專利名稱：一株防治香蕉枯萎病的細(xì)菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一株防治香蕉枯萎病的細(xì)菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
粉蕉是香蕉的雜交栽培種，因其果型小、外型美、果皮金黃、皮薄肉白、口感嫩滑甜蜜、清香、營(yíng)養(yǎng)豐富等特點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者喜愛。近十年來，粉蕉種植得到快速發(fā)展。目前，廣西、廣東和海南的粉蕉種植面積分別在5000、500和200公頃左右。由于枯萎病危害，粉蕉的規(guī)?；N植不僅受到嚴(yán)重制約，而且需要輪作。由古巴尖鐮孢菌[Fusarium oxysporumf.sp.cubense (E.F.Simth) Snyder et Hansen]引起的香蕉枯萎病(也稱巴拿馬病)是一種毀滅性的土傳真菌病害，自1910年巴拿馬香蕉枯萎病大爆發(fā)至今，已給南美、非洲和亞洲的各主要香蕉種植國(guó)造成慘重?fù)p失。古巴尖鐮孢菌有4個(gè)生理小種，其中，對(duì)香蕉危害性最大的是1號(hào)和4號(hào)小種，均危害粉蕉。國(guó)內(nèi)外對(duì)香蕉枯萎病的防治技術(shù)作了大量研究，涉及化學(xué)防治、間作/輪作、抗病品種培育和生物防治等多個(gè)方面。由于香蕉枯萎病是土傳維管束病害，病原菌從根、莖基部侵入后在維管束中侵染蔓延，所以化學(xué)防治技術(shù)幾乎是無效的(NelB,ViljoenA, Steinberg C，et al.Evaluation of chem ical substances for themamagement and control ofFusarium wilt of banana[A].1n Claudine Picq, AnneVezina Eds20d Intern ationalsymposium on Fusarium wilt on banana Brazil[C].Salvador de Bahia, 2003.)。韭菜與巴西香蕉輪作可顯著降低枯萎病發(fā)生率(黃永紅，李春雨，左存武，等.韭菜對(duì)巴西香蕉枯萎病發(fā)生的抑制作用.中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2011，27 (3):344-348).室內(nèi)試驗(yàn)表明，韭菜葉片提取液對(duì)巴西香蕉和廣粉1號(hào)粉蕉的枯萎病防控效果在75%左右(黃永紅，李春雨，魏岳榮，等.韭菜對(duì)香蕉枯萎病菌的拮抗及其對(duì)盆栽香蕉枯萎病發(fā)生的抑制作用.浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，23 ￠):1162-1166)。香蕉抗枯萎病品種培育主要采用組培苗變異選擇和毒素篩選兩種方式。但是，選育出的抗性品種往往在產(chǎn)量和品質(zhì)等方面都不理想(黃秉智，唐小浪，許林兵，等.香蕉抗枯萎病品種抗枯5號(hào)引種試驗(yàn).中國(guó)果樹，2009，6:17-19)。至今，香蕉抗枯萎病轉(zhuǎn)基因育種尚未開始。因此，用綠色環(huán)保的生物防治方法來控制香蕉枯萎病越來越受到人們的重視(鐘群有，鄭卓輝，彭增明，等.香蕉枯萎病生物防治研究概述.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，7:64-65)。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)香蕉枯萎病生物防治的研究剛剛起步，主要集中在對(duì)香蕉枯萎病4號(hào)小種拮抗菌的篩選、室內(nèi)防治或短期田間試驗(yàn)方面。這些拮抗菌涉及木霉菌(ThandaveluR, Palaniswami A, Doraiswamy S，et al.The effect of Pseudomonasfluorescens andFusarium oxysporumf.sp.cubense oninduction of defenceenzymesandphenolics inbanana.Biol PI ant arum, 2003, 46 (1): 107-110)、青霉菌(王宇光,盧娟，孫建波，等.一株拮抗香蕉枯萎病的青霉菌的分離及鑒定.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27 (04):178-182)、放線菌(茹祥，曾濤，莫坤聯(lián)，等.海南吊羅山原始林區(qū)抗香蕉枯萎病土壤放線菌的分離及田間防治效果試驗(yàn).中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012,28(13):97-102)、芽孢桿菌(付業(yè)勤，張科立，潘羨心，等.內(nèi)生拮抗細(xì)菌BEB2的分子鑒定及其對(duì)香蕉枯萎病菌的抑制作用.熱帶作物學(xué)報(bào)，2009，30
