一種帶正電荷的防脫復合柔性脂質(zhì)體及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種帶正電荷的防脫復合柔性脂質(zhì)體及其制備方法。其中防脫發(fā)組合物包括下列重量份數(shù)的組份：亞油酸0.1～10份、鹽酸小檗堿5～30份、甘草酸5～30份、谷胱甘肽2～15份、植物鞘氨醇0.01～5份、苦參堿1～40份、茶多酚1～25份。本發(fā)明通過研究機理明確的針對雄激素源性脫發(fā)的多靶點配方，得到上述防脫發(fā)組合物，并將其制備成帶有正電荷的復合脂質(zhì)體，從而提高其在劑型上的靈活應用，增加制劑在頭皮的吸附和對毛囊的深入滲透。該制劑多靶點的復合作用，也可有效抑制脫發(fā)的進一步發(fā)展，并促進新毛發(fā)的生長。
【專利說明】
一種帶正電荷的防脫復合柔性脂質(zhì)體及其制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及具體涉及一種帶正電荷的防脫復合柔性脂質(zhì)體及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 雄激素源性脫發(fā)(androgenetic alopecia，AGA)，又名男性型脫發(fā)(male pattern alopeCia，MPA)，是皮膚科常見、多發(fā)病，其病因復雜。盡管患者無明顯自覺癥狀，但因影響 美觀而迫切要求治療。近年來的研究表明，AGA的發(fā)生除了先天遺傳因素外，針對雄激素源 性脫發(fā)的四個主要靶點包括：
[0003] 1)雄激素轉(zhuǎn)換酶的活性:雄激素（睪酮)是成年人體內(nèi)循環(huán)所常見的激素，對于雄 激素源性脫發(fā)患者而言，其毛囊及毛囊周邊有高活性的5α_還原酶表達，該酶可催化睪酮轉(zhuǎn) 化為活性更高的二氫睪酮，后者與毛囊的雄激素受體發(fā)生結(jié)合，從而導致毛乳頭萎縮，與毛 囊外部連通的皮脂腺腺體分泌旺盛而產(chǎn)生大量的脂質(zhì)，也導致毛發(fā)的生長周期從生長期 (Anagen)更多轉(zhuǎn)換為退行期（Catagen)和休止期（Telogen)。
[0004] 2)雄激素受體(AR):雄激素源性脫發(fā)患者的毛囊雄激素受體在身體各部位的分布 和表達強度是不一致的，AR最多分布且高表達于頭部的前額部位和頭頂部位，枕部則分布 較少并表達強度低，同時軀干毛囊和臉部胡須的AR也少且表達。因此雄激素源性脫發(fā)患者 最后發(fā)展的脫發(fā)形態(tài)是前額和頭頂部脫發(fā)，而頭部枕部、面頰胡須和軀干的毛發(fā)都不受影 響。
[0005] 3)微生物感染:已有研究確認參與雄激素源性脫發(fā)的模式微生物包括處于頭皮表 面的葡萄球菌(細菌）、糠秕馬拉色菌(真菌)和位于皮脂腺內(nèi)部的痤瘡丙酸桿菌(厭氧性細 菌）。這些模式微生物參與了毛囊和頭皮的炎癥作用，因此制劑中的成分抑制模式微生物生 長可以減緩雄激素源性脫發(fā)的發(fā)生。
[0006] 4)毛囊的氧化作用:現(xiàn)已有例證認為，脫發(fā)的發(fā)生是毛囊的一個加速氧化過程。
[0007] 雖然目前針對雄激素原性脫發(fā)有大量的中草藥提取物或復方的專利或論文，在臨 床上也采取了很多復方治療措施，但這些專利及復方往往來自于以往傳統(tǒng)中醫(yī)驗方，對于 雄激素源性脫發(fā)涉及的多種因素，這些中草藥復方乃至其提取物的作用機理往往不明，甚 至復方中某些單方的提取物起到了反向的生物學的作用，更不能說能針對脫發(fā)的多個靶點 起到作用。
[0008] 其次，即便某些研究針對上述提到的多種作用靶點，為了使得乙醇提取的復方提 取物有效溶解，制劑往往使用酊劑的形式，其中含有大量的醇類物質(zhì)如乙醇、丙二醇等，當 大量的醇類物質(zhì)施用在頭皮上，對頭皮會產(chǎn)生刺激性甚至潛在的過敏作用（如某些人群對 比例較大的丙二醇有過敏癥狀）。同時，只制作成防脫酊劑的制劑形式，也限制了該類產(chǎn)品 在各種不同劑型中（如凝膠劑、育發(fā)精華和洗發(fā)香波等)的應用。
[0009] 再次，大部分的防脫產(chǎn)品僅使用普通的單成分或復方提取物，由于頭皮皮膚的透 過性能受到制劑的影響，很難有效滲透進入頭皮，更難以到達毛囊深處發(fā)揮生物學作用。
[0010] 最后，即便有極少量的防脫產(chǎn)品進一步加工，并用到脂質(zhì)體或柔性脂質(zhì)體等納米 體系。因其普通納米體系并無專門在制作過程中帶上正電荷，因此比較難吸附在帶負電荷 的人體頭發(fā)和頭皮上，從而降低了制劑吸附的幾率，也降低了透過頭皮深入毛囊作用靶點 的幾率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的目的在于提供一種防脫發(fā)組合物、帶正電荷的防脫復合柔性脂質(zhì)體及其 制備方法。
