靈芝三萜類化合物的用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是天然產(chǎn)物活性成分的用途。本發(fā)明采用Griess法來考察22個(gè)靈芝三萜類化合物抑制小鼠BV?2小膠質(zhì)細(xì)胞NO釋放的活性。除化合物4外，其余靈芝三萜類化合物對(duì)BV?2小膠質(zhì)細(xì)胞的存活率無影響，均能較好的抑制LPS誘導(dǎo)BV?2小膠質(zhì)細(xì)胞釋放NO，其中化合物6、11、13、14、17、18、22表現(xiàn)出顯著的抑制活性，其IC50均低于10μM，表明這些化合物可能成為先導(dǎo)化合物。
【專利說明】
靈芝三萜類化合物的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是天然產(chǎn)物活性成分的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 神經(jīng)退行性病變是一類以神經(jīng)元喪失正常的功能和結(jié)構(gòu)甚至死亡為病理特征的 疾病，包括帕金森病(PD)、阿爾茨海默病(AD)，多發(fā)性硬化(MS)等，這些疾病的發(fā)生與發(fā)展 都與神經(jīng)炎癥密切相關(guān)。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)固有的免疫細(xì)胞，具有巨噬細(xì)胞的特 征，廣泛分布于大腦和脊髓中。"靜息"狀態(tài)及適度活化的小膠質(zhì)細(xì)胞可發(fā)揮重要的免疫防 御、免疫監(jiān)視作用，維持神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。過度或者持續(xù)性活化的小膠質(zhì)細(xì)胞則介導(dǎo)神 經(jīng)炎癥，釋放包括IL-li3、TNF-a、一氧化氮及活性氧簇等在內(nèi)的炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致繼發(fā)性神經(jīng) 損傷。
[0003] 靈芝是靈芝科真菌的總稱，屬于真菌界，擔(dān)子菌門，擔(dān)子菌綱，非褶菌目的一類高 等擔(dān)子菌，是我國歷代醫(yī)藥學(xué)家推崇的滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正培本的珍貴藥品，久服有輕身延年的 功效?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》將靈芝列為上品。關(guān)于靈芝化學(xué)成分及其生物活性研究，多年來一直都 是國內(nèi)外藥學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。絕大部分的研究集中在赤芝Ganoderma Lucidum這個(gè) 品種，偶有涉及紫芝Ganoderma sinense、松杉靈芝Ganoderma tsugae、薄蓋靈芝Ganoderma capense、樹舌靈芝Ganoderma appIanatum等品種。
[0004] 現(xiàn)代藥理學(xué)表明靈芝具有抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗Hiv-I病毒、降血壓、免疫調(diào) 節(jié)、保肝解毒及抑菌等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供靈芝三萜類化合物的用途。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：
[0007] 1.靈芝三萜類化合物抑制LPS誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞釋放NO的活性。
[0008] 本發(fā)明的益效如下：
[0009] 1.提供了神經(jīng)退行性病變的可能先導(dǎo)化合物，這些化合物具有相同的母核和相似 的取代基，對(duì)于構(gòu)效關(guān)系等下一步研究有很大作用。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
[0011] 實(shí)施例1
[0012] 用于藥理活性實(shí)驗(yàn)的22個(gè)靈芝三萜類化合物詳見Table 1:
[0013] Table I Compounds isolated from EtOAc parts of Ganoderma curtisii.




