專利名稱：西松烷型二萜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的西松烷型二萜(briarane-type diterpenoid)。
背景技術(shù)：
柳珊瑚中富含二萜和甾醇，據(jù)文獻報道到目前為止已從Junceella屬的柳珊瑚中分離到39個西松烷型二萜[1]，其中有15個西松烷型二萜(包括juncins A～H[2，3]，(+)-gemmacolidesA～B[3]，juncenolides A～D[4，5]and junceellolide C[5])是從燈芯柳珊瑚Junceella juncea中分離得到(參考文獻(1)Sung，P.J.；Guo，H.H.；Fan，T.Y.；et al.Bio.Syst.Ecol.，2004，32(2)，185-196.(2)Isaacs，S.；Carmely，S.；Kashman，Y.J.Nat.Prod，1990，53，596-602.(3)Anjaneyulu，A.S.R.；Rao，N.S.K.J.Chem.Soc.，1997，Perkin Trans 1，959-962.(4)Shen，Y.C.；Lin，Y.C.；Chiang，M.Y.J.Nat.Prod.，2002，65，54-56.(5)Shen，Y.C.；Lin，Y.C.；Ko，C.L.；Wang，L.T.J.Nat.Prod.，2003，66，302-305.)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從柳珊瑚中分離出新的具有藥用價值的西松烷型二萜。
本發(fā)明利用色譜分離技術(shù)從柳珊瑚目鞭柳珊瑚科的燈芯柳珊瑚(Junceella juncea)中分離得到新的西松烷型二萜，且它們均有細胞毒性、抗炎、抗真菌及抗癌作用，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
本發(fā)明新的西松烷型二萜用下述通式(1)表示 其中R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R2＝H，R3＝CH2，R4＝Cl，R5＝OH，R8＝OCOCH2CH(CH3)2，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-16間，其中C-3和C-4間雙鍵為反式構(gòu)型(E)；或R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R3＝CH2，R4＝Cl，R2＝OH，R8＝H，而且C-5和C-16間連有一個雙鍵，C-4和C-8間連有一個氧橋鍵；或R1＝R6＝R8＝OAc，R2＝H，R3＝CH2OH，R4＝H，R5＝OH，R7＝OH，R9＝OH，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-6間，其中C-3和C-4間雙鍵為順式構(gòu)型(Z)。
上述通式(1)中的R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R2＝H，R3＝CH2，R4＝Cl，R5＝OH，R8＝OCOCH2CH(CH3)2，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-16間，其中C-3和C-4間雙鍵為反式構(gòu)型(E)的化合物的化學(xué)名稱為(2β，3E，6α，7α，8α，9β，12α，13α，14α)-6-chloro-11α，20-epoxy-2，8，9，12，13，14-hexahydroxy-3，5(16)-briaradien-18，7-olide-13-isovaleryl-2，9，12，14-tetra-Ac，外觀是白色無定型粉末，下面簡稱化合物1，結(jié)構(gòu)見式(2) 上述通式(1)中的R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R3＝CH2，R4＝Cl，R2＝OH，R8＝H，而且C-5和C-16間連有一個雙鍵，C-4和C-8間連有一個氧橋鍵的化合物的化學(xué)名稱為(2β，4β，6α，7α，9β，12α，14α)-6-chloro-4α(8α)，11α(20)-di-epoxy-2，4，9，12，14-pentahydroxy-5(16)-briaren-18，7-olide-2，9，12，14-tetra-Ac，外觀是白色無定型粉末，下面簡稱化合物2，結(jié)構(gòu)見式(3) 上述通式(1)中的R1＝R6＝R8＝OAc，R2＝H，R3＝CH2OH，R4＝H，R5＝OH，R7＝OH，R9＝OH，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-6間，其中C-3和C-4間雙鍵為順式構(gòu)型(Z)的化合物的化學(xué)名稱為(2β，3Z，7α，8α，9β，12α，13α，14α)-11α，20-epoxy-2，8，9，12，13，14，16-heptahydroxy-3，5(6)-briaradien-18，7-olide-2，9，13-tri-Ac，外觀是白色無定型粉末，下面簡稱化合物3，結(jié)構(gòu)見式(4)