[0012] 本發(fā)明所采取的技術方案是：
[0013] 一種防脫發(fā)組合物，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸6~30份、鹽酸小檗堿0.5~ 1 〇份、甘草酸1~15份、谷胱甘肽2~15份、植物鞘氨醇5~50份、苦參堿1~30份、茶多酸1~ 18份。
[0014]優(yōu)選的，所述防脫發(fā)組合物，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸6~25份、鹽酸小檗 堿0.5~8份、甘草酸1~10份、谷胱甘肽2~12份、植物鞘氨醇5~40份、苦參堿1~25份、茶多 酌！~15份。
[0015] 優(yōu)選的，所述防脫發(fā)組合物，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸6~20份、鹽酸小檗 堿0.5~7份、甘草酸1~8份、谷胱甘肽2~10份、植物鞘氨醇5~30份、苦參堿1~20份、茶多 酸1~10份。
[0016] 一種帶正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體，包括下列重量份的組分：100-500份中性磷 脂，0.5-500份帶正電荷磷脂，1-1000份膽固醇、0.5-500份表面活性劑、0.5-250份防脫發(fā)組 合物、400-8000份的冷凍干燥保護劑，其中防脫發(fā)組合物如上任一項所述。
[0017]優(yōu)選的，所述帶正電荷復合柔性脂質(zhì)體，包括下列重量份的組分：100-300份中性 磷脂、0.5-200份帶正電荷磷脂、15-250份膽固醇、10-200份表面活性劑、20-200份防脫發(fā)組 合物、400-7000份的冷凍干燥保護劑，其中防脫發(fā)組合物如上任一項所述。
[0018]優(yōu)選的，防脫發(fā)組合物中亞油酸、植物鞘氨醇的有效成分為其醇提物，鹽酸小檗 堿、甘草酸、谷胱甘肽、苦參堿、茶多酚的有效成分為其水提物。
[0019]優(yōu)選的，帶正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體的Zeta電位范圍為0_70mV。
[0020] 優(yōu)選的，帶正電荷柔性脂質(zhì)體粒徑范圍為20-90nm。
[0021]優(yōu)選的，中性磷脂選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二 肉豆蔻磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺中的至少一種，帶正電荷 磷脂選自硬脂酰胺、3β-[Ν-(Ν'，Ν'_二甲基乙胺）胺基甲?；鵠膽固醇、N-[l-(2,3-二油酰 基)丙基]-N，N，N-三乙胺氯、2,3_二油酰氧-N-[2-(精氨酸基酰胺）乙基]-N，N-二甲基-1-丙 基-三氟乙酸胺、1，2_二油酰氧丙基-N，N，N-三甲基溴化銨脂質(zhì)中的至少一種;表面活性劑 為膽酸鈉或去氧膽酸鈉;冷凍干燥保護劑選自蔗糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖中的至少一種。 [0022] 一種帶正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體的制備方法，包括下列步驟：
[0023] 1)將中性磷脂、帶正電荷磷脂、膽固醇、防脫組合物的醇提物在30~36°C水浴條件 下溶解于揮發(fā)性有機溶劑中；
[0024] 2)將表面活性劑、防脫組合物的水提物在30~36°C水浴條件下溶解于緩沖液中；
[0025] 3)將步驟1)和2)的溶液混合，用普通均質(zhì)機在12000rpm條件下常壓均質(zhì)I-IOmin， 次數(shù)為2-5次，得乳濁液；
[0026] 4)將步驟3)所得的乳濁液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至形成脂質(zhì)體混懸液；
[0027] 5)將步驟4)所得的脂質(zhì)體混懸液在-80°C~_196°C的條件下冷凍20-200S，在30- 36 °C條件下解凍，重復此步驟5-6次；
[0028] 6)將步驟5)所得的脂質(zhì)體混懸液在1200ba的壓力下高壓均質(zhì)2-10次，得柔性脂質(zhì) 體溶液；
[0029] 7)將步驟6)得到的脂質(zhì)體溶液，采用離心法除去未成功包裹的活性物，得脂質(zhì)體 混懸液；
[0030] 8)在步驟7)得到的脂質(zhì)體混懸液中，加入脂質(zhì)體混懸液3-8倍重量的凍干保護劑， 于-40°C預凍12小時以上，再置于冷凍干燥機凍干，制備得到帶正電荷防脫復合柔性脂質(zhì) 體。
