本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型構(gòu)建，具體涉及一種copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、慢性阻塞性肺疾?。╟opd）是一種以氣流受限為特征的慢性氣道炎性疾病，具有發(fā)病率高、致殘率高和死亡率高等特點(diǎn)。近年來(lái)研究表明，抑郁障礙是copd患者最常見(jiàn)的心理并發(fā)癥之一，其發(fā)病率可達(dá)40%以上，且顯著影響患者的治療依從性、生活質(zhì)量與病死率。因此，構(gòu)建模擬慢性肺部炎癥與抑郁狀態(tài)的動(dòng)物模型，對(duì)于揭示其共病機(jī)制及探索中西藥物干預(yù)手段具有重要意義。
2、現(xiàn)有公開(kāi)專利cn117859698a《一種慢阻肺肺腎氣虛證動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用》通過(guò)采用香煙煙熏、lps滴注、氫化可的松注射和束縛游泳等手段，構(gòu)建了符合中醫(yī)“肺腎氣虛證”特征的慢阻肺動(dòng)物模型，已在中藥干預(yù)效果驗(yàn)證中獲得一定應(yīng)用。然而，該方案主要圍繞中醫(yī)證候構(gòu)建與肺功能損傷重建，雖然加入了一定應(yīng)激因素（如束縛游泳），但并未系統(tǒng)引入行為學(xué)評(píng)價(jià)手段，也未建立明確的抑郁行為指標(biāo)體系，因此難以準(zhǔn)確模擬copd并發(fā)抑郁這一常見(jiàn)臨床共病狀態(tài)。此外，該模型操作流程較為復(fù)雜，需多種造模方式聯(lián)用，重復(fù)性差，在藥物篩選、機(jī)制研究等方面的應(yīng)用場(chǎng)景較為局限，尚不能滿足對(duì)復(fù)雜并發(fā)疾病狀態(tài)建模與評(píng)估的研究需求。
3、因此，亟需建立一種能同時(shí)反映肺部炎癥病理改變與抑郁樣行為特征的穩(wěn)定動(dòng)物模型，以更好服務(wù)于copd并發(fā)抑郁的機(jī)制探索與干預(yù)策略評(píng)估，填補(bǔ)現(xiàn)有模型在行為學(xué)維度與應(yīng)用價(jià)值方面的空白。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，有效地解決了現(xiàn)有動(dòng)物模型缺乏對(duì)copd并發(fā)抑郁共病狀態(tài)的準(zhǔn)確模擬、行為學(xué)評(píng)估體系不完善以及模型重復(fù)性差、難以用于中藥復(fù)方等候選藥物篩選與機(jī)制研究的問(wèn)題。
2、為解決上述問(wèn)題本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
3、本發(fā)明的一方面，提供一種copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：
4、a)?選取spf級(jí)雄性sd大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)后，分組處理；
5、b)?在造模第1天和第14天，在吸入異氟烷麻醉?xiàng)l件下，通過(guò)改良針頭經(jīng)口腔向氣管內(nèi)滴注脂多糖lps，劑量為80～150μl，濃度為0.5～2.0mg/ml，滴注后將大鼠側(cè)臥5～30秒，再直立搖晃，使lps在肺內(nèi)均勻布散；
6、c)?在滴注lps之外的其它天，將大鼠置于煙熏箱中，暴露于每日10～30支去過(guò)濾嘴香煙產(chǎn)生的煙霧中，每次30～90分鐘，煙熏持續(xù)2～6周；
7、d)?在完成上述聯(lián)合造模后，采用行為學(xué)試驗(yàn)評(píng)估大鼠的抑郁狀態(tài)，所述試驗(yàn)包括懸尾試驗(yàn)、曠場(chǎng)試驗(yàn)和糖水偏嗜試驗(yàn)；
8、e)?將經(jīng)行為學(xué)評(píng)估后的大鼠進(jìn)行灌胃或腹腔注射給藥，用于藥效篩選或作用機(jī)制研究。
9、優(yōu)選的，所述脂多糖lps的滴注體積為120μl，濃度為1mg/ml。
10、優(yōu)選的，大鼠在滴注lps后側(cè)臥保持10～20秒。
11、優(yōu)選的，每日煙熏所用香煙數(shù)量為20支，煙熏時(shí)間為1小時(shí)，煙熏周期為4周。
12、優(yōu)選的，行為學(xué)評(píng)估包括：
13、a)?懸尾試驗(yàn)：記錄5分鐘內(nèi)不動(dòng)時(shí)間；
14、b)?曠場(chǎng)試驗(yàn)：記錄大鼠在開(kāi)放空間中移動(dòng)距離和靜止時(shí)間；
15、c)?糖水偏嗜試驗(yàn)：評(píng)估其對(duì)糖水?dāng)z入比例變化以反映快感缺失。
16、本發(fā)明的另一方面，通過(guò)copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型的構(gòu)建方法構(gòu)建獲得的copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型，所述copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型同時(shí)具有肺部慢性阻塞性炎癥的病理特征與抑郁樣行為學(xué)表現(xiàn)，所述抑郁樣行為學(xué)表現(xiàn)包括糖水?dāng)z入減少、懸尾試驗(yàn)中靜止時(shí)間延長(zhǎng)和抓力降低，且表現(xiàn)出體重下降的生理狀態(tài)異常。
