 IL-21(SEQ ID N01)中的氨基酸 Asn70、Glu72 和 Trp73。
[0089]13.實(shí)施方案7-12中任一個(gè)配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體另外結(jié)合SEQ ID NOl中所示的氨基酸Glu65、Asp66和Val67中的一個(gè)或多個(gè)。
[0090]14.實(shí)施方案7-13中任一個(gè)的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體進(jìn)一步結(jié)合SEQ ID NOl中所示的氨基酸Hisl49。
[0091]15.實(shí)施方案7-14中任一個(gè)的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體結(jié)合 SEQ ID NOl 中所示的氨基酸 Glu65、Asp66、Val67 和 Hisl49。
[0092]16.結(jié)合IL-21的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體結(jié)合包含SEQ IDNOl中所示的以下氨基酸中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)的表位:Arg40、Lys50、Glu65、Asp66、Val67、Glul29、Glul35、Glul38、Argl39、Lysl41、Serl42、Glnl45 和 Hisl49，條件是所述配體不是:⑴天然存在的共有Y鏈(SEQ ID N0.8)?，并且不是(ii)mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。優(yōu)選配體結(jié)合SEQ ID NOl中所示的以下氨基酸:Arg40、Lys50、Glu65、Asp66、Val67、Glul29、Glul35、Glul38、Argl39、Lysl41、Serl42、Glnl45 和 Hisl49。[0093]17.實(shí)施方案16的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體結(jié)合包含SEQID NOl 中所示的以下氨基酸的表位:Arg40、Lys50、Glu65、Asp66、Val67、Glul29、Glul35、Glul38、Argl39、Lysl41、Serl42、Glnl45 和 Hisl49。
[0094]18.實(shí)施方案7-15中任一個(gè)的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體結(jié)合包含以下氨基酸中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個(gè)的表位:Glu65、Asp66、Val67、Glu68、Thr69、Asn70、Glu72、Trp73、Lysll7、Hisll8、Argll9、leul43、Lysl46、Metl47、Hisl49、Glnl50 和 Hisl51。
[0095]19.結(jié)合IL-21的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體結(jié)合包含以下氨基酸的表位:Glu65、Asp66、Val67、Glu68、Thr69、Asn70、Glu72、Trp73、Lysll7、Hisll8、Argll9、leul43、Lysl46、Metl47、Hisl49、Glnl50 和 Hisl51，條件是所述配體不是:(i)天然存在的共有Y C(SEQ ID N0.8)，并且不是(ii)mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和 SEQ ID N0.7 所示。
[0096]20.實(shí)施方案7-19中任一個(gè)的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體包含SEQ ID N0.6中所示CDR1、CDR2和CDR3中的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)和SEQ ID N0.7中所示⑶R1、⑶R2和⑶R3中的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)，條件是所述配體不是mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。mAbl4抗體是與W02010/055366中公開(kāi)的抗體相同的抗體，其中通過(guò)雜交瘤克隆號(hào)366.328.10.63命名。
[0097]21.實(shí)施方案7-20中任一個(gè)的配體，其中所述配體優(yōu)選為抗體，其中所述配體干擾IL-21與共有Y C的結(jié)合。
[0098]22.實(shí)施方案7 -21中任一個(gè)的配體，其中所述配體為抗體。所述抗體可為抗體、單克隆抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、單價(jià)抗體、二價(jià)抗體。所述抗體可為這些中任一個(gè)的人或人源化形式。
[0099]23.實(shí)施方案22的配體，其中所述抗體為IgGl抗體。所述配體可備選地為IgG4抗體。
[0100]24.實(shí)施方案22-23中任一個(gè)的配體，其中所述抗體包含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域，其介導(dǎo)抗體效應(yīng)子功能。
[0101]25.實(shí)施方案24的配體，其中所述配體包含具有降低的效應(yīng)子功能的Fe結(jié)構(gòu)域。