[0031 ]本發(fā)明的制備方法采用了薄膜蒸發(fā)-反復凍融-高壓均質(zhì)-冷凍干燥法，制備方法 中在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)之前采用了普通均質(zhì)法，得到更加均一穩(wěn)定的混懸液;得到混懸液后采用反 復凍融法提高了活性物的包封率。
[0032] 優(yōu)選的，步驟1)中揮發(fā)性有機溶劑選自氯仿，或氯仿和甲醇按照體積比為1:1混合 得到的混合液。
[0033] 優(yōu)選的，醇提物與所加入的有機溶劑的體積比為1:1-1:10。
[0034] 優(yōu)選的，步驟2)中的緩沖液為pH 7.0的磷酸緩沖液。
[0035] 優(yōu)選的，水提物與所加入的緩沖液的體積比為1:1-1:10。
[0036] 優(yōu)選的，步驟3)中常壓均質(zhì)時間為2-6min。
[0037] 優(yōu)選的，步驟5)混懸液在-80°C~-196°C的條件下冷凍，可采用-196°C的液氮冷凍 或-80 °C超低溫冰箱冷凍，冷凍時間為20-60s。
[0038] 優(yōu)選的，步驟6)中，脂質(zhì)體混懸液用高壓均質(zhì)機制備脂質(zhì)體，壓力越高，粒徑越小， 在1000 ba時，粒徑就可以達到IOOnm以下。本發(fā)明選用1200ba，高壓均質(zhì)3-6次，可以獲得粒 徑為20-90nm的柔性脂質(zhì)體。
[0039] 優(yōu)選的，步驟7)中離心的轉(zhuǎn)速為8000rad/min，離心時間為lh。
[0040] 優(yōu)選的，步驟8)中冷凍干燥前需將加入了凍干保護劑的脂質(zhì)體混懸液在_40°C預 凍12小時以上，再置于冷凍干燥機凍干。
[0041] 本發(fā)明的有益效果是：
[0042]本發(fā)明通過研究機理明確的針對雄激素源性脫發(fā)的多靶點配方，研究有效的防脫 發(fā)組合物，并將其制備成帶有正電荷的復合脂質(zhì)體，從而提高其在劑型上的靈活應用，增加 制劑在頭皮的吸附和對毛囊的深入滲透。該制劑多靶點的復合作用，也可有效抑制脫發(fā)的 進一步發(fā)展，并促進新毛發(fā)的生長。
[0043]本發(fā)明針對以往防脫配方中自于以往傳統(tǒng)中醫(yī)驗方、中草藥復方乃至其提取物作 用機理不明的缺點，本發(fā)明通過大量文獻和實驗優(yōu)化配方，設計了本發(fā)明的防脫發(fā)組合物。 本發(fā)明防脫發(fā)組合物是根據(jù)雄激素源性脫發(fā)的四個主要靶點篩選出來的最佳組合物。通過 對亞油酸、鹽酸小檗堿、甘草酸、谷胱甘肽、植物鞘氨醇、苦參堿和茶多酚的復配，針對雄激 素源性脫發(fā)的幾個發(fā)生和作用靶點，使復方組分分別針對抑制5α_還原酶和雄激素受體 (AR)的活性、減少皮脂分泌、舒緩毛囊炎癥和促進毛囊生長等作用，可起到復合的增效作 用。
[0044] 本發(fā)明的復合脂質(zhì)體，在保持防脫提取物濃度和高作用活性同時，可大幅度降低 制劑中醇類物質(zhì)的含量，降低使用者潛在的刺激性和過敏幾率。同時，為了降低制劑的刺激 性和使用者的使用便利性，本復合脂質(zhì)體可做成凝膠劑、防脫精華液、防脫護發(fā)素、防脫護 發(fā)乳、防脫洗發(fā)水等藥劑或特殊用途化妝品劑型。而以往制劑為了增加中草藥單方或復方 有效物的溶解，其制劑往往使用酊劑的形式，酊劑含有大量的低分子醇類物質(zhì)如乙醇、丙二 醇等，當大量的醇類物質(zhì)在施用在頭皮上，對頭皮會產(chǎn)生刺激性甚至潛在的過敏作用(如某 些人群對比例較大的丙二醇有過敏癥狀）。
[0045] 本發(fā)明針對以往防脫產(chǎn)品的制劑只做成酊劑，其透皮性較低的缺點，本發(fā)明將防 脫成分或中草藥復方進一步制作成納米脂質(zhì)體形式，可改善傳統(tǒng)ST劑對頭皮皮膚的透過性 能低的缺點，能有效滲透進入頭皮，并深入到達毛囊深處如毛乳頭區(qū)域發(fā)揮其生物學作用。
[0046] 本發(fā)明在制作防脫復合脂質(zhì)體的同時，還考慮到毛發(fā)和皮膚表層攜帶負電荷的特 性，將制劑設計為正電荷脂質(zhì)體，以增強制劑對毛發(fā)、皮膚(頭皮）的黏附性能，從而增加制 劑在頭發(fā)、頭皮上的滯留數(shù)量，并促進制劑的滲透作用以利于到達作用位置。以往的研究， 即便有極少量的防脫產(chǎn)品可能用到脂質(zhì)體、醇質(zhì)體或微乳等納米體系，因其普通納米體系 并無專門在制作過程中帶上正電荷，因此比較難吸附在帶負電荷的人體頭發(fā)和頭皮上，從 而降低了制劑吸附的幾率，也降低了透過頭皮深入毛囊作用靶點的幾率。