本發(fā)明通式(1)的西松烷型二萜的制備方法是以燈心柳珊瑚為原料，切碎后用乙醇和二氯甲烷的混合有機溶劑提取，將提取液濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶于水，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，濃縮得乙酸乙酯層和正丁醇層；將乙酸乙酯層進行常壓硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)從10∶1到0∶1梯度洗脫，將在TLC(GF254)板上用CHCl3-Me2CO(8∶2)溶劑系統(tǒng)展開時極性最小的點Rf值約為0.7的組分合并，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-Me2CO溶劑系統(tǒng)從11∶1到8∶2按梯度加大極性洗脫，其中用CHCl3-Me2CO(9∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣經(jīng)進一步硅膠柱層析，純化得化合物1；用CHCl3-Me2CO(8∶2)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣再經(jīng)硅膠柱層析，純化得化合物2；正丁醇層經(jīng)大孔樹酯(Diaion HP-20)柱層析，先用H2O沖洗，接著用甲醇沖洗，將甲醇沖洗液濃縮得粗樣，將粗樣經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH溶劑系統(tǒng)按梯度加大極性洗脫，當(dāng)用CHCl3-MeOH(10∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗時純化得化合物3。
通過細胞毒性和其它活性篩選試驗發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述的西松烷型二萜均有細胞毒性、抗炎、抗真菌及抗癌作用。
具體實施例方式
實施例1通式(1)中R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R2＝H，R3＝CH2，R4＝Cl，R5＝OH，R8＝OCOCH2CH(CH3)2，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-16間，其中C-3和C-4間雙鍵為反式構(gòu)型(E)的化合物1的制備以燈心柳珊瑚濕重12公斤為原料，切碎后用乙醇和二氯甲烷的混合有機溶劑提取3次，將提取液合并減壓濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶于水，依次用乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，分別合并減壓濃縮得乙酸乙酯層85克和正丁醇層56克；將乙酸乙酯層進行常壓硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)從10∶1到0∶1梯度洗脫，薄層層析TLC(GF254)追蹤合并得12個組分；將在TLC(GF254)板上用CHCl3-Me2CO(8∶2)溶劑系統(tǒng)展開時極性最小的點Rf值約為0.7的組分合并，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-Me2CO溶劑系統(tǒng)從11∶1到8∶2按梯度加大極性洗脫，其中用CHCl3-Me2CO(9∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣經(jīng)進一步硅膠柱層析，純化得白色無定形粉末化合物1為18mg。
根據(jù)高分辨ESIMS和13C NMR(DEPT)譜，推出化合物1分子式為C33H43ClO14。其紫外光譜在220nm處有強吸收峰，紅外光譜在3542cm-1、1780cm-1、1750cm-1、1732cm-1及1720cm-1處有強吸收峰，這些數(shù)據(jù)表明化合物1中存在一個共軛雙鍵、一個羥基、一個γ-內(nèi)酯及其它酯基。1H和13C(DEPT)NMR譜顯示以下信號四個乙?；?、一個異戊?；鵞δc171.7(s)，42.7(t)，25.0(d)，22.3(2q)]，一個甲基單峰(δH1.28，s)、一個甲基雙峰(δH1.23，d，J＝7.5Hz)、一個γ-內(nèi)酯(δc174.4)、一個環(huán)外11(20)-環(huán)氧化物[δH2.65(d，J＝3Hz)，2.90(d，J＝2Hz)，δc49.3(t)，56.4(s)]、一個雙鍵[δH6.90(d，J＝16Hz)，5.96(dd，J＝10，16Hz)]、一個環(huán)外亞甲基[δH5.34，5.26(each br s)，δC115.2(t)]、一個被氧化的季碳及6個被氧化的次甲基(見表1和2)；這些數(shù)據(jù)表明化合物1是一個類似于化合物gemmacolide B、juncins A～F及junceellolide C的西松烷型二萜。與gemmacolide B的1H和13C NMR譜數(shù)據(jù)相比較，化合物1多了一個雙鍵[δH6.90(d，J＝16Hz)，5.96(dd，J＝10，16Hz)，δC133.4(d)，129.7(d)]，同時在碳譜高場少了兩個亞甲基信號。其HMBC譜表明該雙鍵位于C-3和C-4間。H-3和H-4間較大的偶合常數(shù)(16.0Hz)說明該雙鍵是E構(gòu)型。通過二維HMBC實驗驗證四個乙?；謩e位于C-2、C-9、C-12及C-14上，而異戊酰基位于C-13上。其NOESY譜顯示以下相關(guān)點Me-15與H-13、H-14、H-20及C-9位上乙?；募谆嚓P(guān)，H-20與H-12相關(guān)，H-6與C-9位上乙?；募谆嚓P(guān)，H-7與H-17相關(guān)，這些數(shù)據(jù)表明H-7、H-17、H-20、H-13、H-12，H-14及Me-15均是β-構(gòu)型；H-2與H-10相關(guān)，H-9與H-10相關(guān)，Me-19與H-9、H-10相關(guān)，這表明H-2、H-9、H-10及Me-19均是α-構(gòu)型。