[0102]26.實(shí)施方案25的配體，其中所述配體包含IgGlFc結(jié)構(gòu)域，其包含以下突變中的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)，所述突變將分別導(dǎo)致與某些Fe受體的親和力降低(L234A、L235E和G237A)和導(dǎo)致Clq-介導(dǎo)的補(bǔ)體結(jié)合降低(A330S和P331S)(根據(jù)EU索引的殘基編號(hào))。所述配體將保持相對(duì)長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期和顯著降低的效應(yīng)子功能。
[0103]27.實(shí)施方案20的配體，其中所述配體為抗體，其為mAbl4的變體，mAbl4的輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示，其中所述配體包含⑶R序列中的一個(gè)或多個(gè)突變，其中所述突變選自由以下組成的列表中的一個(gè)或多個(gè):A61S(SEQ ID N07)、D62E(SEQ ID N07)、V64I(SEQ ID N07)和K65R(SEQ ID N07)、R24K(SEQ ID N06)、S26T(SEQID N06)、Q27N(SEQ ID N06)、D30E(SEQ ID N06)、S53T(SEQ ID N06)和S56T(SEQ ID N06)。因此這些突變中的每一個(gè)代表單獨(dú)的實(shí)施方案。其任何組合也代表單獨(dú)的實(shí)施方案。
[0104]28.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQ ID N0.1中所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu65、Asp66、Val67、Glu68、Thr69、Asn70、Glu72、Trp73 ；以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Lysll7、Hisll8、Argl 19 ;和以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Leul43、Lysl46、Metl47、Hisl49、Glnl50和Hisl51，條件是所述抗體不是單克隆抗體mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。所述抗體可備選地結(jié)合IL-21上的表位，其中所述表位包含SEQ ID N0.1中所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu65、Asp66、Val67、Glu68、Thr69、Asn70、Glu72、Trp73、Lysll7、Hisll8 和 Argl 19 和以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Leul43、Lysl46、Metl47、Hisl49、Glnl50 和 Hisl51。所述抗體可備選地結(jié)合IL-21上的表位，其中所述表位包含SEQ ID N0.1所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu65、Asp66、Val67、Glu68、Thr69、Asn70、Glu72 和 Trp73 和以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Lysll7、Hisll8 和 Argll9、Leul43、Lysl46、Metl47、Hisl49、Glnl50 和 Hisl51。
[0105]29.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQ ID N0.1中所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu65-Trp73 ;以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Lysll7-Argll9和以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Leul43-Hisl51,條件是所述抗體不是單克隆抗體mAbl4,其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。所述抗體可備選地結(jié)合IL-21上的表位，其中所述表位包含SEQ ID N0.1中所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu65-Trp73和以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Leul43-Hisl51。
[0106]30.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQ ID N0.1中所示的Arg40-Val67氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)和Glul29_Hisl49氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，條件是所述抗體不是mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。
[0107]31.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含IL-21(SEQ ID N0.1)的Glu65-Trp73氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，條件是所述抗體不是mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6 和 SEQ ID N0.7 所示。
[0108]32.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQ ID N0.1中所示的Glu65、Asp66、Val67和Hisl49氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，條件是所述抗體不是mAbl4，其輕鏈和重鏈分別如 SEQ ID N0.6 和 SEQ ID N0.7 所示。