[0047] 本發(fā)明制備的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體粒徑在20-90nm之間，Zeta電位范圍為0-70mV，使所包裹的防脫發(fā)活性成分具有更好的穩(wěn)定性。同時，在柔性納米脂質(zhì)體膜成分中引 入帶電荷脂質(zhì)成分，除了使脂質(zhì)體具有良好的皮膚透過性外，脂質(zhì)體與細胞生物膜之間具 有更強的粘附性，有利于局部充分發(fā)揮防脫發(fā)活性成分的作用功效和作用效率，減少活性 成分的使用量，進而利于節(jié)約資源。而本發(fā)明采用的制備方法采用了薄膜蒸發(fā)-反復凍融_ 高壓均質(zhì)-冷凍干燥法，制備方法中在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)之前采用了普通均質(zhì)法，得到更加均一穩(wěn)定 的混懸液;得到混懸液后采用反復凍融法提高了活性物的包封率和載藥量;本發(fā)明最終的 產(chǎn)品為流動性良好的粉末，便于使用、運輸和貯存。
【具體實施方式】
[0048] 本發(fā)明的防脫發(fā)組合物，是根據(jù)雄激素源性脫發(fā)的四個主要靶點篩選出來的最佳 組合物。
[0049] 具體說明如下：
[0050]亞油酸，一種脂肪酸。分子式CH3 (CH2) 4CH=CHCH2CH=CH (CH2) 7C00H。學名順，順-9， 12-十八(碳)二烯酸。亞油酸與其他脂肪酸一起，以甘油酯的形式存在于動植物油脂中。亞 油酸具有降低血脂、軟化血管、降低血壓、促進微循環(huán)的作用，可預防或減少心血管病的發(fā) 病率，特別是對高血壓、高血脂、心絞痛、冠心病、動脈粥樣硬化、老年性肥胖癥等的防治極 為有利，能起到防止人體血清膽固醇在血管壁的沉積，有"血管清道夫"的美譽，具有防治動 脈粥樣硬化及心血管疾病的保健效果。已有研究表明，亞油酸對5α_還原酶的活性具有較好 的抑制能力。
[0051 ] 鹽酸小檗堿:一種異喹啉生物堿。分子式[C20Hi8N04] +。又稱黃連素。對痢疾桿菌、大 腸桿菌、肺炎雙球菌、金葡菌、鏈球菌、傷寒桿菌及阿米巴原蟲有抑制作用。鹽酸小蘗堿除了 對微生物感染起抑制作用之外，還可針對黑色素細胞的發(fā)育生長，減緩脫發(fā)和白發(fā)的生成。
[0052] 甘草酸是甘草中最主要的活性成分。甘草酸及其產(chǎn)品，對肉瘤、乳頭瘤病毒、癌細 胞生長有抑制作用，對艾滋病的抑制率更高達90%，有較強的增加人體免疫功能作用，而且 也是很好的食品添加劑和香料基料。有研究發(fā)現(xiàn)，甘草酸對毛囊的生長起正向的促進作用。
[0053] 谷脫甘肽（glutathione，r-glutamyl cysteingl+glycine，GSH)是一種含 γ -酰胺 鍵和巰基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成。存在于幾乎身體的每一個細胞。谷胱 甘肽能幫助保持正常的免疫系統(tǒng)的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上 的巰基為其活性基團（故常簡寫為G-SH)，易與某些藥物(如撲熱息痛）、毒素(如自由基、碘 乙酸、芥子氣，鉛、汞、砷等重金屬)等結(jié)合，而具有整合解毒作用。谷胱甘肽具有廣譜解毒作 用，不僅可用于藥物，更可作為功能性食品的基料，在延緩衰老、增強免疫力、抗腫瘤等功能 性食品廣泛應用。毛囊的生長周期和人體皮膚的衰老，歸根結(jié)底是氧化的漸進作用，因此谷 胱甘肽在防脫組合物中主要起到抗氧化的作用，進而減緩毛囊衰老的進程。
[0054] 植物鞘氨醇是基于可作為神經(jīng)酰胺主鏈的鞘磷脂長鏈，存在于表皮層和皮膚表 層?；谄つw脂質(zhì)屏障功能的痤瘡護理，皮膚自身的抗菌和抗炎因子。植物鞘氨醇在最近的 研究發(fā)現(xiàn)具有較為高效的抑制5α_還原酶的能力，其抑制能力比常用的植物5α_還原酶抑制 劑高出數(shù)倍到數(shù)百倍。
[0055] 苦參堿是由豆科植物苦參的干燥根、植株、果實經(jīng)乙醇等有機溶劑提取制成的，是 生物堿。苦參堿具有抗過敏、抗炎作用。研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿對雄激素受體的表達、以及接受睪 酮和二氫睪酮刺激都有抑制作用，進而可以減少毛囊中皮脂腺分泌皮脂的量，減少毛囊炎 癥的產(chǎn)生，延長毛囊從生長期進入休止期和退行期的進程。
[0056] 茶多酚(Tea Polyphenols)是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，包括黃烷醇類、花色苷 類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等。主要為黃烷醇(兒茶素)類，兒茶素占60~80%。類物質(zhì)茶 多酚又稱茶鞣或茶單寧，是形成茶葉色香味的主要成份之一，也是茶葉中有保健功能的主 要成份之一。研究表明，茶多酚等活性物質(zhì)具解毒和抗輻射作用，能有效地阻止放射性物質(zhì) 侵入骨髓，并可使鍶90和鈷60迅速排出體外，被健康及醫(yī)學界譽為"輻射克星"。
