本發(fā)明涉及對(duì)自然殺傷(nk)細(xì)胞和nk細(xì)胞系進(jìn)行修飾，以產(chǎn)生具有更具細(xì)胞毒性表型的它們的衍生物。此外，本發(fā)明涉及產(chǎn)生修飾的nk細(xì)胞和nk細(xì)胞系的方法、含有所述細(xì)胞和細(xì)胞系的組合物以及所述細(xì)胞、細(xì)胞系和組合物在癌癥治療中的用途。
背景技術(shù)：
1、通常，免疫細(xì)胞在觸發(fā)免疫反應(yīng)導(dǎo)致靶細(xì)胞死亡之前，需要靶細(xì)胞通過(guò)主要組織相容性復(fù)合體(mhc)呈遞抗原。這使得不呈遞mhc?i類的癌細(xì)胞能夠逃避大多數(shù)免疫反應(yīng)。
2、然而，在缺乏mhc?i類表達(dá)的情況下，nk細(xì)胞能夠識(shí)別癌細(xì)胞。因此，它們?cè)谌梭w防御癌癥方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。
3、另一方面，在某些情況下，癌細(xì)胞展現(xiàn)出通過(guò)在nk細(xì)胞膜上表達(dá)結(jié)合抑制性受體的配體來(lái)抑制nk細(xì)胞的細(xì)胞毒活性的能力。抗癌能力可能涉及這些因素和其他因素之間的平衡。
4、在本文中，細(xì)胞毒性是指免疫效應(yīng)細(xì)胞(例如nk細(xì)胞)例如通過(guò)釋放細(xì)胞溶解化合物或通過(guò)結(jié)合癌細(xì)胞膜上的受體并誘導(dǎo)所述癌細(xì)胞凋亡來(lái)誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡的能力。細(xì)胞毒性不僅受誘導(dǎo)細(xì)胞溶解化合物釋放的信號(hào)的影響，還受抑制其釋放的信號(hào)影響。因此，如上所述，細(xì)胞毒性的增加將導(dǎo)致更有效地殺死癌細(xì)胞，癌細(xì)胞抑制nk細(xì)胞毒活性的可能性更小。
5、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的含sh2蛋白(cis)表達(dá)由某些生長(zhǎng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)，是自然殺傷(nk)細(xì)胞中白細(xì)胞介素-15(il-15)信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵負(fù)調(diào)控因子。cis由cish基因編碼。當(dāng)維持在低細(xì)胞因子濃度時(shí)，cish表達(dá)與受限的細(xì)胞擴(kuò)增和對(duì)多個(gè)癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒活性降低有關(guān)。因此，最近報(bào)道敲除nk細(xì)胞中的cish表達(dá)有利于nk細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性(zhu?etal.?2020?“metabolic?reprograming?via?deletion?of?cish?in?human?ipsc-derivednk?cells?promotes?in?vivo?persistence?and?enhances?anti-tumor?activity”?cell:vol.?27(2):?pp.?224-237)。也就是說(shuō)，與所有基因修飾一樣，在某些情況下，這種修飾比其他修飾更有益，利用基因修飾細(xì)胞的療法必須有堅(jiān)實(shí)的科學(xué)基礎(chǔ)。
6、作為基于細(xì)胞的癌癥療法的替代方案，也可使用其他選擇，如小分子療法和抗體療法。
7、然而，需要新的且改進(jìn)的癌癥療法，利用不同的策略(例如，基于細(xì)胞、基于抗體、小分子等)來(lái)最大限度地靶向和殺死癌細(xì)胞。
8、本發(fā)明的目的是提供靶向具有更具細(xì)胞毒性表型和/或持久表型的癌細(xì)胞的nk細(xì)胞和nk細(xì)胞系。另一個(gè)目的是提供用于產(chǎn)生修飾的nk細(xì)胞和nk細(xì)胞系的方法、含有這些細(xì)胞或細(xì)胞系的組合物及其在療法中，具體地在癌癥治療中的用途。更具體的實(shí)施方案旨在為已識(shí)別的癌癥提供治療。具體實(shí)施方案旨在以協(xié)同方式組合兩種或多種療法，以增強(qiáng)修飾細(xì)胞的細(xì)胞毒性和持久性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本文提供了具有更具細(xì)胞毒性表型的修飾nk細(xì)胞和nk細(xì)胞系，以及制備這些細(xì)胞和細(xì)胞系的方法。還提供了修飾的nk細(xì)胞和nk細(xì)胞系的組合物，以及所述組合物用于治療癌癥的用途。如上所述，在本文中細(xì)胞毒性是指殺死癌細(xì)胞。
2、本發(fā)明提供了與免疫調(diào)節(jié)藥物組合的nk細(xì)胞和nk細(xì)胞系，其用于治療癌癥，其中nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系經(jīng)修飾以具有降低的cish表達(dá)。
3、根據(jù)本發(fā)明，在一般和具體方面，進(jìn)一步提供了使用與修飾的nk細(xì)胞和細(xì)胞系組合的免疫調(diào)節(jié)藥物來(lái)治療癌癥(例如血癌)的方法，其中修飾的nk細(xì)胞和細(xì)胞系被改造為具有降低的cis功能。可選地，此外，細(xì)胞缺乏一種或多種檢查點(diǎn)抑制性受體的表達(dá)，表達(dá)一種或多種trail配體，表達(dá)一種或多種嵌合抗原受體，表達(dá)一種或多種促生長(zhǎng)細(xì)胞因子和/或表達(dá)一種或多種fc受體。
4、根據(jù)本發(fā)明具體可治療的疾病包括癌癥、實(shí)體癌和血癌，更具體地是多發(fā)性骨髓瘤。特別是可以治療人類的腫瘤和癌癥。本文中所提及的腫瘤包括贅生物(neoplasms)。
1.一種與小腦蛋白e3連接酶調(diào)節(jié)藥物(celmod)或免疫調(diào)節(jié)酰亞胺藥物(imid)組合的自然殺傷(nk)細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其用于治療癌癥，其中與未經(jīng)修飾的相同nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系相比，所述nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系經(jīng)修飾以具有降低的cish表達(dá)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中所述imid選自來(lái)那度胺(lenalidomide)和伊伯多胺(iberdomide)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中所述imid為伊伯多胺。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中所述修飾為基因敲低cish的表達(dá)。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中所述修飾為基因敲除cish的表達(dá)。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中與未經(jīng)修飾的相同nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系相比，cish表達(dá)降低了至少50%。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中與未經(jīng)修飾的相同nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系相比，cish表達(dá)降低了至少90%。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，所述nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系被進(jìn)一步修飾以表達(dá)il-15，優(yōu)選以可溶性形式(sil-15)表達(dá)。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，所述nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系被進(jìn)一步修飾以表達(dá)對(duì)trail死亡受體具有增加的親和力的trail變體。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，所述nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系被進(jìn)一步修飾以表達(dá)結(jié)合her2、tim-3、cd19、cd38、muc-1、cll-1、slamf7和/或cd96的嵌合抗原受體(car)。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中所述癌癥是血癌。
12.根據(jù)權(quán)利要求12所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中所述血癌選自多發(fā)性骨髓瘤、急性髓細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至權(quán)利要求11中任一項(xiàng)所述的nk細(xì)胞或nk細(xì)胞系，其中所述癌癥是實(shí)體癌。
14.一種藥物組合物，其包含imid或celmod和nk細(xì)胞，其中敲除了所述nk細(xì)胞中的cish表達(dá)。