`[0109]33.包含實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體和任選一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物。所述賦形劑/載體為本領(lǐng)域熟知。所述藥物組合物優(yōu)選意在用于IV給藥和/或皮下給藥。
[0110]34.包含實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體的藥盒。
[0111]35.實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體在用作藥物中的用途。
[0112]36.實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體在治療免疫病癥中的用途。
[0113]37.實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體在治療自身免疫疾病中的用途。
[0114]38.實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體在治療SLE中的用途。
[0115]39.實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體在治療RA中的用途。
[0116]40.實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體在治療IBD中的用途。
[0117]41.實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體在治療⑶中的用途。
[0118]42.一種治療免疫病癥的方法，其中所述方法包括給予有其需要的人合適劑量的實(shí)施方案7-32中任一個(gè)的配體/抗體。
[0119]本文提供的mAbl4的Fab片段(Fab35)和IL-21之間的復(fù)合物的詳細(xì)3-維結(jié)構(gòu)知識(shí)，包括其結(jié)合界面，可構(gòu)成合理設(shè)計(jì)具有所需性質(zhì)的相互作用分子的變體的基礎(chǔ)。對(duì)于抗體可期需改進(jìn)的性質(zhì)可為化學(xué)性質(zhì)或物理性質(zhì)，例如溶解度、粘度和穩(wěn)定性?？善谛枵{(diào)節(jié)的其它性質(zhì)為抗體的抗原性質(zhì)及其被抗-抗體結(jié)合的能力。
實(shí)施例
[0120]實(shí)施例1
[0121]IL-21與mAbl4的Fab片段(Fab35)的復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu) [0122]解析了 IL-21與人抗IL-21單克隆抗體mAbl4的Fab片段(Fab35)的復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)，并采用X射線(xiàn)晶體學(xué)精修至1.64 A分辨率。結(jié)果表明，與mAb5的相比，IL-21上的Fab35(代表mAbl4)表位位于IL-21分子的完全不同部分，并且以不同的結(jié)合模式結(jié)合。“mAb5”對(duì)應(yīng)于W02010055366中公開(kāi)的克隆362.78.1.44抗體的IgGl形式，mAb5的Fe區(qū)攜帶L234A、L235E和G237A(降低的Fe受體結(jié)合)和A330S和P331S突變(降低的Clq-介導(dǎo)的補(bǔ)體結(jié)合)。盡管mAb5結(jié)合IL-21上螺旋A和C的表面暴露的面，但Fab35 (mAb14)更多地向四-螺旋束的一端結(jié)合，與暴露的環(huán)相互作用，并且還通過(guò)將色氨酸殘基(重鏈的W102)側(cè)鏈插入螺旋B和D之間而穿透到IL-21分子中，從而使螺旋D的C端部分稍微變形。與mAb5競(jìng)爭(zhēng)IL-21Ra與IL-21的結(jié)合不同，F(xiàn)ab35 (代表mAb 14)將競(jìng)爭(zhēng)YC與IL-21的結(jié)合，并且由于其高結(jié)合親和力，將阻斷YC與IL-21的結(jié)合。因此mAbl4將抑制通過(guò)YC由IL-21介導(dǎo)的生物學(xué)作用。
[0123]所述表位采用Fab35和IL-21之間的復(fù)合物結(jié)構(gòu)來(lái)表征。然而，關(guān)于IL-21上Fab35表位的結(jié)論也適用于IL-21和相應(yīng)完全抗體mAbl4 (由其得到Fab35)之間的相互作用。
[0124]將在IOmM組氨酸緩沖液，pH5.3中的hIL_21(在大腸桿菌(E.coli)中表達(dá)為成熟肽；SEQ ID NO:1的殘基30-162，具有添加的N端甲硫氨酸殘基)和在PBS緩沖液,pH7.4(4 片在 2 升水中，GIBCO 目錄號(hào) 18912-014Invitrogen Corporation)中配制的抗-1L-21Fab35(包含對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0.9的輕鏈和對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0.10的重鏈片段)以1:1的摩爾比混合。復(fù)合物的終濃度為10.3mg/ml。用坐滴(sitting drop)技術(shù)在以1:1 (沉淀劑溶液體積:蛋白質(zhì)溶液體積)比率混合的30%w/vPEG1000和200mM甲酸鎂中使晶體生長(zhǎng)。總的液滴大小為0.2 ill。通過(guò)將3 ill含有75%沉淀劑溶液和25%甘油的冷凍溶液(cryo-溶液)轉(zhuǎn)移到含晶體的液滴中，并允許浸泡約半分鐘，來(lái)制備晶體用于低溫冷凍(cryo-freezing)。然后使晶體在液氮中速凍,并在數(shù)據(jù)收集期間通過(guò)低溫N2氣流保持