[0057] 通過上述幾類組分的復配，基本上可以針對雄激素源性脫發(fā)的幾個發(fā)生和作用靶 點，使復方組分分別針對抑制5α_還原酶和雄激素受體(AR)的活性、減少皮脂分泌、舒緩毛 囊炎癥和促進毛囊生長等作用，可起到復合的增效作用。
[0058] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0059] 實施例1
[0060]防脫發(fā)組合，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸30份、鹽酸小檗堿10份、甘草酸15 份、谷胱甘肽10份、植物鞘氨醇45份、苦參堿20份、茶多酚15份。將防脫發(fā)組合物中亞油酸、 植物鞘氨醇用115份無水乙醇溶解為醇提物，鹽酸小檗堿、甘草酸、谷胱甘肽、苦參堿、茶多 酚用105份水溶解為水提物。
[0061 ] 將180mg硬脂酰胺、220mg腦磷脂、200mg膽固醇、75.〇11^防脫發(fā)組合醇提物在35<€ 水浴條件下溶于7000mg的氯仿中；將50mg膽酸鈉、70.0 mg防脫發(fā)組合水提物在35 °C水浴條 件下溶于200mg pH7.0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液混合，用均質(zhì)機在 12000rpm條件下均質(zhì)6min，次數(shù)為5次，得乳池液，靜置30min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液;將 脂質(zhì)體混懸液再放入液氮中冷凍，冷凍20s后在35°C條件下解凍，重復此步驟6次，得到脂質(zhì) 體混懸液，再將脂質(zhì)體混懸液在12 0 0 b a的壓力下高壓均質(zhì)5次，得柔性脂質(zhì)體溶液，再在 8000rad/min條件下離心lh，得脂質(zhì)體混懸液，加入相當于脂質(zhì)體混懸液4倍量的甘露醇， 于-40°C預凍12小時后，放置于冷凍干燥機冷凍干燥成粉末狀。
[0062]所得到的正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體Zeta電位及粒度經(jīng)電位分析儀和Zetasizer (Nano ZS-90，Malvern)納米粒度測定其Zeta電位和粒徑分別為59.1 ± 5.99mV，60 ±4.45， 采用離心法分離測得產(chǎn)品的包封率為亞油酸50.2%、鹽酸小檗堿37.8%、甘草酸38.9 %、谷 胱甘肽41.4%、植物鞘氨醇49.8%、苦參堿42.3%、茶多酚41.5%。
[0063] 實施例2
[0064]防脫發(fā)組合，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸20份、鹽酸小檗堿2份、甘草酸5份、 谷胱甘肽10份、植物鞘氨醇15份、苦參堿10份、茶多酚14份。將防脫發(fā)組合物中亞油酸、植物 鞘氨醇用70份無水乙醇溶解為醇提物，鹽酸小檗堿、甘草酸、谷胱甘肽、苦參堿、茶多酚用82 份水溶解為水提物。
[0065] 將140mg硬脂酰胺、160mg大豆卵磷脂、150mg膽固醇、80.0 mg防脫發(fā)組合的醇提物 在35 °C水浴條件下溶于6000mg氯仿中；15mg膽酸鈉、120.0 mg防脫發(fā)組合的水提物在35 °C水 浴條件下溶于250mg pH7.0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液混合，用均質(zhì) 機在12000rpm條件下均質(zhì)3min，次數(shù)為4次，得乳池液，靜置30min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸 液;將脂質(zhì)體混懸液在液氮中冷凍，冷凍40s后在35 °C條件下解凍，重復此步驟5次，得到混 懸液，再將脂質(zhì)體混懸液在12 0 0 b a的壓力下高壓均質(zhì)5次，得柔性脂質(zhì)體溶液，再在 8000rad/min條件下離心Ih得脂質(zhì)體混懸液，加入相當于脂質(zhì)體混懸液5倍量的海藻糖，于_ 40 °C預凍12小時后，放置于冷凍干燥機冷凍干燥成粉末狀。
[0066]所得到的正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體Zeta電位及粒度經(jīng)電位分析儀和Zetasizer (Nano ZS-90，Malvern)納米粒度測定其Zeta電位和粒徑分別為60.0 ±6.04mV，84±5，6;采 用離心法分離測得產(chǎn)品的包封率為亞油酸45.4%、鹽酸小檗堿30.1%、甘草酸34.5%、谷胱 甘肽37.8%、植物鞘氨醇41.5%、苦參堿36.7%、茶多酚34.5%。
[0067] 實施例3