[0019] 藥理活性實(shí)驗(yàn):本發(fā)明采用Griess法來考察靈芝三萜類化合物抑制小鼠 BV-2小膠 質(zhì)細(xì)胞NO釋放的活性。
[0020] 將22個(gè)靈芝三萜類化合物及陽性藥槲皮素均用DMSO溶解并稀釋至合適濃度，-20 °(：保存?zhèn)溆?。將BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞調(diào)整為2X IO5個(gè)/mL，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔加入 IOOyL細(xì)胞懸浮液，37 °C、5 %⑶2隔夜培養(yǎng)后，各孔按以下分組情況加樣：（1)脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS)組不加入被測試樣品；（2)空白對(duì)照組(等體積DMS0); (3)經(jīng)LPS 預(yù)處理的不同濃度的靈芝三萜類化合物(加入終濃度為lyg/mL的LPS孵育30min，再分別加 入濃度為40、20、10、2.5、1.0、0.5、0. ΙμΜ的樣品），每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)平行孔。在37°C、5%CO2恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，吸取培養(yǎng)液上清IOOyL至酶標(biāo)板中，加入等體積的Griess試劑，室溫 反應(yīng)15min后測定540nm處的吸光值。用濃度分別為1、2、5、10、20、40、60、IOOymolA^NaNO 2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)NaNO2標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算細(xì)胞培養(yǎng)上清液中Ν0：Γ的濃度以及對(duì)NO釋放的抑制
率，抑芾丨丨蟲斗智/入才4.
[0021]
[0022]在測定樣品對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞釋放NO的抑制活性同時(shí)，采用MTT法評(píng)價(jià)樣品的 細(xì)胞毒性，無明顯細(xì)胞毒性，細(xì)胞存活率>85%; + :弱細(xì)胞毒性，70% <細(xì)胞存活率< 85 % ;++:中等細(xì)胞毒性，50 % <細(xì)胞存活率< 70 % ;+++強(qiáng)細(xì)胞毒性，細(xì)胞存活率< 50 % ;如 樣品因具有細(xì)胞毒性導(dǎo)致細(xì)胞死亡，測定結(jié)果所出現(xiàn)的抑制活性為假陽性，因此在評(píng)價(jià)樣 品活性結(jié)果的時(shí)候應(yīng)結(jié)合樣品表現(xiàn)出來的細(xì)胞毒性綜合判斷。只有在不影響細(xì)胞正常增殖 的濃度范圍內(nèi)，表現(xiàn)出來的對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞釋放NO的抑制活性才具有真正意義。
[0023] 在上述培養(yǎng)板每孔中加入MTT溶液(終濃度200yg/mL)，置于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中 繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄去上清，吸干殘留液體，加入DMSO 150yL，振搖IOmin使生成的甲瓚結(jié)晶充 分溶解后，以630nm為參比波長在570nm下測定吸光倌。細(xì)胞存活率計(jì)算公式為：
[0024]
[0025] 具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見Table 2:
[0026] Table 2 Inhibitory effect of tested compounds on NO production I ndnr.pH hv IPS in mi r.rop-1 i a I r.pl I
[0028] 氺Cell viability is expressed as a percentage(%)of the LPS-only treatment group.
[0029] SPositive control.
[0030] 結(jié)果顯示，除化合物4外，其余靈芝三萜類化合物對(duì)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞的存活率無影 口向，均能較好的抑制LPS誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞釋放N0,其中化合物6、11、13、14、17、18、22表 現(xiàn)出顯著的抑制活性，其IC5Q均低于ΙΟμΜ，表明這些化合物可能成為先導(dǎo)化合物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 靈芝Ξ祗類化合物在制備神經(jīng)退行性病變藥物的用途。2. 如下所述化合物（1)~(22)在制備神經(jīng)退行性病變藥物的用途：3. 如權(quán)利要求2所述化合物(6)、（11)、（13)、（14)、（17)、（18)、（22)在制備神經(jīng)退行性 病變藥物的用途。4. 靈芝Ξ祗類化合物在制備抑制脂多糖誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞釋放一氧化氮藥物的用 途。5. 如權(quán)利要求2所述化合物（1)~（22)在制備抑制脂多糖誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞釋放一 氧化氮藥物的用途。6. 如權(quán)利要求2所述化合物(6)、（11)、（13)、（14)、（17)、（18)、（22)在制備抑制脂多糖 誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞釋放一氧化氮藥物的用途。
【文檔編號(hào)】A61K31/575GK106074566SQ201610378137
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月2日
【發(fā)明人】邱莉, 謝集照, 焦楊
【申請人】廣西醫(yī)科大學(xué)