基于以上的數(shù)據(jù)分析，將化合物1的結(jié)構(gòu)定為通式(1)，其中R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R2＝H，R3＝CH2，R4＝Cl，R5＝OH，R8＝OCOCH2CH(CH3)2，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-16間，其中C-3和C-4間雙鍵為反式構(gòu)型(E)，化學(xué)名稱為(2β，3E，6α，7α，8α，9β，12α，13α，14α)-6-chloro-11α，20-epoxy-2，8，9，12，13，14-hexahydroxy-3，5(16)-briaradien-18，7-olide-13-isovaleryl-2，9，12，14-tetra-Ac。結(jié)構(gòu)式見式(2)。
實施例2上述通式(1)中R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R3＝CH2，R4＝Cl，R2＝OH，R8＝H，而且C-5和C-16間連有一個雙鍵，C-4和C-8間連有一個氧橋鍵的化合物2的制備如實施例1方法中將在TLC(GF254)板上用CHCl3-Me2CO(8∶2)溶劑系統(tǒng)展開時極性最小的點Rf值約為0.7的組分合并，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-Me2CO溶劑系統(tǒng)從11∶1到8∶2按梯度加大極性洗脫，用CHCl3-Me2CO(8∶2)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣再經(jīng)硅膠柱層析，純化得白色無定形粉末化合物2為16mg。
其ESIMS譜在m/z615[M+H]+處顯示準(zhǔn)分子離子峰，結(jié)合高分辨ESIMS和13C(DEPT)NMR譜，推出其分子式為C28H35ClO13。其紅外光譜在1790cm-1處有強吸收峰，表明存在一個γ-內(nèi)酯；另外在3542cm-1也有強吸收峰，用D2O交換時氫譜中的δH6.58信號消失，說明化合物2中有一個羥基，加之13C NMR譜中出現(xiàn)的一個典型的半縮酮季碳信號δC97.4，推測該羥基是半縮酮的一部分?；衔?的1H和13C NMR譜與化合物1相似，但也有一些明顯的差別?；衔?的1H和13C(DEPT)NMR譜中多了一個半縮酮季碳(δC97.4)和兩個高場的亞甲基[δC40.5，28.8，δH3.41(dd，J＝7.7，16.3Hz)，1.60(d，J＝16.3Hz)，2.00(dt，J＝16.3，2.5Hz)，2.31(dt，J＝16.3，2.50Hz)]信號，但少了一個雙鍵、一個被氧化的次甲基及一個異戊酰基(見表1和2)。在HMBC譜中，δC97.4與H-2(δH5.44，d，J＝7.5Hz)相關(guān)，-OH(δH6.58)與H-16(δH5.65，5.93，each br s)相關(guān)，故將δC97.4歸屬為C-4；另外C-4與H-17(δH2.76，q，7.0)間較弱的W型相關(guān)點暗示C-4和C-8間連有一個醚鍵。C-4為半縮酮季碳且通過醚鍵和C-8相連，這種連結(jié)在海洋西松烷型二萜中是少見的。通過二維HMBC實驗，歸屬四個乙酰基分別位C-2、C-9、C-12及C-14上。其NOESY譜顯示以下相關(guān)點Me-15與H-3b、H-14、H2O及C-9位上乙酰基的甲基相關(guān)，H-20與H-12相關(guān)，H-3b與H-6、4-OH相關(guān)，H-7與H-17相關(guān)，這些數(shù)據(jù)表明H-7、H-17、H-20、OH-4、H-12、H-14及Me-15均為β-構(gòu)型；另外H-2與H-10相關(guān)，H-9與H-10相關(guān)，Me-19與H-10相關(guān)，這表明H-2、H-9、H-10及Me-19均為α-構(gòu)型?；谝陨系臄?shù)據(jù)分析，故將化合物2的結(jié)構(gòu)定為通式(1)，其中R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R3＝CH2，R4＝Cl，R2＝OH，R8＝H，而且C-5和C-16間連有一個雙鍵，C-4和C-8間連有一個氧橋鍵，化學(xué)名稱為(2β，4β，6α，7α，9β，12α，14α)-6-chloro-4α(8α)，11α(20)-di-epoxy-2，4，9，12，14-pentahydroxy-5(16)-briaren-18，7-o1ide-2，9，12，14-tetra-Ac。結(jié)構(gòu)見式(3)。
實施例3通式(1)中R1＝R6＝R8＝OAc，R2＝H，R3＝CH2OH，R4＝H，R5＝OH，R7＝OH，R9＝OH，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-6間，其中C-3和C-4間雙鍵為順式構(gòu)型(Z)的化合物3的制備如實施例1方法中的正丁醇層(56克)經(jīng)大孔樹酯(Diaion HP-20)柱層析，先用H2O沖洗，接著用甲醇沖洗，將甲醇沖洗液減壓濃縮得粗樣35g，將粗樣經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH溶劑系統(tǒng)按梯度加大極性洗脫，當(dāng)用CHCl3-MeOH(10∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗時純化得白色無定形粉末化合物3為26mg。