[0068]防脫發(fā)組合，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸15份、鹽酸小檗堿5份、甘草酸8份、 谷胱甘肽7份、植物鞘氨醇15份、苦參堿10份、茶多酚8份。將防脫發(fā)組合物中亞油酸、植物鞘 氨醇用45份無水乙醇溶解為醇提物，鹽酸小檗堿、甘草酸、谷胱甘肽、苦參堿、茶多酚用57份 水溶解為水提物。
[0069] 將80mg 1，2_二油酰氧丙基-N，N，N-三甲基溴化銨、120mg蛋黃卵磷脂、IOOmg膽固 醇、60.0 mg防脫發(fā)組合的醇提物在35 °C水浴條件下溶于4000mg氯仿中；25mg膽酸鈉、78mg防 脫發(fā)組合的水提物，35°C水浴條件下溶于200mg pH7.0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖 液與氯仿溶液混合，用均質(zhì)機在12000rpm/min條件下均質(zhì)5min，次數(shù)為3次，得乳池液，靜置 30min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液;將脂質(zhì)體混懸液在液氮中冷凍，冷凍50s后在35°C條件下 解凍，重復此步驟5次，得到混懸液，再將脂質(zhì)體混懸液在1200ba的壓力下高壓均質(zhì)5次，得 柔性脂質(zhì)體溶液，再在8000rad/min條件下離心Ih得脂質(zhì)體混懸液，加入相當于脂質(zhì)體混懸 液3倍量的蔗糖，于_40°C預凍12小時后，放置于冷凍干燥機冷凍干燥成粉末狀。
[0070]所得到的正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體Zeta電位及粒度經(jīng)電位分析儀和Zetasizer (Nano ZS-90，Malvern)納米粒度測定其Zeta電位和粒徑分別為63.7 ±4.41mV，70±3.3;采 用離心法分離測得產(chǎn)品的包封率為亞油酸56.8%、鹽酸小檗堿37.8%、甘草酸35.6%、谷胱 甘肽37.9%、植物鞘氨醇50.6%、苦參堿35.9%、茶多酚41.8%。
[0071 ]效果實驗如下：
[0072] 5α-還原酶活性效果評價試驗
[0073]對上述中草組合物進行抑制5α_還原酶活性效果評價試驗。
[0074] 制備空白試驗組、空白對照組、非那甾胺組、中草藥復方組；其中，空白試驗組為5 α-還原酶、依賴性還原輔酶(NADPH)、Tris緩沖溶液;空白對照組為系列濃度的睪酮、5α-還 原酶、依賴性還原輔酶(NADPH)、Tris緩沖溶液;非那甾胺組為非那甾胺溶液、系列濃度的睪 酮、5α-還原酶、依賴性還原輔酶(NADPH)、Tris緩沖溶液；中草藥復方組為各實施例的中藥 組合物脂質(zhì)體、系列濃度的睪酮、5α-還原酶、依賴性還原輔酶(NADPH)、Tris緩沖溶液。各組 中，同一試劑的用量相同。將以上各組反應體系分別于37°C下連續(xù)孵育，用紫外光柵分光光 度計在340nm處連續(xù)測定NADPH的特征吸收波OD值的時間變化曲線，根據(jù)NADPH標準曲線折 算出作為酶學反應底物NADPH在IOmin內(nèi)的濃度下降速率，扣除空白試驗管的下降速率，即 為酶活性。平行3組取平均值，測定結(jié)果見表1所示。
[0075] 表1對5α-還原酶活性抑制效果
[0078]表1結(jié)果表明，本發(fā)明實施例1-3多靶點抑制脂溢性脫發(fā)的中藥組合物對與空白對 照組有顯著性差異，對5α_還原酶活性具有明顯的抑制作用，其抑制作用各有高低，與陽性 對照非那留胺組接近。
[0079] 拮抗AR表達效果實驗
[0080] 對上述中草組合物脂質(zhì)體進行拮抗AR表達效果評價試驗。
[0081] 通過與LNCaP細胞培養(yǎng)研究防脫發(fā)中草藥復方與AR的相互作用，該細胞含有人AR 后細胞溶解產(chǎn)物，利用標準蛋白質(zhì)印跡實驗鑒定和定量分析AR蛋白質(zhì)。用LNCaP細胞分別與 實施例1-3多靶點抑制脂溢性脫發(fā)的中藥組合物、地塞米松溫育，并檢測溫育后溶胞產(chǎn)物中 所含的殘留AR的百分比，檢測結(jié)果見表2。表2是通過蛋白質(zhì)印跡殘留在LNCaP中的雄激素受 體比例(48h培養(yǎng)），此外表2還記錄LNCaP細胞溫育的空白對比試驗數(shù)據(jù)。
[0082]表2拮抗AR表達效果

[0084]~從表2結(jié)果可得出，與空白對照組相比，本發(fā)明脫發(fā)中草藥組合物1-3配方對AR有-顯著拮抗作用，其效果與空白對照組有顯著性差異，與陽性對照組西藥地塞米松略為相當。 [0085]對微生物的抑制實驗
[0086]對上述中草組合物使用不同模式微生物進行抑菌圈效果實驗。
[0087] 實驗用微生物為:糠秕馬拉色菌模式菌株為ATCC14521，痤瘡丙酸桿菌ATCC65102， 金黃色葡萄球菌模式菌為菌株ATCC6538。