在100K溫度下。在MAX-lab，Lund，SWeden在束線(xiàn)BL911-2(1)，收集晶體學(xué)數(shù)據(jù)至1.64 A分辨率。通過(guò)XDS軟件包(2)進(jìn)行數(shù)據(jù)的空間群測(cè)定、積分和標(biāo)定。測(cè)定數(shù)據(jù)的晶胞參數(shù)分別為89.4,65.2, 106.7 A，90。，IlL 57°和90。，空間群為C2。至1.64 A分辨率的R-sym為6.4%，完整性98.2%。應(yīng)用CCP4套件(5)的Phaser軟件程序(3; 4)的分子置換技術(shù)用于結(jié)構(gòu)測(cè)定?？?1L-21Fab9(對(duì)應(yīng)于mAb5)與IL-21的復(fù)合物的X-射線(xiàn)結(jié)構(gòu)(未公布的結(jié)果)用作PHASER軟件的輸入模型。亦獨(dú)立于Fab使用來(lái)自Fab9:1L-21復(fù)合物結(jié)構(gòu)的IL-21分子，作為PHASER軟件的輸入。軟件ARP/wARP(6)隨后用于起始回合的模型建立，接著應(yīng)用CCP4軟件包的軟件程序REFMAC5 (7)和PHENIX軟件包(9)的PHENIX.refine (8)進(jìn)行晶體學(xué)精修，接著應(yīng)用Coot軟件程序(10)進(jìn)行電子密度圖的計(jì)算機(jī)圖形檢查、模型校正和建立。使該步驟循環(huán)直到不可進(jìn)一步顯著改進(jìn)該模型。所有數(shù)據(jù)最終的R和R-free分別為0.179和0.211，模型顯示與理想鍵長(zhǎng)的均方根偏差(RMSD)為0.()22 Ae
[0125]結(jié)果
[0126]Fab35的結(jié)合部位將競(jìng)爭(zhēng)YC與IL-21的結(jié)合，并且由于其高結(jié)合親和力，將阻斷YC與IL-21的結(jié)合。因此其將抑制通過(guò)YC由IL-21介導(dǎo)的生物學(xué)作用。
[0127]通過(guò)CCP4程序套件(5)的軟件程序Areaimol (11; 12)，針對(duì)晶體結(jié)構(gòu)的IL-21/
Fab35分子復(fù)合物計(jì)算成對(duì)相互作用中所排除的面積，分別得到IL-21為1082 A2，抗IL-21為UMl A211計(jì)算IL-21分子和Fab35間的成對(duì)相互作用中所排除的平均面積為
1061 A 氣
[0128]使用抗Fab35和IL-21分子間4,0 A的距離截止值，通過(guò)運(yùn)行CCP4程序套件(5)
的contacts軟件，鑒定出IL-21與Fab35之間的直接接觸。IL_21/Fab35復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的結(jié)果見(jiàn)表1。發(fā)現(xiàn)所得對(duì)Fab35(代表mAbl4)的IL-21表位包含IL-21 (SEQ ID NO:1)的下列殘基:Glu65、Asp66、Val67、Glu68、Thr69、Asn70、Glu72、Trp73、Lysll7、Hisll8、Argll9、Leul43、Lysl46、Metl47、Hisl49、Glnl50 和 Hisl51。
[0129]因此，F(xiàn)ab35 (mAbl4)表位包含螺旋B的N端部分中的殘基(殘基72_73)和螺旋D的C端部分中的殘基(殘基143-151)。此外,在螺旋C之前(proceeding)的環(huán)區(qū)段(殘基65-70)中和在螺旋C和螺旋D之間的環(huán)(殘基117-119)中鑒定出幾個(gè)接觸殘基。該表位與預(yù)測(cè)的YC與IL-21結(jié)合部位具有部分重疊。
[0130]對(duì)IL-21的Fab35(代表mAbl4)互補(bǔ)位包括輕(L)鏈(SEQ ID N0.9，表2)的殘基 Ser31、Asp50、Phe91、Asn92 和 Tyr94 和重(H)鏈(SEQ ID N0.10，表 2)的殘基 Ile28、Ser30、Ser31、Tyr32、Ser33、Thr52、Ser53、Gly54、Ser55、Tyr56、Tyr57、His59、Glu99、ArglOO、GlylOU Trpl02、Glyl03、Tyrl04 和 Tyrl05。對(duì) Fab35 片段 /mAbl4 抗體的表位見(jiàn)圖2。
[0131]表1.通過(guò)CCP4程序軟件包(5)的軟件程序Refmac5 (7)對(duì)IL_21/Fab35復(fù)合物
的觀測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行X射線(xiàn)模型精修的結(jié)果。
[0132]
【權(quán)利要求】
1.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQID N0.1中所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu 65、Asp 66、Val 67、Glu 68、Thr 69、Asn 70、Glu 72、Trp 73 ;以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Lys 117,His 118, Arg 119和以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Leu143、Lys 146, Met 147、His 149、Gln 150和His 151，條件是所述抗體不是單克隆抗體mAbl4，所述mAbl4的輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。
2.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQID N0.1中所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu 65-Trp 73;以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Lys 117-Arg 119和以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Leu 143-His 151,條件是所述抗體不是單克隆抗體mAbl4,所述mAb 14的輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。