(I):80-85)、鏈霉菌(林梅，張紹升.鏈霉菌F-1013蝦殼粉發(fā)酵液對(duì)3種植物病原真菌的抑制作用.福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2010，39 (6):584-589)和假單孢桿菌(鐘小燕，梁妙芬，甄錫壯，等.假單胞菌對(duì)香蕉枯萎病菌的抑制作用.植物保護(hù)，2009，35 (I)86-89)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株防治香蕉枯萎病的細(xì)菌及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的細(xì)菌具體為芽孢桿菌(Bacillus sp.)Bsp.6。該菌株已于2012年8月17日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱06110:，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào))，保藏編號(hào)為CGMCC N0.6459。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種菌劑。本發(fā)明所提供的菌劑的活性成分為所述芽孢桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6CGMCCN0.6459。具體的，所述菌劑為將所述芽孢桿菌(Bacillus sp.)Bsp.6CGMCC N0.6459接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到菌體濃度為3X 104-4.5X 105cfu/mL的菌液；所述菌液的使用過程中，可根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行稀釋，調(diào)整使用濃度。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述菌劑具體為含有
3.8X 105cfu/mL 所述芽抱桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6CGMCC N0.6459 的菌液。所述培養(yǎng)基可由如下配比的原料制成:黃豆粉(黃豆籽粒粉末)、距離地面0.5-1.5米(如1.0米)的香蕉假莖、蔗糖和水的配比為5g:10g:20g:1L。進(jìn)一步，所述培養(yǎng)基可由黃豆粉濾液、香蕉組織液、所述蔗糖和所述水按照IOOmL:IOOmL:20g:800mL 的配比混合而成，pH 為 7.0-7.2 (如 pH7.0)。所述黃豆粉濾液的制備方法具體可包括如下步驟:將所述黃豆粉與所述水按照Ig:30mL至Ig:400mL的比例混合，煮沸后過濾，獲得所述黃豆粉濾液；所述煮沸的持續(xù)時(shí)間為 20-60min。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述黃豆粉與所述水的比例具體為Ig =IOOmL ;所述煮沸的持續(xù)時(shí)間具體為20min。所述香蕉組織液的制備方法具體可包括如下步驟:將所述香蕉假莖與所述水按照Ig =IOOmL至Ig:25mL的比例混合，煮沸后過濾，獲得所述香蕉組織液；所述煮沸的持續(xù)時(shí)間為 20-40min。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述香蕉假莖與所述水的比例具體為Ig:50mL ;所述煮沸的持續(xù)時(shí)間具體為20min。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述培養(yǎng)基的制備方法具體包括如下步驟:A)所述黃豆粉濾液的制備:稱所述黃豆粉5g，加入到500mL所述水(蒸餾水)中，煮沸20分鐘后過濾，獲得所述黃豆粉濾液(約IOOmL)；B)所述香蕉組織液的制備:取距離地面I米左右的所述香蕉假莖20g，加所述水IOOOmL,煮沸20分鐘后過濾，獲得濾液即為所述香蕉組織液(約200mL)。C)將IOOmL步驟A)獲得的所述黃豆粉濾液、IOOmL步驟B)獲得的所述香蕉組織液和20g蔗糖混合后，調(diào)整pH至7，加蒸餾水800mL，即獲得所述培養(yǎng)基。
所述芽孢桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6CGMCC N0.6459，或所述的菌劑在下述a)或