[0088]針對不同微生物采用不同培養(yǎng)方法，如糠秕馬拉色菌采用真菌培養(yǎng)基，震蕩培養(yǎng)； 痤瘡丙酸桿菌采用厭氧培養(yǎng)方法;金黃色葡萄球菌采用LB細菌培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)。先鑒定并 小量接種，比濁法定量微生物數(shù)量后將其涂布在培養(yǎng)皿內(nèi)，標準牛津杯加入適量藥劑和對 比藥劑，每個菌種做4個重復，培養(yǎng)24h后取抑菌圈平均值。參照標準抑菌測定方法，抑菌圈 >20mm為高度敏感，10~20mm為中度敏感，<10mm為耐藥。三種不同微生物所使用的陽性對 比抑菌劑皆為甲硝唑，該抑菌劑作為常規(guī)抑菌劑廣泛使用在消毒產(chǎn)品和化妝品中。實驗數(shù) 據(jù)見表3。
[0089]表3對不同模式微生物抑菌效果
[0091]由表3可知，實施例1-3多靶點抑制脂溢性脫發(fā)的中藥組合物針對脫發(fā)的模式微生 物糠秕馬拉色菌、痤瘡丙酸桿菌和金黃色葡萄球菌皆為中敏，略遜于經(jīng)典抑菌劑甲硝唑。 [0092]體外透皮效果實驗
[0093]采用Franz擴散池檢測體外透皮效果，分別制作中草藥復方（用2%的乳化劑將醇 溶性和水溶性物質(zhì)均質(zhì)而成)和復合脂質(zhì)體制劑。一定時間后，對同樣濃度的中草藥復方和 相應包裹中草藥復方的復合脂質(zhì)體制劑的透皮性能進行檢測。接收池取樣后，采用高效液 相法檢測特定藥物的透皮量。分別測定復方和脂質(zhì)體中亞油酸在接收池的含量，并以此為 標準，將其與濃度的比值，作為透皮積累量。結(jié)果如下表4。
[0094] 表4體外透皮效果
[0097] 由表4可知:經(jīng)過脂質(zhì)體包裹后，中草藥有效成分可以更好地被皮膚吸收。同等濃 度的中草藥復方脂質(zhì)體比單純的中草藥復方的透皮率有顯著性的增加，如實施例1中超過 10%，在實施例2和3中，透皮率都超過了50%。使用柔性脂質(zhì)體制劑形式，有利于防脫組分 的透皮吸收，進而可更有效減少使用者的脫發(fā)問題。
[0098] 帶正電荷的防脫復合脂質(zhì)體制備臨床或特殊用途化妝品制劑實驗 [0099]防脫精華液配方如下，見表5。
[0100]表5防脫精華液配方
〇
[0102] 利用上述配方進行防脫發(fā)日用化學品使用效果試驗：
[0103] 試驗人數(shù)為300人，其中男272人，女58人，年齡18-60周歲，均有脫發(fā)癥狀。試用方 法為:將受試者隨機分為30+6人，共5組，直接使用本發(fā)明提供的防脫發(fā)日用化學品。使用兩 個月，洗發(fā)后擦干頭發(fā)，均勻涂抹于患部，稍后加以按摩，促進吸收，無須沖洗，第一個月每 周使用3次，第二個月每周2次，2-3ml/次，為期二個月療程。每周至少檢查一次身體狀況，以 了解有無全身及局部不良反應，并詳細記錄結(jié)果。使用結(jié)果如下表6。
[0104] 弄fi防脫發(fā)R用化學品伸用效里試3合

[0107] 由表6的結(jié)果可知：由本發(fā)明實施例1-3制備得到的防脫精華液效果優(yōu)于空白脂質(zhì) 體以及米諾地爾脂質(zhì)體制備得到的防脫精華液。
[0108] 配方1作為該制劑的空白對照，對使用者的脫發(fā)癥狀并無改善。配方2為含米諾地 爾的脂質(zhì)體制劑，米諾地爾是美國FDA認證的外用防脫制劑的有效成分，但以往制劑往往做 成含乙醇30%以上的防脫酊，并含20%丙二醇，刺激性大。改用本發(fā)明方法制備柔性脂質(zhì)體 制劑后，可以有效降低制劑中的乙醇和丙二醇和含量，從而降低制劑的刺激性，在本對比實 驗米諾地爾脂質(zhì)體作為陽性對照，在使用兩個月后，受試者的脫發(fā)情況得到明顯改善，接近 9成的人有新的毛發(fā)生成。配方3、配方4和配方5精華液的使用效果也明顯超過空白對照，其 中最好是配方5精華液，有超過9成的使用者脫發(fā)癥狀緩解，8成多的人有新發(fā)長出。說明作 為防脫新劑型，該柔性脂質(zhì)體的使用效果比較明顯。
[0109] 雖然配方3、配方4和配方5精華液的使用效果在測試中略遜于陽性對照米諾地爾 脂質(zhì)體，但本研究所做制劑主要用于化妝品尤其是特殊用途化妝品的研發(fā)和生產(chǎn)的，作為 日常消費者所用的化妝品劑型，其與標準藥物略有差距是可以理解的。此外，本發(fā)明配方為 純天然提取物，不含激素，不含抗生素，可以適用于常規(guī)保健或日常消費使用。
[0110] 上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權項】
