專利名稱：人巨細(xì)胞病毒中和抗體及其應(yīng)用的制作方法
人巨細(xì)胞病毒中和抗體及其應(yīng)用本申請(qǐng)要求于2008年7月16日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No. 61/081，334的優(yōu)先權(quán)， 其所披露的內(nèi)容通過(guò)引用完整地包含于此。
背景技術(shù)：
人巨細(xì)胞病毒(hCMV)是一種廣泛分布的病原體，其可在有免疫抑制的成人中以及在感染胎兒后導(dǎo)致嚴(yán)重的病理，并參與諸如動(dòng)脈粥樣硬化等慢性疾病。hCMV能感染多種細(xì)胞類型，包括成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞和造血細(xì)胞[1]。體外培殖的hCMV減毒株正被開(kāi)發(fā)作為候選疫苗，其已經(jīng)喪失了對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的嗜性，但是仍然保留感染成纖維細(xì)胞的能力[2]。hCMV的細(xì)胞嗜性被認(rèn)為是由兩種病毒糖蛋白復(fù)合物調(diào)控的。糖蛋白如gH、gL 和g0的復(fù)合物似乎是感染成纖維細(xì)胞所需要的，而gH、gL和由UL131-UL128基因編碼的蛋白質(zhì)的復(fù)合物參與內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞的感染[2-8]。超免疫球蛋白已經(jīng)商業(yè)化用于預(yù)防移植相關(guān)的hCMV疾病，并且最近的證據(jù)表明它們對(duì)妊娠的婦女有治療效果[9]。該治療方法受限于低劑量的可以轉(zhuǎn)移的中和抗體，由此，具有高中和能力的人抗體(如人單克隆抗體)的可用性將是非常希望的。盡管一些針對(duì)gH、gB以及UL128和UL130基因產(chǎn)物的抗體已經(jīng)證明具有體外中和活性[7，10，11]，并且一種抗gH的抗體已經(jīng)在臨床實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行了評(píng)估(由于缺乏治療效果而終止)，但迄今為止分離的抗體的中和效價(jià)不高。當(dāng)抗體濃度范圍是0.5-20 μ g/ml時(shí)可以觀察到這些抗體的中和作用。此外，目前的方法通常使用成纖維細(xì)胞作為靶細(xì)胞測(cè)定抗-hCMV抗體的中和效價(jià)。然而，已知hCMV通過(guò)感染其它細(xì)胞類型諸如內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞以及白細(xì)胞也能引起病理。已知的UL128和UL130的抗體顯示極低的中和內(nèi)皮細(xì)胞感染的效價(jià)[7]，并且似乎沒(méi)有任何能夠以高效價(jià)中和非成纖維細(xì)胞靶細(xì)胞感染的單克隆抗體。因此，人們需要能夠以高效價(jià)中和hCMV感染，特別是非成纖維細(xì)胞靶細(xì)胞的hCMV 感染的抗體，以及這些抗體結(jié)合的靶標(biāo)的說(shuō)明。發(fā)明概述本發(fā)明部分程度上是基于能夠以高效價(jià)中和hCMV感染的新抗體以及本發(fā)明的抗體結(jié)合的新抗原表位的發(fā)現(xiàn)。因此，一方面，本發(fā)明包括一種具有中和hCMV的高效價(jià)的抗體以及其抗原結(jié)合片段。在本發(fā)明的一外實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種單克隆抗體，或其抗原結(jié)合片段，其能夠與hCMV UL128蛋白的抗原表位結(jié)合，其中該抗體中和hCMV感染。本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其能夠與由hCMV蛋白gH、gL、UL128和 UL130，hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A，或hCMV蛋白UL130和UL131A形成的抗原表位結(jié)合，其中所述抗體中和hCMV感染。在本發(fā)明的又一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其含有至少一個(gè)與 SEQ ID NOs :188-193，204，205，210，174-177，149，178，65-70，81-86，97-102， 129-134，145-150，113，161-164，1-6,17-22，33-38，49-54 或 114-118 中的任一序列至少有 95%序列同一性的互補(bǔ)決定區(qū)(“⑶R”)序列，其中所述抗體中和hCMV感染。
在本發(fā)明的又一實(shí)施方案中，本發(fā)明包含選自SEQ ID NOs =188,174,65,81,97, 129，145，113，1，17,33 和 49 的重鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :189，204，175，66，82，98，130， 146，161,2,2,18，34，50 和 114 的重鏈 CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs 190，205，210，176,67,83, 99，131，147，162，3，19，35，51和115的重鏈CDR3，其中所述抗體中和hCMV感染。本發(fā)明的又一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含選自SEQ ID N0s:191, 177,68,84,100，132，148，163，4，20，36，52 和 116 的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :192，149， 69,85,101，133，5，21，37，53 和 117 的輕鏈 CDR2 ；和選自 SE Q ID NOs :193，178,70,86,102， 134，150，164，6，22，38，54和118的輕鏈CDR3，其中所述抗體中和hCMV感染。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體含有一包含SEQ ID NO :200所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID N0:201所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :200所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :213所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID N0:208所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :201所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :208所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :213所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :212所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :201所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :212所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :213所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID N0:184所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO 185所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :77所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :78所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :93所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID N0:94所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO: 109所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO 110所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID N0:141所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO: 142所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO: 157所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO 158所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO 170所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID N0:171所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :13所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO 14所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID N0:29所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :30所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :45所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :46所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO 61所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :62所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO: 125所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含 SEQ ID NO 126所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，并且所述抗體中和hCMV感染。在本發(fā)明的進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中和hCMV的臨床分離株對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、視網(wǎng)膜細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞的感染，其中90%中和hCMV所需的抗體濃度是1. 2μ g/ml或更低。 本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中和hCMV的臨床分離株對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、視網(wǎng)膜細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞的感染，其中90%中和hCMV所需的抗體濃度是10 μ g/ml或更低，并且所述抗體不是 MSL-109 或 8F9。
在本發(fā)明的又一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其含有至少一條CDR序列，該CDR序列與 SEQ ID NOs :216_221，232-235，149，236，246-251，278-283， 296-301，312，316-321，332，336-341，352，360，361 或 262-267 中的任一序列具有至少 95% 的序列同一性，其中所述抗體中和hCMV感染。在本發(fā)明的又一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其含有選自 SEQ ID NOs :216，232，246，278，296，316，336，352，360 和 262 的重鏈 CDRl ； 選自 SEQ ID NOs :217，233，247，279，297，312，317，337 和 263 的重鏈 CDR2 ；選自 SEQ ID NOs :218，234， 248，280，298，318，332，338和264的重鏈CDR3，其中所述抗體中和hCMV感染。在本發(fā)明的又一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其含有選自 SEQ ID NOs :219，235，249，281，299，319，339 和 265 的輕鏈CDRl ；選自 SEQ ID NOs 220， 149，250，282，300，320，340 和 266 的輕鏈 CDR2 ；選自 SEQ ID NOs :221，236，251，283，301， 321，341，361和267的輕鏈⑶R3，其中所述抗體中和hCMV感染。