b)中應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍:a)抑制枯萎病菌；b)防治植物枯萎病。在上述應(yīng)用中，所述枯萎病菌具體可為古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporumf.sp.cubense);所述枯萎病具體可為由古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporumf.sp.cubense)所引起的枯萎??； 所述古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense)具體可為古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) I號(hào)小種和/或古巴尖鍵抱菌(Fusantanoxysporum f.sp.cubense)4號(hào)小種；所述植物可為香蕉,具體如粉蕉,更加具體如粉蕉品種廣粉I號(hào)。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種利用所述菌劑防治香蕉枯萎病的方法。本發(fā)明所提供的利用所述菌劑防治香蕉枯萎病的方法具體可包括如下(I)和(2)的步驟:(I)在香蕉組培苗定植后抽出第I片新葉、第2-3片新葉、第4-5片新葉和第6_7片新葉這四個(gè)時(shí)期各施用I次所述菌劑；所述施用的濃度如下:四次所述施用的濃度均為所述菌劑濃度的1/5-1/10，如1/10 (即將所述菌劑進(jìn)行10倍稀釋)；所述施用的劑量如下:前三次所述施用的劑量為60_80g/株，如60g，第四次所述施用的劑量為100g-200g/株(如150g/株)；所述施用的方式如下:四次所述施用的方式均為根部灌施；(2)在香蕉苗定植大田后，待80%_90%所述香蕉苗抽出新葉后I周內(nèi)，開始施用所述菌劑，直至80%-90%所述香蕉苗抽蕾后I周為止；所述施用的頻率為如下(a)和(b):(a)自80%_90%所述香蕉苗抽出新葉時(shí)起，至所述香蕉苗定植大田滿3個(gè)月時(shí)止，平均每月施用I次所述菌劑；(b)自所述香蕉苗定植大田第4個(gè)月時(shí)起，至80%_90%所述香蕉苗抽蕾后I周時(shí)止，平均每?jī)蓚€(gè)月施用I次所述菌劑；所述施用的濃度如下:所述(a)和(b)中的每次所述施用的濃度均為所述菌劑濃度的1/5-1/10，如1/10 (即將所述菌劑進(jìn)行10倍稀釋)；所述施用的劑量如下:所述(a)中的每次所述施用的劑量均為400g_600g/株(如500g/株)；所述(13)中的每次所述施用的劑量均為800g-1200g/株(如IOOOg/株)。所述施用的方式如下:所述(a)中的第一次所述施用的方式為根部灌施；所述(a)中的第二次及以后所述施用，和所述(b)中的每次施用的方式均為環(huán)狀布施；所述環(huán)狀布施為在所述香蕉中部葉片外緣垂 直對(duì)應(yīng)的土壤部分施用所述菌劑。在上述方法中，步驟(I)中在香蕉組培苗定植后抽出第4-5片新葉時(shí)施用所述菌齊IJ(即第三次施用)前在距離膠杯外緣Icm處傷根I圈。在上述方法中，所述枯萎病可為由古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporumf.sp.cubense)所引起的枯萎??；所述古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense)具體可為古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) I號(hào)小種和/或古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) 4號(hào)小種；所述香蕉具體可為粉蕉，更加具體的可為粉蕉品種廣粉I號(hào)。在上述方法中，所述菌劑濃度的1/5-1/10為將所述菌劑原液進(jìn)行5-10倍稀釋。本發(fā)明所提供的芽孢桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6CGMCC N0.6459能夠同時(shí)抑制古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) I號(hào)和4號(hào)小種。以所述芽孢桿菌(Bacillus sp.)Bsp.6CGMCC N0.6459為活性成分的菌劑能夠防控粉蕉枯萎病，其大田防控效果達(dá)95%左右。本發(fā)明所提供的芽孢桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6CGMCC N0.6459及其菌劑對(duì)于粉蕉枯萎病具有顯著的防控效果，這將很大程度上促進(jìn)香蕉種植業(yè)的快速發(fā)展。保藏說明菌種名稱:芽孢桿菌
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拉丁名:(Bacillussp.)菌株編號(hào):Bsp.6保藏機(jī)構(gòu):中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏機(jī)構(gòu)簡(jiǎn)稱:CGMCC地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)保藏日期:2012年8月17日保藏中心登記入冊(cè)編號(hào):CGMCC N0.6459