17、本發(fā)明的另一方面，通過(guò)copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型的構(gòu)建方法構(gòu)建獲得的copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型在篩選治療copd并發(fā)抑郁癥狀的候選藥物中的應(yīng)用。
18、優(yōu)選的，其中所述候選藥物包括參芪調(diào)腎方及其與nlrp3通路抑制劑mcc950的聯(lián)合用藥組分。
19、本發(fā)明的另一方面，通過(guò)copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型的構(gòu)建方法構(gòu)建獲得的copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型在中藥復(fù)方、天然產(chǎn)物或nlrp3通路抑制劑的藥理機(jī)制研究與藥物篩選中的應(yīng)用。
20、本發(fā)明技術(shù)路線明確，設(shè)計(jì)科學(xué)合理，實(shí)驗(yàn)操作步驟標(biāo)準(zhǔn)化程度高，具有良好的重復(fù)性與實(shí)用性，和現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：
21、1、本發(fā)明通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用lps滴注與香煙煙熏手段，在較短時(shí)間內(nèi)誘導(dǎo)大鼠同時(shí)出現(xiàn)肺部慢性阻塞性炎癥與穩(wěn)定的抑郁樣行為學(xué)特征，構(gòu)建效率高、重復(fù)性好；
22、2、所采用的行為學(xué)評(píng)估體系包括懸尾試驗(yàn)、曠場(chǎng)試驗(yàn)與糖水偏嗜試驗(yàn)，均為國(guó)際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法，評(píng)價(jià)維度豐富，可有效反映大鼠快感缺失、運(yùn)動(dòng)意愿減退等抑郁狀態(tài)表現(xiàn)；
23、3、所建立的模型不僅可用于治療copd并發(fā)抑郁癥狀候選藥物的藥效驗(yàn)證，也適用于中藥復(fù)方、天然產(chǎn)物或靶向炎癥通路的小分子化合物的作用機(jī)制研究，應(yīng)用價(jià)值廣泛；
24、4、整體造模流程清晰、實(shí)驗(yàn)周期適中，實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求不高，便于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化操作。
1.一種copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述脂多糖lps的滴注體積為120μl，濃度為1mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，大鼠在滴注lps后側(cè)臥保持10～20秒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，每日煙熏所用香煙數(shù)量為20支，煙熏時(shí)間為1小時(shí)，煙熏周期為4周。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，行為學(xué)評(píng)估包括：
6.根據(jù)權(quán)利要求1構(gòu)建獲得的copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型，其特征在于，所述copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型同時(shí)具有肺部慢性阻塞性炎癥的病理特征與抑郁樣行為學(xué)表現(xiàn)，所述抑郁樣行為學(xué)表現(xiàn)包括糖水?dāng)z入減少、懸尾試驗(yàn)中靜止時(shí)間延長(zhǎng)和抓力降低，且表現(xiàn)出體重下降的生理狀態(tài)異常。
7.權(quán)利要求6所述的copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型在篩選治療copd并發(fā)抑郁癥狀的候選藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所述候選藥物包括參芪調(diào)腎方及其與nlrp3通路抑制劑mcc950的聯(lián)合用藥組分。
9.權(quán)利要求6所述的copd并發(fā)抑郁動(dòng)物模型在中藥復(fù)方、天然產(chǎn)物或nlrp3通路抑制劑的藥理機(jī)制研究與藥物篩選中的應(yīng)用。