根據(jù)其ESIMS和13C(DEPT)NMR譜推斷其分子式為C26H34O13。IR和UV光譜顯示羥基(3480cm-1)、γ-內(nèi)酯(1779cm-1)、酯基(1743cm-1)和共軛雙鍵(274nm)的存在。將化合物3的1H和13C NMR譜與化合物1相比較，發(fā)現(xiàn)兩者相似，但也可以明顯的看出化合物3中少了一個氯原子和一個環(huán)外亞甲基。這些基團被一個三取代烯[δH6.53(d，J＝8.3Hz)，δC121.6(d)，147.0(s)]和一個被氧化的亞甲基[δH4.63，5.44(each d，J＝16.3Hz)，δC63.0(t)]所替代?；衔?的1H和13C(DEPT)NMR譜顯示三個乙?；?，它們分別位于C-2、C-9、C-13上；和化合物1相比，C-12和C-14上的?；涣u基替代?；衔?的相對立體構(gòu)型通過NOESY譜確定。NOESY譜顯示以下相關(guān)點Me-15和H-13、H-14、H-20相關(guān)，H-13與H-12相關(guān)，H-7與H-17、H-14相關(guān)，這些數(shù)據(jù)表明H-7、H-17、H-20、H-13、H-12、H-14及Me-15是β-構(gòu)型；H-2與H-10相關(guān)，H-9與H-10相關(guān)，Me-19與H-9、H-10相關(guān)，這表明H-2、H-9、H-10及Me-19是α-構(gòu)型?；谝陨系臄?shù)據(jù)，將化合物3的結(jié)構(gòu)定為通式(1)，其中R1＝R6＝R8＝OAc，R2＝H，R3＝CH2OH，R4＝H，R5＝OH，R7＝OH，R9＝OH，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-6間，C-3和C-4間雙鍵為順式構(gòu)型(Z)，化學(xué)名稱為(2β，3Z，7α，8α，9β，12α，13α，14α)-11α，20-epoxy-2，8，9，12，13，14，16-heptahydroxy-3，5(6)-briaradien-18，7-olide-2，9，13-tri-Ac。結(jié)構(gòu)見式(4)。
表1化合物1～3的碳譜數(shù)據(jù)*

*化合物1～3的碳譜都是以四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)在125MHz的核磁共振儀上測定，其中化合物1和2溶于氘代氯仿，化合物3溶于氘代吡啶，化學(xué)位移以ppm為單位。
表2化合物1～3的氫譜數(shù)據(jù)*

*化合物1～3的氫譜都是以四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)在500MHz的核磁共振儀上測定，其中化合物1和2溶于氘代氯仿，化合物3溶于氘代吡啶，化學(xué)位移以ppm為單位，偶合常數(shù)J以Hz為單位。
權(quán)利要求
1.下述通式(1)化合物 其中R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R2＝H，R3＝CH2，R4＝Cl，R5＝OH，R8＝OCOCH2CH(CH3)2，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-16間，其中C-3和C-4間雙鍵為反式構(gòu)型(E)；或R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R3＝CH2，R4＝Cl，R2＝OH，R8＝H，而且C-5和C-16間連有一個雙鍵，C-4和C-8間連有一個氧橋鍵；或R1＝R6＝R8＝OAc，R2＝H，R3＝CH2OH，R4＝H，R5＝OH，R7＝OH，R9＝OH，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-6間，其中C-3和C-4間雙鍵為順式構(gòu)型(Z)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R2＝H，R3＝CH2，R4＝Cl，R5＝OH，R8＝OCOCH2CH(CH3)2，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-16間，其中C-3和C-4間雙鍵為反式構(gòu)型(E)，由下述式(2)表示
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1＝R6＝R7＝R9＝OAc，R3＝CH2，R4＝Cl，R2＝OH，R8＝H，而且C-5和C-16間連有一個雙鍵，C-4和C-8間連有一個氧橋鍵，由下述式(3)表示
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1＝R6＝R8＝OAc，R2＝H，R3＝CH2OH，R4＝H，R5＝OH，R7＝OH，R9＝OH，而且有兩個雙鍵分別位于C-3和C-4、C-5和C-6間，其中C-3和C-4間雙鍵為順式構(gòu)型(Z)，由下述式(4)表示
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的通式(1)西松烷型二萜，其中R
文檔編號C07D303/00GK1715281SQ20041002758
公開日2006年1月4日 申請日期2004年6月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月14日
發(fā)明者漆淑華, 張偲 申請人:中國科學(xué)院南海海洋研究所