圖1為菌株Bsp.6的對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果。其中，A為古巴尖鐮孢菌(Fusantanoxysporumf.sp.cubense)l 號(hào)小種；B為菌株Bsp.6 與古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporumf.sp.cubense)l 號(hào)小種的對(duì)峙；C 為古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense)4號(hào)小種；D為菌株Bsp.6與古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) I號(hào)小種的對(duì)峙。圖2為芽孢桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6CGMCC N0.6459抑菌活性的檢測(cè)結(jié)果。其中，1-6分別表示組1-組6。圖3為芽孢桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6CGMCC N0.6459對(duì)香蕉枯萎病防治效果盆栽試驗(yàn)結(jié)果(植株存活率統(tǒng)計(jì))。其中，1-6分別表示組1-組6。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。菌株:芽孢桿菌(Bacillus sp.) BEB2，即內(nèi)生細(xì)菌BEB2或內(nèi)生拮抗細(xì)菌BEB2:記載于“付業(yè)勤.香蕉內(nèi)生細(xì)菌BEB2菌株對(duì)香蕉枯萎病的防治作用研究.海南大學(xué)碩士學(xué)位論文，2008” 一文，以及“付業(yè)勤，張科立，潘羨心等.內(nèi)生拮抗細(xì)菌BEB2的分子鑒定及其對(duì)香蕉枯萎病的抑制作用.熱帶作物學(xué)報(bào)，2009年01期”一文中，公眾可從中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院
?？趯?shí)驗(yàn)站獲得。古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) I號(hào)小種和古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) 4號(hào)小種，即香蕉枯萎病菌I號(hào)和4號(hào)生理小種:記載在“曹永軍，程萍，喻國(guó)輝等.香蕉枯萎病菌I號(hào)和4號(hào)生理小種在幾種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性.熱帶作物學(xué)報(bào)，2010年第08期” 一文中，公眾可從中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院海口實(shí)驗(yàn)
站獲得。培養(yǎng)基:NA培養(yǎng)基:牛肉 浸膏3g,酵母浸膏Ig,蛋白胨5g,葡萄糖IOg,瓊脂15g,蒸懼水IOOOmL, pH7.0。PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂20g，水1000mL，pH自然(約6.0)。NB液體培養(yǎng)基:牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，蒸餾水lOOOmL，pH7.2。菌株母液培養(yǎng)基:牛肉浸膏3g,香蕉組織液100-200mL,蛋白胨5g,蒸懼水定容至IOOOmL, pH7.0。擴(kuò)大培養(yǎng)菌液培養(yǎng)基:黃豆粉2-10g，加200_400mL水，煮沸20_60分鐘后過濾，取其濾液IOOmL,香蕉組織液100-200mL，蔗糖20g_40，pH值7，加蒸餾水至1000mL。其中，所述香蕉組織液的制備方法如下:取距離地面0.5-1.5米左右的香蕉假莖10-40g，加水IOOOmL,煮沸20-40分鐘，過濾，保存濾液，即為香蕉組織液。實(shí)施例1、芽孢桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6的分離與鑒定一、芽抱桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6 的分離1、采用組織分離法，獲取植物組織中的菌株從中國(guó)海南健康的大田粉蕉植株體上采集距地表10-15cm的根(直徑0.2-0.5cm)l-2g，用自來水沖洗10-30min，再依次用體積百分比為70%的乙醇和質(zhì)量百分比為3.25%的次氯酸鈉消毒Imin和3min,然后用無菌水漂洗3次。