在本發(fā)明的再一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體含有一包含SEQ ID NO :228所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :229所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :242所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :243所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :258所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :259所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :290所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :291所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :294所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :291所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :308所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :309所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID N0:314所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO 309所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :328所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :329所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :334所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO 329 所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :348所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :349所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :357所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :291所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含 SEQ ID NO :367所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :368所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :274所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO: 275所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，并且所述抗體中和hCMV感染。本發(fā)明還包括一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其由永生化B細(xì)胞克隆8I21、2C12、 8C15、4m0、llB12、3G16、4H9、6B4、10C6或6L3產(chǎn)生，所述細(xì)胞克隆按照布達(dá)佩斯條約的規(guī)定，于2008年7月9日保藏于高級(jí)生物技術(shù)中心(ABC)，Largo Rossana Benzi 10，16132 熱那亞(意大利)(保藏號(hào)分別是 PD 08005，PD 08007，PD 08006，PD08009, PD 08011，PD 08012,PD 08013,PD 08004,PD 08014，和 PD08010)，以及由永生化 B 細(xì)胞克隆 7H3 產(chǎn)生，該細(xì)胞克隆于2008年7月16日保藏，保藏號(hào)為PD 08017?？寺Fll于2008年7月9日保藏于高級(jí)生物技術(shù)中心(ABC)，Largo Rossana Benzi 10，16132熱那亞(意大利)，保藏號(hào)為 PD 08015?？寺?F4于2008年7月16日保藏于高級(jí)生物技術(shù)中心(ABC)，Largo Rossana Benzi 10，16132熱那亞(意大利)，保藏號(hào)為PD 08016。與上述保藏的永生化B細(xì)胞表達(dá)的那些抗體具有相同氨基酸序列的抗體及其抗原結(jié)合片段也被認(rèn)為屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)。另 一方面，本發(fā)明包括包含編碼能夠中和hCMV感染的本發(fā)明抗體或抗體片段的多核苷酸的核酸分子。又一方面，本發(fā)明包括表達(dá)本發(fā)明抗體的細(xì)胞。再一方面，本發(fā)明包括包含能夠與本發(fā)明抗體結(jié)合的抗原表位的分離或純化的免疫原性多肽。本發(fā)明還包括一種藥物組合物，該藥物組合物包含本發(fā)明抗體或其抗原結(jié)合片段，本發(fā)明的核酸分子，或本發(fā)明的免疫原性多肽，以及一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。本發(fā)明還包括一種藥物組合物，該藥物組合物包含第一抗體或其抗原結(jié)合片段和第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述第一抗體是本發(fā)明的抗體，所述第二抗體是能夠中和 hCMV感染的抗體。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段、本發(fā)明的核酸、本發(fā)明的免疫原性多肽、或本發(fā)明的藥物組合物在(i)制備治療hCMV感染的藥物中、(ii)疫苗中、或(iii)hCMV感染診斷中的應(yīng)用同樣考慮包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。此外，本發(fā)明抗體或其抗原結(jié)合片段通過(guò)核實(shí)所述疫苗的抗原含有正確構(gòu)象的特異性抗原表位來(lái)監(jiān)控抗-hCMV疫苗質(zhì)量的應(yīng)用同樣考慮包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。另一方面，本發(fā)明包括一種能夠特異性結(jié)合本發(fā)明所述任一抗體或其抗原結(jié)合片段的抗原表位，其用于(i)治療，(ii)用于制備治療hCMV感染的藥物，(iii)作為疫苗，或 (iv)篩選能夠中和hCMV感染的配體。


圖1顯示利用不同單克隆抗體(15D8，2C12和8121)對(duì)單個(gè)或不同組合的hCMV UL128、UL130、UL131A、gH和gL基因轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞的染色。圖2顯示交叉競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)，其中首先將轉(zhuǎn)染有hCMV gH(A)或gB(B)基因的HEK293T 細(xì)胞與未標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)抗體孵育，接著用生物素標(biāo)記的抗_gH或抗-gB抗體染色。圖3顯示利用人單克隆抗體15D8以及非競(jìng)爭(zhēng)性抗-UL128小鼠單克隆抗體對(duì)表達(dá)野生型VR1814 UL128基因或泛突變的(pan-mutated) UL128基因的HEK293T細(xì)胞的染色。 泛突變的UL128基因包含用hCMV的其它臨床分離株和試驗(yàn)室株所述的已知突變體替換野生型VR1814序列。