1. 一種防脫發(fā)組合物，其特征在于，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸6~30份、鹽酸小 檗堿0.5~10份、甘草酸1~15份、谷胱甘肽2~15份、植物鞘氨醇5~50份、苦參堿1~30份、 茶多酚1~18份。2. 根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸6~25 份、鹽酸小檗堿0.5~8份、甘草酸1~10份、谷胱甘肽2~12份、植物鞘氨醇5~40份、苦參堿1 ~25份、茶多酌1~15份。3. 根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，包括下列重量份數(shù)的組份:亞油酸6~20 份、鹽酸小檗堿0.5~7份、甘草酸1~8份、谷胱甘肽2~10份、植物鞘氨醇5~30份、苦參堿1 ~20份、茶多酸1~10份。4. 一種帶正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體，其特征在于，包括下列重量份的組分：100-500 份中性磷脂，〇. 5-500份帶正電荷磷脂，1-1000份膽固醇、0.5-500份表面活性劑、0.5-250份 防脫發(fā)組合物、400-8000份的冷凍干燥保護劑，其中防脫發(fā)組合物如權利要求1-3任一項所 述。5. 根據(jù)權利要求4所述的帶正電荷復合柔性脂質(zhì)體，其特征在于，包括下列重量份的組 分：100-300份中性磷脂、0.5-200份帶正電荷磷脂、15-250份膽固醇、10-200份表面活性劑、 20-200份防脫發(fā)組合物、400-7000份的冷凍干燥保護劑，其中防脫發(fā)組合物如權利要求1-3 任一項所述。6. 根據(jù)權利要求4-5任一項所述的帶正電荷復合柔性脂質(zhì)體，其特征在于:防脫發(fā)組合 物中亞油酸、植物鞘氨醇的有效成分為其醇提物，鹽酸小檗堿、甘草酸、谷胱甘肽、苦參堿、 茶多酚的有效成分為其水提物。7. 根據(jù)權利要求4-5任一項所述的帶正電荷復合柔性脂質(zhì)體，其特征在于:帶正電荷防 脫復合柔性脂質(zhì)體的Zeta電位范圍為0-70mV。8. 根據(jù)權利要求4-5任一項所述的帶正電荷復合柔性脂質(zhì)體，其特征在于:帶正電荷柔 性脂質(zhì)體粒徑范圍為20-90nm。9. 根據(jù)權利要求4-5任一項所述的帶正電荷復合柔性脂質(zhì)體，其特征在于：中性磷脂選 自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻磷脂酰膽堿、二月桂酰 磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺中的至少一種，帶正電荷磷脂選自硬脂_Κ、3β-[Ν-0'小'-二甲基乙胺)胺基甲?；鵠膽固醇川-[1-(2,3-二油酰基）丙基]-^^三乙胺氯、 2,3_二油酰氧-Ν-[2-(精氨酸基酰胺）乙基]-Ν，Ν-二甲基-卜丙基-三氟乙酸胺、1，2_二油酰 氧丙基-Ν，Ν，Ν-三甲基溴化銨脂質(zhì)中的至少一種;表面活性劑為膽酸鈉或去氧膽酸鈉;冷凍 干燥保護劑選自蔗糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖中的至少一種。10. -種帶正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:包括下列步驟： 1) 將中性磷脂、帶正電荷磷脂、膽固醇、防脫組合物的醇提物在30~36°C水浴條件下溶 解于揮發(fā)性有機溶劑中； 2) 將表面活性劑、防脫組合物的水提物在30~36 °C水浴條件下溶解于緩沖液中； 3) 將步驟1)和2)的溶液混合，用普通均質(zhì)機在12000rpm條件下常壓均質(zhì)l-10min，次數(shù) 為2_5次，得乳池液； 4) 將步驟3)所得的乳濁液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至形成脂質(zhì)體混懸液； 5) 將步驟4)所得的脂質(zhì)體混懸液在-80°C~_196°C的條件下，冷凍20-200S，在30-36°C 條件下解凍，重復此步驟5-6次； 6) 將步驟5)所得的脂質(zhì)體混懸液在1200ba的壓力下高壓均質(zhì)2-10次，得柔性脂質(zhì)體溶 液； 7) 將步驟6)得到的脂質(zhì)體溶液，采用離心法除去未成功包裹的活性物，得脂質(zhì)體混懸 液； 8) 在步驟7)得到的脂質(zhì)體混懸液中，加入脂質(zhì)體混懸液3-8倍重量的凍干保護劑，冷凍 干燥得到帶正電荷防脫復合柔性脂質(zhì)體。
【文檔編號】A61K31/4375GK106075390SQ201610608209
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月28日 公開號201610608209.5, CN 106075390 A, CN 106075390A, CN 201610608209, CN-A-106075390, CN106075390 A, CN106075390A, CN201610608209, CN201610608209.5
【發(fā)明人】吳培誠, 王卓婭, 劉彩云, 羅欣茹, 廖翠琴
【申請人】廣東藥科大學