3.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQID N0.1中所示的Arg 40-Val67氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)以及Glu 129-His 149氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，條件是所述抗體不是mAbl4，所述mAbl4的輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。
4.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含IL-21(SEQ ID N0.1)中Glu65-Trp 73氨基酸中的一個(gè)或多個(gè),條件是所述抗體不是mAbl4,所述mAbl4的輕鏈和重鏈分別如 SEQ ID N0.6 和 SEQ ID N0.7 所示。
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體結(jié)合SEQID N0.1中所示Glu 65、Asp 66和Val 67中的一個(gè)或多個(gè)。
6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體,其中所述抗體結(jié)合SEQID N0.1中所示的His149。
7.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQID N0.1中所示Glu 65、Asp66、Val 67和His 149氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，條件是所述抗體不是mAbl4，所述mAbl4的輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。
8.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含SEQID N0.1中所示的以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Arg 40,Lys 50,Glu 65、Asp 66,Val 67,Glu 129,Glu 135,Glu 138、Arg 139、Lys 141、Ser 142、Gln 145 和 His 149,條件是所述抗體不是 mAb 14,所述 mAb14的輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。
9.結(jié)合IL-21上的表位的抗體，其中所述表位包含以下氨基酸中的一個(gè)或多個(gè):Glu65、Asp 66,Val 67,Glu 68,Thr 69、Asn 70,Glu 72,Trp 73、Lys 117,His 118,Arg 119、leu 143、Lys 146、Met 147、His 149、Gln 150 和 His 151，條件是所述抗體不是 mAbl4，所述mAbl4的輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示。
10.權(quán)利要求9的抗體，其中所述抗體包含輕鏈和重鏈，所述輕鏈包含SEQID N0.6中所示⑶R1、⑶R2和⑶R3的至少一個(gè)，并且所述重鏈包含SEQ ID N0.7中所示⑶R1、⑶R2和⑶R3的至少一個(gè)。
11.權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體干擾共有YC鏈與IL-21的結(jié)合。
12.權(quán)利要求10的抗體，其中所述抗體是mAbl4的變體，所述mAbl4的輕鏈和重鏈分別如SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示，其中所述抗體包含⑶R序列中的一個(gè)或多個(gè)突變，其中所述突變選自由以下組成的列表中的一個(gè)或多個(gè):A61S (SEQ ID NO 7)、D62E (SEQ IDNO 7)、V64I (SEQ ID NO 7)和 K65R (SEQ ID NO 7)、R24K (SEQ ID NO 6)、S26T (SEQ IDNO 6)、Q27N (SEQ ID NO 6)、D30E (SEQ ID NO 6)、S53T (SEQ ID NO 6)和 S56T (SEQ IDNO 6)。
13.藥物組合物，其包含前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體和任選一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
14.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的抗體在治療免疫病癥中的用途。
15.用于選擇結(jié)合IL-21的配體的方法，其中所述方法包括:用IL-21模擬物篩選一個(gè)或多個(gè)配體文庫(kù)，其中所述IL-21模擬物包含含有SEQ ID N0.1中所示的以下氨基酸的表位:Glu 65、Asp 66、Val 67和His 149 ;和分離一種或多種結(jié)合所述不連續(xù)表位的配體。
【文檔編號(hào)】C07K16/28GK103702721SQ201280037924
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2012年5月31日 優(yōu)先權(quán)日:2011年5月31日
【發(fā)明者】A.斯文斯森, M.D.安德森, J.布雷恩霍特, C.維伯格, H.B.拉斯穆森, B.奧森克羅格 申請(qǐng)人:諾沃—諾迪斯克有限公司