發(fā)明詳述本發(fā)明在某種程度上是基于能夠以高效價(jià)中和hCMV感染的新抗體以及本發(fā)明的抗體結(jié)合的新抗原表位的發(fā)現(xiàn)。這些抗體是理想的，因?yàn)閮H需要低濃度就能中和一定量的病毒。這有利于在給藥較低劑量的抗體的情況下獲得較高水平的保護(hù)。因此，一方面，本發(fā)明包括一種具有中和hCMV感染的高效價(jià)的抗體以及其抗原結(jié)合片段。人單克隆抗體和分泌這些抗體的永生化B細(xì)胞克隆也同樣包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“片段”、“抗原結(jié)合片段”以及“抗體片段”可交替使用，是指保留有本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合活性的本發(fā)明抗體的任何片段。示例性的抗體片段包括但不限于，單鏈抗體、Fab、Fab，、F (ab' )2、Fv 或 scFv。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“高效價(jià)”是指本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段中和hCMV感染的IC9tl低于約2 μ g/ml (即90%中和hCMV的臨床分離株所需的抗體濃度為約2 μ g/ml或更低，例如 1. 9,1. 8,1. 75，1. 7,1. 6,1. 5,1. 4,1. 3,1. 25，1. 2,1. 15，1. 1，或 1. 05 μ g/ml 或更低)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段的IC9tl是lyg/ml或更低(即 0. 95，0. 9,0. 85，0. 8,0. 75，0. 7,0. 6,0. 5,0. 4,0. 3,0. 2,0. 1,0. 05，0. 01 μ g/ml 或更低)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段的IC9tl是0. 16 μ g/ml或更低(即0. 15， 0. 125,0. 1,0. 075，0. 05，0. 025，0. 02，0. 015,0. 0125,0. 01，0. 0075,0. 005,0. 004,0. 003， 0. 002 μ g/ml或更低)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體在濃度為0. 016 μ g/ml或更低 (即 0. 015,0. 013,0. 01，0. 008,0. 005,0. 003,0. 002,0. 001,0. 0005 μ g/ml 或更低)時(shí)能夠中和hCMV感染。這就意味著與已知的抗體如MSL-109、8F9或3E3的濃度相比，在體外90% 中和hCMV的臨床分離株僅需要非常低濃度的抗體。效價(jià)可以用本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知的標(biāo)準(zhǔn)中和試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種抗體，例如，一種單克隆抗體或一種人單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠與hCMV UL128蛋白的抗原表位結(jié)合并中和hCMV感染，IC90 為低于約 2 μ g/ml，例如 1. 9，1. 8，1. 75，1. 7，1. 6，1. 5，1. 4，1. 3，1. 25，1. 2，1. 15，1. 1，1. 05， 1,0. 95,0. 9,0. 85,0. 8,0. 75，0. 7,0. 6,0. 5,0. 4,0. 3,0. 2,0. 15,0. 125,0. 1,0. 075,0. 05， 0. 025,0. 02,0. 015,0. 0125,0. 01,0. 0075,0. 005,0. 004,0. 003,0. 002,0. 001,0. 0005 μ g/ ml或更低。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其能夠與hCMV蛋白gH、gL、UL128和UL130形成的抗原表位結(jié)合，并中和hCMV感染，IC9tl為低于約2 μ g/ml, 例如 1. 9，1. 8，1. 75，1. 7，1. 6，1. 5，1. 4，1. 3，1. 25，1. 2，1. 15，1. 1，1. 05，1,0. 95,0. 9,0. 85， 0. 8,0. 75,0. 7,0. 6,0. 5,0. 4,0. 3,0. 2,0. 15，0. 125,0. 1,0. 075,0. 05，0. 025,0. 02，0. 015， 0. 0125,0. 01，0. 0075,0. 005,0. 004,0. 003,0. 002,0. 001,0. 0005 μ g/ml 或更低。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其能夠與hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A形成的抗原表位結(jié)合，并中和hCMV感染，IC9tl為低于約2 μ g/ml, 例如 1. 9，1. 8，1. 75，1. 7，1. 6，1. 5，1. 4，1. 3，1. 25，1. 2，1. 15，1. 1，1. 05，1,0. 95,0. 9,0. 85， 0. 8,0. 75,0. 7,0. 6,0. 5,0. 4,0. 3,0. 2,0. 15，0. 125,0. 1,0. 075,0. 05，0. 025,0. 02，0. 015， 0. 0125,0. 01，0. 0075,0. 005,0. 004,0. 003,0. 002,0. 001,0. 0005 μ g/ml 或更低。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其能夠與hCMV蛋白UL130和UL131A形成的抗原表位結(jié)合，并中和hCMV感染，IC9tl為低于約2μ g/ml，例如 1. 9，1. 8，1. 75，1. 7，1. 6，1. 5，1. 4，1. 3，1. 25，1. 2，1. 15，1. 1，1. 05，1,0. 95，0. 9,0. 85， 0. 8,0. 75，0. 7,0. 6,0. 5,0. 4,0. 3,0. 2,0. 15，0. 125,0. 1,0. 075，0. 05，0. 025,0. 02，0. 015，
0.0125,0. 01,0. 0075,0. 005,0. 004,0. 003,0. 002,0. 001,0. 0005 μ g/ml 或更低。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其能夠與hCMV gH 蛋白的抗原表位結(jié)合并中和hCMV感染，IC9tl為低于約2 μ g/ml，例如1. 9，1. 8，1. 75，1. 7，
1.6，1. 5，1. 4，1. 3，1. 25，1. 2，1. 15，1. 1，1. 05，1,0. 95，0. 9,0. 85，0. 8,0. 75，0. 7,0. 6,0. 5， 0. 4,0. 3,0. 2,0. 15，0. 125,0. 1,0. 075,0. 05，0. 025,0. 02，0. 015,0. 0125,0. 01，0. 0075，