將根置于研缽中,加無菌水充分研磨。靜置15min后，吸上清液，進(jìn)行ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—3梯度稀釋。各取100 μ L稀釋液，涂布于NA培養(yǎng)基平板，對(duì)照涂布100 μ L的第3次無菌水漂洗液。28°C培養(yǎng)3_5天后，挑取形態(tài)完整、差異明顯的單菌落，在NA培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，獲得不同類型菌株。2、抗性菌株分離( I)香蕉枯萎病病原菌劃線培養(yǎng)取2個(gè)PDA培養(yǎng)基平板,分別劃線接種古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporumf.sp.cubense) I 號(hào)小種和古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) 4 號(hào)小種，28°C，培養(yǎng)3-5天。(2)不同類型菌株劃線培養(yǎng)將步驟I得到的不同類型菌株分別劃線接種于PDA培養(yǎng)基平板，28°C，培養(yǎng)1_2天。( 3)對(duì)崎頭驗(yàn)檢測(cè)抑囷效果從步驟(2)中培養(yǎng)分離得到的每個(gè)菌株的平板中挑取單菌落，分別劃線接種在兩個(gè)新的PDA培養(yǎng)基平板的一側(cè)邊緣，在相對(duì)應(yīng)的另一側(cè)放置邊長(zhǎng)3_含有病原菌菌絲的膠塊(即兩平板之一放置來自于步驟(I)中接種了古巴尖鐮孢菌(Fusantanoxysporum f.sp.CUbenSe)l號(hào)小種培養(yǎng)后的PDA培養(yǎng)基膠塊，兩平板中的另一放置來自于步驟(I)中接種了古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense)4號(hào)小種培養(yǎng)后的PDA培養(yǎng)基膠塊)，蓋上蓋子，用保鮮膜封口，放入28°C條件下培養(yǎng)5至7天，得到對(duì)枯萎病菌-古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense)l 號(hào)小種和古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense)4號(hào)小種均有較強(qiáng)抑制作用的菌株,將其中一個(gè)菌株記作Bsp6。菌株Bsp6的對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。二、芽孢桿菌(Bacillus sp.) Bsp.6 的鑒定從以下幾個(gè)方面鑒定步驟一分離得到的菌株Bsp.6:1、形態(tài)學(xué)鑒定對(duì)于處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌株Bsp.6，經(jīng)涂片染色后采用光學(xué)顯微鏡觀察，其主要形態(tài)特征為:大小為(0.5 Ι.Ομπι) X (1.5 2.3μπι)，淺黃白色，不透明，濕潤(rùn)、菌體表面有褶皺，邊緣不規(guī)則。2、生理生化特征分析采用常規(guī)生理生化鑒定方法對(duì)菌株Bsp.6進(jìn)行鑒定，結(jié)果如表I。表1菌株Bsp.6的生理生化特征
權(quán)利要求
1.孢桿菌(Bacillussp.) Bsp.6,它在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏編號(hào)為CGMCC N0.6459。
2.劑，它的活性成分為權(quán)利要求1所述的芽孢桿菌(Bacillussp.)Bsp.6CGMCCN0.6459。
3.據(jù)權(quán)利要求2所述的菌劑，其特征在于:所述菌劑為將所述芽孢桿菌(Bacillussp.) Bsp.6CGMCC N0.6459接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到菌體濃度為3X 104-4.5X 105cfu/mL 的菌液； 所述培養(yǎng)基由如下原料制成:黃豆粉、距離地面0.5-1.5米的香蕉假莖、蔗糖和水的配比為 5g:10g:20g:1L。
4.據(jù)權(quán)利要求3所述的菌劑，其特征在于:所述培養(yǎng)基由黃豆粉濾液、香蕉組織液、所述蔗糖和所述水按照IOOmL:100mL:20g:800mL的配比混合，pH為7.(Γ7.2。
5.據(jù)權(quán)利要求4所述的菌劑，其特征在于:所述黃豆粉濾液的制備方法包括如下步驟:將所述黃豆粉與所述水按照Ig:30mL至Ig:400mL的比例混合而成，煮沸后過濾，獲得所述黃豆粉濾液； 所述香蕉組織液的制備方法包括如下步驟:將所述香蕉假莖與所述水按照Ig =IOOmL至Ig:25mL的比例混合，煮沸后過濾，獲得所述香蕉組織液。