0.005,0. 004,0. 003,0. 002,0. 001,0. 0005 μ g/ml 或更低。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其能夠與hCMV gB 蛋白的抗原 表位結(jié)合并中和hCMV感染，IC9tl為低于約2 μ g/ml，例如1. 9，1. 8，1. 75，1. 7，
1.6，1. 5，1. 4，1. 3，1. 25，1. 2，1. 15，1. 1，1. 05，1,0. 95，0. 9,0. 85，0. 8,0. 75，0. 7,0. 6,0. 5， 0. 4,0. 3,0. 2,0. 15，0. 125,0. 1,0. 075,0. 05，0. 025,0. 02，0. 015,0. 0125,0. 01，0. 0075，0.005，0. 004，0. 003，0. 002，0. 001，0. 0005 μ g/ml 或更低。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其能夠與hCMV蛋白gM和gN形成的抗原表位結(jié)合并中和hCMV感染，IC90為低于約2 μ g/ml，例如1. 9，1. 8，
1.75，1. 7，1. 6，1. 5，1. 4，1. 3，1. 25，1. 2，1. 15，1. 1，1. 05，1,0. 95，0. 9,0. 85,0. 8,0. 75，0. 7， 0. 6,0. 5,0. 4,0. 3,0. 2,0. 15，0. 125,0. 1,0. 075,0. 05，0. 025,0. 02，0. 015，0. 0125,0. 01， 0. 0075,0. 005，0. 004，0. 003，0. 002，0. 001，0. 0005 μ g/ml 或更低。本發(fā)明的抗體本發(fā)明提供了具有中和hCMV的特別高效價(jià)的抗體。本文中所述的“中和抗體”是指能夠阻止、減少、延遲或干擾病原體例如hCMV發(fā)起和/或保持宿主感染的能力的抗體。本發(fā)明的抗體及其抗原結(jié)合片段能夠中和幾種細(xì)胞的hCMV感染。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體中和上皮細(xì)胞、視網(wǎng)膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞的感染。本發(fā)明的抗體也可以中和成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞的hCMV感染。如此處所述，這些抗體在適當(dāng)配制后可以用作預(yù)防或治療劑，或作為診斷工具。本發(fā)明的抗體可以是單克隆抗體、人抗體或重組抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體是單克隆抗體，例如人單克隆抗體。本發(fā)明還提供了本發(fā)明抗體的片段，特別是保留抗體的抗原結(jié)合活性并能中和hCMV感染的片段。盡管說(shuō)明書(shū)，包括權(quán)利要求書(shū)，在某些地方明確提及抗體片段、突變體和/或抗體衍生物，應(yīng)當(dāng)理解術(shù)語(yǔ)“抗體”或“本發(fā)明的抗體” 包括所有種類的抗體，亦即抗體的片段、抗體的突變體和衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體及其抗原結(jié)合片段與一種或多種hCMV蛋白結(jié)合。本發(fā)明的抗體可以與由單種hCMV蛋白或兩種或多種hCMV蛋白組合形成的抗原表位結(jié)合。示例性的hCMV蛋白包括但不限于，病毒基因UL55 (包膜糖蛋白B，“gB”)、UL75 (包膜糖蛋白禮‘、!1”)、皿100(糖蛋白^1”)、皿73(糖蛋白N，“gN”)、UL115(糖蛋白L，“gL”)、 UL74(糖蛋白 0，“g0”)、UL128(糖蛋白 UL128, “UL128”)、UL130 (糖蛋白 UL130, “UL130”) 或UL131A(糖蛋白UL131A，“UL131A”)的產(chǎn)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體與單種 hCMV蛋白形成的抗原表位結(jié)合。在另一實(shí)施方案中，抗體與2、3或多種hCMV蛋白組合形成的抗原表位結(jié)合。在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗體片段，其能夠結(jié)合hCMV 蛋白ULl28的抗原表位，或hCMV蛋白ULl30和ULl3IA形成的抗原表位，或hCMV蛋白ULl28、 UL130和UL131A形成的抗原表位，或hCMV蛋白gH、gL、UL128和UL130形成的抗原表位，或 hCMV蛋白gH的抗原表位，或hCMV蛋白gB的抗原表位，或hCMV蛋白gM和gN形成的抗原表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗體片段，其與UL128的抗原表位結(jié)合。另一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗體片段，其與UL130和UL131A形成的抗原表位結(jié)合。如本文所使用的，UL130和UL131A形成的抗原表位意思是該抗原表位可以是由UL130和UL131A兩種蛋白質(zhì)形成的或也可以由兩種蛋白質(zhì)中的一種形成，其它蛋白質(zhì)的存在是抗體結(jié)合所需的。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗體片段，其與 UL128、UL130和UL131A形成的抗原表位結(jié)合。如本文所使用的，UL128、UL130和UL131A形成的抗原表位意思是該抗原表位可以是由所有三種蛋白質(zhì)(UL128，UL130和UL131A)形成的或也可以是由一種或多種蛋白質(zhì)形成的，其它蛋白質(zhì)的存在是抗體結(jié)合所需的。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗體片段，其與gH、gL、UL128和UL130形成的抗原表位結(jié)合。如本文所使用的，gH、gL、UL128和UL130形成的抗原表位意思是該抗原表位可以是由所有四種蛋白質(zhì)(gH，gL，UL128和UL130)形成的或也可以是由四種蛋白質(zhì)中的一種或多種蛋白質(zhì)形成的，其它蛋白質(zhì)的存在是抗體結(jié)合所需的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種抗體，或其抗體片段，其與gM和gN形成的抗原表位結(jié)合。如本文所使用的，gM和gN 形成的抗原表位意思是該抗原表位可以是由gM和gN兩種蛋白質(zhì)形成的或也可以是由兩種蛋白質(zhì)中的一種形成的，其它蛋白質(zhì)的存在是抗體結(jié)合所需的。本發(fā)明的幾種示例性抗體的重鏈和輕鏈序列已經(jīng)確定，每個(gè)重鏈包含3個(gè)⑶R，并且每個(gè)輕鏈包含3個(gè)⑶R。⑶R氨基酸的位置按照IMGT編號(hào)系統(tǒng)定義[12，13，14]。⑶R、重鏈、輕鏈的序列以及編碼CDR、重鏈、輕鏈的核酸分子的序列公開(kāi)在序列表中。表1提供了本發(fā)明示例性抗體的6個(gè)CDR序列的SEQ ID NO。表2和表3分別提供了本發(fā)明的示例性抗體的重鏈和輕鏈序列的SEQ ID N0，表4提供了編碼抗體的CDR、重鏈和輕鏈的核酸分子序列的 SEQ ID NO。表 1.
權(quán)利要求
1.一種結(jié)合人巨細(xì)胞病毒(hCMV)ULU8蛋白的抗原表位的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體中和hCMV感染。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體，其中90%中和hCMV所需的抗體濃度是1μ g/ml或更低。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體，其中90%中和hCMV所需的抗體濃度是0.1 μ g/ml或更低。
4.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合由hCMV蛋白gH、gL、UL128和UL130，hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A，或hCMV蛋白UL130和UL131A形成的抗原表位，其中所述抗體中和hCMV感染。
5.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一個(gè)與SEQ ID NOs =188-193,204,205, 210，174-177，149，178，65-70，81-86，97-102，129-134，145-150，113，161-164，1-6,17-22， 33-38，49-54，或114-118中的任一序列具有至少95 %序列同一性的互補(bǔ)決定區(qū)(OTR)序列，其中所述抗體中和hCMV感染。
6.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含選自SEQ ID NOs :188,174,65,81,97,129, 145，113，1，17,33 和 49 的重鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :189,204,175，66，82，98，130，146， 161，2，2，18，34，50和114的重鏈00尺2 ；以及選自 SEQ ID NOs :190，205，210，176，67，83，99， 131，147，162，3，19，35，51和115的重鏈CDR3，其中所述抗體中和hCMV感染。
7.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含選自SEQ ID NOs :191,177,68,84,100,132, 148，163，4，20，36，52 和 116 的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs 192，149，69，85，101，133，5，21， 37，53 和 117 的輕鏈 CDR2 ；以及選自 SEQ ID NOs :193，178,70,86,102，134，150，164,6,22, 38，54和118的輕鏈⑶R3，其中所述抗體中和hCMV感染。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的抗體，其包含一重鏈，該重鏈包含SEQID N0:188為 CDRHl，SEQ ID NO :189 為 CDRH2，SEQ ID NO :190 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :188 為 CDRHl， SEQ ID NO :204 為 CDRH2，SEQ ID NO :205 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :188 為 CDRH1，SEQ ID NO 189 為 CDRH2，SEQ ID NO :210 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :174 為 CDRHl，SEQ ID NO :175 為 CDRH2，SEQ ID NO :176 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO 65 為 CDRHl，SEQ ID NO 66 為 CDRH2， SEQ ID NO 67 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :81 為 CDRHl，SEQ ID NO 82 為 CDRH2, SEQ ID NO 83 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO 97 為 CDRHl，SEQ ID NO 98 為 CDRH2, SEQ ID NO 99 為 CDRH3 ； 或 SEQ ID NO :129 為 CDRHl，SEQ ID NO 130 為 CDRH2，SEQ ID NO :131 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO 145 為 CDRHl，SEQ ID NO :146 為 CDRH2，SEQ ID NO :147 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :113 為 CDRHl，SEQ ID NO :161 為 CDRH2, SEQ ID NO :162 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :1 為 CDRHl， SEQ ID NO 2 為 CDRH2，SEQ ID NO 3 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO 17 為 CDRHl，SEQ ID NO 18 為 CDRH2，SEQ ID NO 19 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO 33 為 CDRHl，SEQ ID NO 34 為 CDRH2，SEQ ID NO 35 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO 49 為 CHRHl，SEQ ID NO 50 為 CHRH2, SEQ ID NO 51 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :113 為 CDRHl, SEQ ID NO :114 為 CDRH2, SEQ ID NO :115 為 CDRH3。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8所述的抗體，其包含一輕鏈，該輕鏈包含SEQID而191為^扎1， SEQ ID NO 192 為 CDRL2 ；SEQ ID NO :193 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :177 為 CDRLl，SEQ ID NO 149 為 CDRL2，SEQ ID NO :178 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO 68 為 CDRLl，SEQ ID NO 69 為 CDRL2, SEQ ID NO 70 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO 84 為 CDRLl，SEQ ID NO 85 為 CDRL2，SEQID NO 86 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :100 為 CDRLl，SEQ ID NO :101 為 CDRL2，SEQ ID NO :102 為 CDRL3;或 SEQ ID NO :132 為 CDRLl，SEQ ID NO :133 為 CDRL2，SEQ ID NO 134 為 CDRL3 ； 或 SEQ ID NO :148 為 CDRLl，SEQ ID NO :149 為 CDRL2，SEQ ID NO 150 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO 163 為 CDRLl，SEQ ID NO :149 為 CDRL2 和 SEQ ID NO :164 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO 4 為 CDRLl，SEQ ID NO 5 為 CDRL2 和 SEQ ID NO 6 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO 20 為 CDRLl，SEQ ID NO 21 為 CDRL2, SEQ ID NO 22 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO 36 為 CDRLl，SEQ ID NO 37 為 CDRL2, SEQ ID NO 38 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO 52 為 CDRLl，SEQ ID NO 53 為 CDRL2, SEQ ID NO :54 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :116 為 CDRLl，SEQ ID NO :117 為 CDRL2，SEQ ID NO :118 為 CDRL3。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含與SEQID NOs 200,208,212,184,77,93,109，141，157，170，13,29,45,61 或 125 中的任一序列具有至少 80 %序列同一性的重鏈可變區(qū)。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含與SEQID NOs 201，213，185，78，94，110，142，158，171，14，30，46，62，或 126 中的任一序列具有至少 80% 序列同一性的輕鏈可變區(qū)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含一重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含 SEQ ID NO :200, SEQ ID NO 208, SEQ ID NO :212,SEQ ID NO: 184，SEQ ID NO -Jl, SEQ ID NO :93, SEQ ID NO :109, SEQ ID NO :141, SEQ ID NO :157, SEQ ID NO :170, SEQ ID NO :13, SEQ ID NO :29, SEQ ID NO :45, SEQ ID NO :61，或 SEQ ID NO 125中的任一氨基酸序列；并且所述抗體包含一輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID N0 201，SEQ ID NO :213，SEQ ID NO :185，SEQ ID NO :78，SEQ ID NO :94，SEQ ID NO :110，SEQ ID NO :142, SEQ ID NO :158，SEQ ID NO :171，SEQ ID NO :14，SEQ ID NO :30，SEQ ID NO 46，SEQ ID NO :62，或SEQ ID NO 126中的任一氨基酸序列。