6.利要求1所述的芽孢桿菌(Bacillussp.)Bsp.6CGMCC N0.6459，或權(quán)利要求2-5中任一所述的菌劑在下述a)或b)中應(yīng)用: a)抑制枯萎病菌； b)防治植物枯萎病。
7.據(jù)權(quán)利要求6所述應(yīng)用，其特征在于:所述枯萎病菌為古巴尖鐮孢菌(Fusantanoxysporum f.sp.cubense);所述枯萎病為由古巴尖鍵抱菌(Fusantanoxysporum f.sp.cubense)所引起的枯萎?。凰鲋参餅橄憬?。
8.用權(quán)利要求2-5中任一所述的菌劑防治香蕉枯萎病的方法，包括如下步驟: (1)在香蕉組培苗定植后抽出第I片新葉、第2-3片新葉、第4-5片新葉和第6-7片新葉這四個(gè)時(shí)期各施用I次所述菌劑； 所述施用的濃度如下:四次所述施用的濃度均為所述菌劑濃度的1/5-1/10 ； 所述施用的劑量如下:前三次所述施用的劑量為60-80g/株，第四次所述施用的劑量為 IOOg 200g/ 株； 所述施用的方式如下:四次所述施用的方式均為根部灌施； (2)在香蕉苗定植大田后，待80%-90%所述香蕉苗抽出新葉后I周內(nèi)，開始施用所述菌齊U，直至80%-90%所述香蕉苗抽蕾后I周為止； 所述施用的頻率為如下(a)和(b): Ca)自80%-90%所述香蕉苗抽出新葉時(shí)起，至所述香蕉苗定植大田3個(gè)月時(shí)止，平均每月施用I次所述菌劑； (b)自所述香蕉苗定植大田4個(gè)月時(shí)起，至80%-90%所述香蕉苗抽蕾后I周時(shí)止，平均每?jī)蓚€(gè)月施用I次所述菌劑； 所述施用的濃度如下 :所述(a)和(b)中的每次所述施用的濃度均為所述菌劑濃度的1/5-1/10 ；所述施用的劑量如下:所述(a)中的每次所述施用的劑量均為400g飛OOg/株；所述(b)中的每次所述施用的劑量均為IOOOg/株； 所述施用的方式如下:所述(a)中的第一次所述施用的方式為根部灌施；所述(a)中的第二次及以后所述施用，和所述(b)中的每次所述施用的方式均為環(huán)狀布施；所述環(huán)狀布施為在所述香蕉中部葉片外緣垂直對(duì)應(yīng)的土壤部分施用所述菌劑。
9.據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于:所述枯萎病為由古巴尖鐮孢菌(Fusantanoxysporum f.sp.cubense)所引起的枯萎?。凰鲋参餅橄憬?。
10.據(jù)權(quán)利要求7所述 的應(yīng)用，或權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于:所述古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense)為古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporumf.sp.cubense) I 號(hào)小種和 / 或古巴尖鍵抱菌(Fusantan oxysporum f.sp.cubense) 4 號(hào)小種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株防治香蕉枯萎病的細(xì)菌及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的細(xì)菌具體為芽孢桿菌(Bacillus sp.)Bsp.6，它在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏編號(hào)為CGMCC No.6459。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所提供的芽孢桿菌(Bacillus sp.)Bsp.6CGMCC No.6459能夠同時(shí)抑制古巴尖鐮孢菌(Fusantan oxysporumf．sp．cubense)1號(hào)和4號(hào)小種。以所述芽孢桿菌(Bacillus sp.)Bsp.6CGMCC No.6459為活性成分的菌劑能夠防控粉蕉枯萎病，其大田防控效果達(dá)95%左右；本發(fā)明所提供的芽孢桿菌(Bacillus sp.)Bsp.6CGMCC No.6459及其菌劑對(duì)于粉蕉枯萎病具有顯著的防控效果，這將很大程度上促進(jìn)香蕉種植業(yè)的快速發(fā)展。
文檔編號(hào)A01P3/00GK103087956SQ20131002304
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月22日
發(fā)明者付業(yè)勤, 王必尊, 龍自梅, 金志強(qiáng) 申請(qǐng)人:海南業(yè)勤香蕉產(chǎn)業(yè)技術(shù)開發(fā)有限公司, 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院海口實(shí)驗(yàn)站