13.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包括一包含SEQ ID NO :200所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO 201所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含 SEQ ID NO :200所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :213所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :208所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID N0: 201所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :208所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :213所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :212所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :201所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :212所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :213所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :184所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :185所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :77所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :78所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :93所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :94所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :109所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :110所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :141所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :142所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :157所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :170所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :171所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO: 13所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID N0:14所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO : 所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :30所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :45所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO 46所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO 61所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :62所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含 SEQ ID NO :125所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :1 所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，其中所述抗體中和hCMV感染。
14.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中和hCMV的臨床分離株對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、 視網(wǎng)膜細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞的感染，其中90%中和 hCMV所需的抗體濃度是1. 2 μ g/ml或更低。
15.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中和hCMV的臨床分離株對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、 視網(wǎng)膜細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞的感染，其中90%中和 hCMV所需的抗體濃度是10 μ g/ml或更低，并且其中所述抗體不是MSL-109或8F9。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體與 hCMV蛋白gH或gB的抗原表位，或hCMV蛋白gM和gN形成的抗原表位結(jié)合。
17.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一個(gè)與SEQ ID NOs :216-221,232-235, 149，236，246-251，278-283，296-301，312，316-321，332，336-341，352，360，361，或 262-267 中的任一序列至少具有95%序列同一性的CDR序列，其中所述抗體中和hCMV感染。
18.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含選自SEQ ID NOs :216，232，246，278，296， 316，336，352，360 和 262 的重鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :217,233, 247，279，297，312，317， 337 和 263 的重鏈 CDR2 ；以及選自 SEQ ID NOs :218，234，248，280，298，318，332，338 和 264 的重鏈⑶R3，其中所述抗體中和hCMV感染。
19.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含選自SEQ ID NOs :219，235，249，281，299， 319，339 和 265 的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :220，149，250，282，300，320，340 和 266 的輕鏈 CDR2 ；以及選自 SEQ ID NOs :221，236，251，283，301，321，341，361 和 267 的輕鏈 CDR3，其中所述抗體中和hCMV感染。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的抗體，其包含一重鏈，該重鏈包含SEQID NO :216為 CDRHl，SEQ ID NO :217 為 CDRH2，SEQ ID NO :218 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :232 為 CDRHl，SEQ ID NO :233 為 CDRH2，SEQ ID NO :234 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :246 為 CDRHl，SEQ ID NO :247 為 CDRH2, SEQ ID NO :248 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :278 為 CDRHl，SEQ ID NO :279 為 CDRH2, SEQ ID NO 280 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :296 為 CDRHl，SEQ ID NO :297 為 CDRH2，SEQ ID NO :298 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :296 為 CDRHl，SEQ ID NO :312 為 CDRH2，SEQ ID NO :298 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :316 為 CDRHl，SEQ ID NO :317 為 CDRH2，SEQ ID NO :318 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :316 為 CDRHl，SEQ ID NO :317 為 CDRH2，和 SEQ ID NO :332 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO 336 為 CDRHl，SEQ ID NO :337 為 CDRH2, SEQ ID NO :338 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :352 為 CDRHl，SEQ ID NO :279 為 CDRH2, SEQ ID NO :280 為 CDRH3 ；或 SEQ ID NO :360 為 CDRHl， SEQ ID NO 279 為 CDRH2，SEQ ID NO :280 為 CDRH3 ；SEQ ID NO :262 為 CDRHl，SEQ ID NO 263 為 CDRH2，SEQ ID NO :264 為 CDRH3。
21.根據(jù)權(quán)利要求18-20任一項(xiàng)所述的抗體，其包含一輕鏈，該輕鏈包括SEQID NO 219 為 CDRLl，SEQ ID NO :220 為 CDRL2, SEQ ID NO :221 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :235 為 CDRLl，SEQ ID NO 149 為 CDRL2，SEQ ID NO :236 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :249 為 CDRLl，SEQ ID NO :250 為 CDRL2，SEQ ID NO :251 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :281 為 CDRLl，SEQ ID NO :282 為 CDRL2, SEQ ID NO :283 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :299 為 CDRLl，SEQ ID NO :300 為 CDRL2, SEQ ID NO 301 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :319 為 CDRLl，SEQ ID NO :320 為 CDRL2，SEQ ID NO 321 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO :339 為 CDRLl，SEQ ID NO :340 為 CDRL2, SEQ ID NO :341 為 CDRL3 ；SEQ ID NO :281 為 CDRLl，SEQ ID NO :282 為 CDRL2，SEQ ID NO :361 為 CDRL3 ；或 SEQ ID NO 265 為 CDRLl，SEQ ID NO :266 為 CDRL2, SEQ ID NO :267 為 CDRL3。
22.根據(jù)權(quán)利要求14-21任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含與SEQID NO 228，242，258，290，294，308，314，328，334，348，357，367 或 274 至少有 80%序列同一性的重鏈可變區(qū)。
23.根據(jù)權(quán)利要求14-21任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其包含與SEQID NO 229，243，259，291,309, 329，349，368或275至少有80%序列同一性的輕鏈可變區(qū)。
24.根據(jù)權(quán)利要求14-21任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含一重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含 SEQ ID NO :228, SEQ ID NO :242，SEQ ID NO :258，SEQ ID NO :290,SEQ ID N0:294，SEQ ID NO 308,SEQ ID N0:314，SEQ ID NO 328,SEQ ID NO :334， SEQ ID NO :348, SEQ ID N0:357，SEQ ID NO :367 或 SEQ ID NO :274 中的任一氨基酸序列； 并且其中所述抗體包含一輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :229, SEQ ID NO :243， SEQ ID NO :259,SEQ ID NO :291,SEQ ID NO 309,SEQ ID NO 329,SEQ ID NO 349,SEQ ID NO 368或SEQ ID NO :275中的任一氨基酸序列。
25.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包括一包含SEQ ID NO :2 所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :2 所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含 SEQ ID NO :242所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :243所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :258所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO: 259所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :290所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :291所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :294所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :291所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :308所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :309所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :314所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :309所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :3 所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :3 所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :334所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :3 所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :348所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :349所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :357所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :291所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :367所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :368所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或一包含SEQ ID NO :274所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和一包含SEQ ID NO :275所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，其中所述抗體中和hCMV感染。
26.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，由永生化B細(xì)胞克隆8I21、2C12、8C15、4m0、llB12、 3G16、4H9、6B4、10C6或6L3產(chǎn)生，所述細(xì)胞克隆按照布達(dá)佩斯條約的規(guī)定，于2008年7月9 日保藏于高級(jí)生物技術(shù)中心(ABC), Largo Rossana Benzi 10，16132熱那亞(意大利)(保藏號(hào)分別為 PD 08005，PD 08007，PD 08006，PD 08009，PD 08011，PD 08012，PD 08013，PD 08004,PD 08014 JPPD 08010)，以及由永生化B細(xì)胞克隆7H3產(chǎn)生，該細(xì)胞克隆于2008年 7月16日保藏，保藏號(hào)為PD 08017。
27.根據(jù)上述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是人抗體、單克隆抗體、單鏈抗體、Fab、Fab，、F (ab ‘ ) 2、Fv或scFv。
28.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其與前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述抗體結(jié)合相同的抗原表位，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段中和hCMV感染。
29.一種抗體，或其抗原結(jié)合片段，其與前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)，其中所述抗體或其抗原片段中和hCMV感染。
30.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其用于治療hCMV感染。
31.含有編碼前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述抗體或抗體片段的多核苷酸的核酸分子。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的核酸分子，所述多核苷酸序列與SEQID NOs 194-199， 206，207，211，202，209，214 ；203，215，179-182，155，183，186，187，71-76，79，80，87-92， 95,96,103-108，111，112，135—140，143，144，151—156，159，160，165—169，172，173,7-12, 15，16，23-28，31，32，39-44，47，48，55-60，63，64，119-124，127，128，222-227，230，231， 237-241，244，245，252-257，260，261，284-289，292，293，295，302-307，310，311，313，315， 322-327，330，331，333，335，342-347，350，351，353-356，358，359，362-364，365，366，369， 370，268-273，276或277中的任一序列至少75%相同。
33.一種細(xì)胞，其表達(dá)權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)所述的抗體。
34.一種分離或純化的免疫原性多肽，其含有與權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)所述抗體結(jié)合的抗原表位。
35.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，權(quán)利要求31或權(quán)利要求32所述的核酸，或權(quán)利要求34所述的免疫原性多肽，以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
36.一種藥物組合物，其包含第一抗體或其抗原結(jié)合片段，和第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述第一抗體是權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)所述的抗體，并且所述第二抗體中和hCMV感染。
37.權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求31或權(quán)利要求32 所述的核酸、權(quán)利要求34所述的免疫原性多肽、或權(quán)利要求35或權(quán)利要求36所述的藥物組合物在⑴制備治療hCMV感染的藥物中、(ii)疫苗中、或(iii)hCMV感染診斷中的應(yīng)用。
38.權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段通過(guò)核實(shí)所述疫苗的抗原含有正確構(gòu)象的特異性抗原表位來(lái)監(jiān)控抗-hCMV疫苗質(zhì)量的應(yīng)用。
39.一種抗原表位，其特異性地與權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合，用于(i)治療，( )制備治療hCMV感染的藥物，(iii)作為疫苗，或(iv)篩選能夠中和hCMV感染的配體。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有中和hCMV的高效價(jià)的中和抗體和其抗體片段，其中所述抗體和抗體片段對(duì)于一個(gè)、或組合的兩個(gè)或更多hCMV基因UL產(chǎn)物是特異性的。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生這些抗體和抗體片段的永生化B細(xì)胞，并且涉及結(jié)合這些抗體和抗體片段的抗原表位。另外，本發(fā)明涉及抗體、抗體片段和抗原表位在篩選方法以及疾病診斷、預(yù)防或治療中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07K16/08GK102203133SQ200980129827
公開(kāi)日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2009年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月16日
發(fā)明者A·蘭扎維奇雅, A·瑪卡格諾 申請(qǐng)人:生物醫(yī)學(xué)研究學(xué)會(huì)